超敏反应性疾病的免疫学检测讲解学习.ppt

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1、超敏反应性疾病的免疫学检测一、血清总一、血清总IgE的检测的检测 实验目的实验目的1.掌握掌握ELISA双抗体夹心法测定血清总双抗体夹心法测定血清总IgE的方法。的方法。2.熟悉熟悉IgE在在I型超敏反应中的作用和临床意义。型超敏反应中的作用和临床意义。EE EE洗涤洗涤待测抗原待测抗原包被抗体包被抗体酶标抗体酶标抗体实验原理实验原理 ELISA双抗体夹心法双抗体夹心法 实验材料实验材料1.羊抗人羊抗人IgE抗体、抗体、HRP标记的羊抗人标记的羊抗人IgE抗体、抗体、IgE校准品、校准品、TMB（四甲基联苯胺）。（四甲基联苯胺）。2.标本：待测血清。标本：待测血清。3.包被缓冲液、洗涤缓冲液、

2、反应终止液（包被缓冲液、洗涤缓冲液、反应终止液（2 mol/L H2SO4）等。）等。4.酶标板、微量加样器、酶标仪、温箱等。酶标板、微量加样器、酶标仪、温箱等。1.包被羊抗人包被羊抗人IgE抗体抗体（4过夜，洗涤）过夜，洗涤）2.封闭（封闭（0.5%的小牛血清或牛血清清蛋白）的小牛血清或牛血清清蛋白）3.加样（梯度稀释的加样（梯度稀释的IgE校准品、待测血清、阳性对照、校准品、待测血清、阳性对照、阴性对照、空白对照阴性对照、空白对照）4.37温育温育2h，洗涤，洗涤 5.加入工作浓度的加入工作浓度的HRP标记的羊抗人标记的羊抗人IgE 6.37温育温育2h，洗涤，洗涤 EE EE操作步骤操作

3、步骤8.加入终止液，终止反应加入终止液，终止反应 9.492nm波长测各孔吸光度值（波长测各孔吸光度值（A值）值）7.加入底物，加入底物，37温育温育15分钟分钟 注意事项注意事项1.包被抗体量、酶标抗体的加入量等可影响测定结果，需预先摸索最包被抗体量、酶标抗体的加入量等可影响测定结果，需预先摸索最佳条件。佳条件。2.洗涤要彻底，必要时可加大洗涤液的浓度。洗涤要彻底，必要时可加大洗涤液的浓度。3.结果判断须在结果判断须在10分钟内完成。分钟内完成。4.IgE含量与吸光度值在一定范围内呈线性关系，如果样品的测定结含量与吸光度值在一定范围内呈线性关系，如果样品的测定结果超出此范围，应对样品进行适当

4、的稀释，使样品中果超出此范围，应对样品进行适当的稀释，使样品中IgE的浓度的浓度在线性范围内再行测定。在线性范围内再行测定。结果分析结果分析 以以IgE校准品的参考含量（校准品的参考含量（IU/ml）为横坐标，以对应）为横坐标，以对应A值为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的值为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的A值，在标准值，在标准曲线中查出稀释后样品中曲线中查出稀释后样品中IgE的浓度，再乘以稀释倍数，即的浓度，再乘以稀释倍数，即为原样品中为原样品中IgE的浓度。的浓度。1IU=2.4ng。临床意义临床意义 血清总血清总IgE水平一般用国际单位（水平一般用国际单位（IU）或）或ng表示，

5、表示，1IU2.4ng，相当于，相当于WHO标准标准冻干血清制剂冻干血清制剂0.00928mg内所含的内所含的IgE量。正常人群量。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐带龄、检测方法及取样标准等因素的影响，以致各家报道的正常值相差甚远。婴儿脐带血血IgE水平小于水平小于0.5IU/ml，出生后随年龄增长而逐渐升高，出生后随年龄增长而逐渐升高，12岁时达成人水平。成人岁时达成人水平。成人血清血清IgE水平约在水平约在20200IU/ml之间，一般认为大于之间，一般认为大于333IU/ml（800

6、ng/ml）时为异常）时为异常升高。升高。IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。上述疾病时时IgE升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达升高的程度并不一致，在过敏性支气管肺曲菌病时最为显著，其值可达500020000ng/ml，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总，除了此病和特应性皮炎以及在花粉季节之外，任何血清总IgE

7、水平大于水平大于5000ng/ml的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。的患者均应考虑寄生虫感染的可能性。思考题思考题1.ELISA双抗体夹心法定量测定血清总双抗体夹心法定量测定血清总IgE的原理及的原理及应注意的问题有哪些？应注意的问题有哪些？2.测定血清总测定血清总IgE的临床意义？的临床意义？二、血清特异性二、血清特异性IgE的检测的检测 实验目的实验目的1.掌握斑点酶免疫印迹法检测掌握斑点酶免疫印迹法检测sIgE的原理和方法。的原理和方法。2.熟悉熟悉sIgE在在I型超敏反应中的作用和临床意义。型超敏反应中的作用和临床意义。实验原理实验原理 斑斑点点酶酶免免疫疫印印迹迹法法：用用NC膜膜作

8、作为为固固相相支支持持物物，检检测测区区的的不不同同区区域域包包被被有有特特异异性性的的过过敏敏原原，质质控控区区包包被被有有兔兔抗抗鼠鼠Ig抗抗体体。检检测测时时将将稀稀释释的的病病人人血血清清加加入入反反应应槽槽内内，血血清清中中的的sIgE与与NC膜膜上上的的相相应应过过敏敏原原结结合合。通通过过洗洗涤涤去去掉掉未未结结合合的的游游离离物物质质，再再加加入入酶酶标标记记的的抗抗人人IgE抗抗体体，此此抗抗体体会会与与检检测测区区NC膜膜上上的的sIgE结结合合，同同时时会会与与质质控控区区上上的的兔兔抗抗鼠鼠Ig抗抗体体结结合合。如如标标本本中中无无sIgE，酶酶标标抗抗体体不不能能结结

9、合合在在检检测测区区相相应应过过敏敏原原区区带带上上。通通过过洗洗涤涤去去掉掉未未结结合合的的标标记记物物，然然后后加加入入底底物物显显色色。通通过过显显色色区区带带确确定定血清中含有哪种血清中含有哪种sIgE，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。实验材料实验材料1.检测条检测条 包被有特异性过敏原的包被有特异性过敏原的NC膜膜2.碱性磷酸酶标记的抗人碱性磷酸酶标记的抗人IgE 3.标本稀释液标本稀释液4.碱性磷酸酶底物碱性磷酸酶底物5.浓缩洗液（浓缩洗液（10X）洗液按照洗液按照1:10倍稀释倍稀释6.标本标本 待测血清用标本稀释液按照待测血清用标本稀释液按照1

10、:10倍稀释。倍稀释。稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇稀释好的洗液将检测条要充分浸透，放在摇床上摇10分钟分钟倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应倒掉洗液，加入稀释好的测试者血清，放于摇床室温反应1.5小时小时 倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡倒掉小槽中的血清，依次加入洗液，震荡10分钟，重复三次分钟，重复三次 每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人每槽加入碱性磷酸酶标记的抗人IgE，放于摇床上室温反应，放于摇床上室温反应30分钟分钟将碱性磷酸酶标记的抗人将碱性磷酸酶标记的抗人IgE倒掉，用洗液洗三次，每次倒掉，用洗液洗三次，每次10分钟分钟 加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，

11、避光反应约加入碱性磷酸酶底物，放于摇床，避光反应约10分钟分钟 去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次去掉底物溶液，用纯水洗三次，每次5分钟分钟操作步骤操作步骤将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果将检测条放在干燥纸上，等检测条完全干燥后判定检测结果 注意事项注意事项1.不同批次的组分不可混用，且只能在效期内使用。不同批次的组分不可混用，且只能在效期内使用。2.检测标本只限于人血清、血浆。检测标本只限于人血清、血浆。3.如果样本在如果样本在3天内检测，可以保存在天内检测，可以保存在28，否则应冷，否则应冷冻保存，避免反复冻溶。冻保存，避免反复冻溶。4.如果标本含有不溶物，离心去除。溶血

12、、浑浊或含有如果标本含有不溶物，离心去除。溶血、浑浊或含有叠氮钠的标本不可用。叠氮钠的标本不可用。5.加样器枪头不可混用，避免交叉污染。加样器枪头不可混用，避免交叉污染。结果分析结果分析 通过显色区带确定血清中含有哪种通过显色区带确定血清中含有哪种sIgE，进而判断，进而判断待检者对哪种过敏原过敏。待检者对哪种过敏原过敏。临床意义临床意义 slgE测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通型超敏反应的诊断。该检测条包被有多种特异性过敏原，通过检测血浆（血清）中过敏原过检测血浆（血清）中过敏原slgE，筛查

13、待检者对何种过敏，筛查待检者对何种过敏原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。原过敏，为临床进行脱敏治疗奠定基础。小结和讨论小结和讨论1.人类人类I型超敏反应可表现为全身性超敏反应和局部性型超敏反应可表现为全身性超敏反应和局部性超敏反应两种。超敏反应两种。2.在在5类类免免疫疫球球蛋蛋白白中中，IgE是是血血清清中中含含量量最最低低，半半衰衰期期最最短短，分分解解率率最最高高，对对热热最最不不稳稳定定的的Ig。而而在在I型型超超敏反应患者体内，敏反应患者体内，IgE含量显著增高。含量显著增高。3.血血清清总总IgE的的含含量量是是由由各各种种抗抗原原IgE的的总总和和决决定定。正正常常人人血血清清

14、IgE含含量量极极微微，约约0.10.9mg/L水水平平。临临床床上上一一般般采采用用敏敏感感性性较较高高、稳稳定定性性较较好好的的化化学学发发光光免免疫疫测定法、酶联免疫测定法进行检测。测定法、酶联免疫测定法进行检测。思考题思考题1.测定血清测定血清sIgE的方法有哪些？各有何优缺点？的方法有哪些？各有何优缺点？2.测定血清测定血清sIgE的临床意义？的临床意义？实验二实验二 红细胞表面不完全抗体的检测红细胞表面不完全抗体的检测一、直接一、直接Coombs试验（试管法试验（试管法）实验目的实验目的1.掌握直接掌握直接Coombs试验的原理和操作方法。试验的原理和操作方法。2.熟悉熟悉Coom

15、bs试验的临床意义。试验的临床意义。患者红细胞患者红细胞Coombs试剂试剂检测红细胞上不完全抗体检测红细胞上不完全抗体实验原理实验原理 实验材料实验材料1.诊断试剂诊断试剂 抗球蛋白试剂；抗球蛋白试剂；2.待测患者红细胞；待测患者红细胞；3.生理盐水、小试管、吸管、离心机等。生理盐水、小试管、吸管、离心机等。操作步骤操作步骤用生理盐水配用生理盐水配5%红细胞悬液红细胞悬液取洁净小试管取洁净小试管2支，支，1管加管加1滴滴5%红细胞悬液，另一管加生理盐红细胞悬液，另一管加生理盐水作对照水作对照 在生理盐水和在生理盐水和5%红细胞悬液中分别加入诊断试剂一滴，使其红细胞悬液中分别加入诊断试剂一滴，

16、使其混匀，室温稍待片刻混匀，室温稍待片刻1000r离心离心1 min或或3000r离心离心15s。取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻摇动试管，如有凝集，取出试管先以肉眼观察有无溶血，再轻轻摇动试管，如有凝集，则为阳性结果；如无凝集，应在室温延长则为阳性结果；如无凝集，应在室温延长1530 min的反应时间，的反应时间，再离心看结果。再离心看结果。注意事项注意事项1.每次试验均须设阴、阳性对照，如阴性对照发生自凝，实每次试验均须设阴、阳性对照，如阴性对照发生自凝，实验无效。验无效。2.受检血标本必须新鲜。受检血标本必须新鲜。3.洗涤后的红细胞和器材都不能残留有血浆蛋白，以免出现洗涤后的红细胞和

17、器材都不能残留有血浆蛋白，以免出现假阴性。假阴性。4.操作过程中动作轻柔，特别是观察反应结果时，应轻轻摇操作过程中动作轻柔，特别是观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力过大。动试管，不可用力过大。5.判定结果时，溶血与凝集有同样意义。判定结果时，溶血与凝集有同样意义。6.试验后应将玻片即时放入消毒缸内。试验后应将玻片即时放入消毒缸内。结果分析结果分析 生理盐水对照不应发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。生理盐水对照不应发生凝集，为均匀浑浊的乳状液。在红细胞悬液中，如红细胞凝集成片状，边缘皱褶如花在红细胞悬液中，如红细胞凝集成片状，边缘皱褶如花边状或边缘松散为阳性。如与对照相同，为阴性。边状或边缘松

18、散为阳性。如与对照相同，为阴性。临床意义临床意义 直接直接Coombs试验用于检测患者红细胞上不完全抗体，试验用于检测患者红细胞上不完全抗体，Coombs试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素试验阳性可见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性综合征、药物诱发的免疫性溶血性贫血、新生儿同种免疫性溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风溶血病、某些高球蛋白血症患者，如系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。湿、恶性肿瘤等。思考题思考题 直接直接Coombs试验的原理及临床意义？试验的原理及临床意义？二、间接二、间接Coombs试验（微柱凝

19、胶法试验（微柱凝胶法）实验目的实验目的1.掌握间接掌握间接Coombs试验的原理和操作方法。试验的原理和操作方法。2.熟悉熟悉Coombs试验的临床意义。试验的临床意义。患者血清靶红细胞致敏红细胞Coombs试剂检测血清中的抗红细胞抗体检测血清中的抗红细胞抗体实验原理实验原理 实验材料实验材料1.微柱凝胶卡微柱凝胶卡 内含抗球蛋白试剂；内含抗球蛋白试剂；2.筛选红细胞筛选红细胞 一般由一般由23人份人份O型红细胞组成一套试剂型红细胞组成一套试剂3.待测患者血清；待测患者血清；4.生理盐水、小试管、吸管、试管架、离心机、生理盐水、小试管、吸管、试管架、离心机、温箱等。温箱等。操作步骤操作步骤撕开

20、微柱凝胶卡密封纸，标记撕开微柱凝胶卡密封纸，标记加加1%筛选红细胞筛选红细胞50l及受检者血清及受检者血清25l37孵育孵育15min离心机离心离心机离心10min，1000r/min 观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳性观察结果，如红细胞悬浮在反应管顶部或凝胶中，则为阳性结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为阴结果；反之，如红细胞沉于凝胶底部（管底尖部），则为阴性结果。性结果。注意事项注意事项1.反应卡封口有损坏，管中干涸或有气泡时，不可使用。使用前必反应卡封口有损坏，管中干涸或有气泡时，不可使用。使用前必须清楚标记试剂卡须清楚标记试剂卡,一定要空离心一次后备用。

21、一定要空离心一次后备用。2.不要将试剂卡长期保存不要将试剂卡长期保存4，在此温度下，试剂卡中液体蒸发凝集，在此温度下，试剂卡中液体蒸发凝集于封口铝箔下，胶易干涸，应将试剂卡保存在于封口铝箔下，胶易干涸，应将试剂卡保存在1822。3.细胞浓度为细胞浓度为0.8%1%，浓度过高或过低，均可减弱凝集强度。，浓度过高或过低，均可减弱凝集强度。4.纤维蛋白可吸附部分红细胞，导致假阳性结果。纤维蛋白可吸附部分红细胞，导致假阳性结果。5.细菌污染、不适宜储存或过期都能使试剂失效。细菌污染、不适宜储存或过期都能使试剂失效。6.须设阴、阳性对照。须设阴、阳性对照。7.微柱凝胶管中出现溶血现象，特别提示为红细胞抗

22、原抗体阳性反微柱凝胶管中出现溶血现象，特别提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其它原因所致溶血，对此标本一定要认真分析。应，也不排除其它原因所致溶血，对此标本一定要认真分析。结果分析结果分析-100%的红细胞沉在微管的底部的红细胞沉在微管的底部+/-100%的红细胞沉在微管的下端的红细胞沉在微管的下端1/3之内之内1+80%的红细胞沉在微管的下端的红细胞沉在微管的下端2/3之内之内2+80%的红细胞沉在微管的上端的红细胞沉在微管的上端2/3之内之内3+80%的红细胞沉在微管的上端的红细胞沉在微管的上端1/3之内之内4+凝集的细胞全部处于微管的顶部凝集的细胞全部处于微管的顶部d.p.双群双群H

23、emo.溶血溶血反应格局及判断标准反应格局及判断标准 临床意义临床意义 间接间接Coombs试验用于检测患者游离血清中的不完全试验用于检测患者游离血清中的不完全抗体。此实验多用于检测母体抗体。此实验多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生，亦可对红细胞不相容发现和避免新生儿溶血症的发生，亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。的输血所产生的血型抗体进行检测。小结和讨论小结和讨论1.检检测测抗抗红红细细胞胞不不完完全全抗抗体体的的常常用用方方法法为为抗抗球球蛋蛋白白试试验验，又又称称为为Coombs试试验验，直直接接Coombs试试验验用用于于

24、检检测测患患者者红红细细胞胞上上不不完完全全抗抗体体；间间接接Coombs试试验验用用于于检检测测患患者者游游离血清中的不完全抗体。离血清中的不完全抗体。2.Coombs试试验验阳阳性性可可见见于于自自身身免免疫疫性性溶溶血血性性贫贫血血、冷冷凝凝集集素素综综合合征征、药药物物诱诱发发的的免免疫疫性性溶溶血血性性贫贫血血、新新生生儿儿同同种种免免疫疫性性溶溶血血病病、某某些些高高球球蛋蛋白白血血症症患患者者，如如系系统统性性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤等。思考题思考题 1.新生儿溶血症发生的机制是什么？新生儿溶血症发生的机制是什么？2.微柱凝胶免疫试验可能出现的结果

25、有哪些，试分微柱凝胶免疫试验可能出现的结果有哪些，试分析原因？析原因？实验三实验三 循环免疫复合物的检测循环免疫复合物的检测 实验目的实验目的1.掌握掌握PEG比浊法检测循环免疫复合物的原理和方比浊法检测循环免疫复合物的原理和方法。法。2.熟悉循环免疫复合物检测的临床意义。熟悉循环免疫复合物检测的临床意义。实验原理实验原理 本本试试验验是是检检测测抗抗原原非非特特异异性性循循环环免免疫疫复复合合物物的的一一种种方方法法。PEG是是环环氧氧乙乙烷烷和和水水的的多多聚聚物物，为为一一种种不不带带电电荷荷的的直直链链大大分分子子多多糖糖。终终浓浓度度为为3%4%的的PEG能能相相对对选选择择性性地地

26、沉淀沉淀CIC。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。用分光光度计测定浊度，反应沉淀物含量。实验材料实验材料1.pH8.4 0.1mol/L 硼硼酸酸盐盐缓缓冲冲液液（BB）硼硼砂砂4.29g、硼硼酸酸3.40g，蒸蒸馏馏水水加加至至1000ml，溶溶解解后后用用G3或或G4号号玻玻璃璃滤滤器过滤；器过滤；2.PEG-NaF稀稀释释液液 PEG6000 40.0g、NaF 10.0g、BB加加至至1000ml，溶解后用，溶解后用G3或或G4号玻璃滤器过滤；号玻璃滤器过滤；3.待检血清、微量加样器、试管、吸管及橡皮滴头等；待检血清、微量加样器、试管、吸管及橡皮滴头等；4.分光光度计。分光光度计。

27、加入物加入物测试管测试管对照管对照管BB（ml）2.0PEG-NaF稀释液（稀释液（ml）2.0待检血清（待检血清（ml）0.20.237水浴水浴60min分光光度计测分光光度计测A495nm值值 操作步骤操作步骤 注意事项注意事项1.4%PEG能沉淀较小的能沉淀较小的CIC，2%PEG只能沉淀较大的只能沉淀较大的CIC，但浓度大于，但浓度大于5%，PEG选择性沉淀选择性沉淀CIC的特性即的特性即行消失，导致假阳性的出现。行消失，导致假阳性的出现。2.应注意实验温度变化对结果的影响，离心速度与时间也应注意实验温度变化对结果的影响，离心速度与时间也应严格掌握。应严格掌握。3.低密度脂蛋白可引起浊

28、度增加，故应空腹采血。低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹采血。4.高高球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性。球蛋白血症以及血清标本反复冻融，均易造成假阳性。结果分析结果分析 待待检检血血清清浊浊度度值值=（测测定定管管吸吸光光度度-对对照照管管吸吸光光度度）100，以大于正常人浊度值均值加，以大于正常人浊度值均值加2个标准差为个标准差为CIC阳性。阳性。参考值：参考值：正正常常人人血血清清CIC的的A值值为为4.32.0，以以8.3为为免免疫疫复复合合物物阳性。阳性。临床意义临床意义 循循环环免免疫疫复复合合物物（Circulationimmunecomplex，CIC）又又称称可

29、可溶溶性性免免疫疫复复合合物物，分分子子量量为为50万万100万万，沉沉降降系系数数8.819S，它它不不易易被被吞吞噬噬细细胞胞吞吞噬噬，又又不不能能经经肾肾小小球球排排出出，可可较较长长时时间间在在血血液液中中循循环环，一一旦旦大大量量循循环环免免疫疫复复合合物物沉沉积积于于组组织织中中，则则引引起起组组织织损损伤伤及及相相关关的的免免疫疫复复合合物病。物病。CIC阳性常见于：阳性常见于：1.部分自身免疫性疾病，如部分自身免疫性疾病，如SLE，类风湿关节炎等；，类风湿关节炎等；2.膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎；膜增殖性肾炎，链球菌感染后肾炎；3.传染病，如慢性乙型肝炎，疟疾，麻风等；传染

30、病，如慢性乙型肝炎，疟疾，麻风等；4.恶性肿瘤。恶性肿瘤。小结和讨论小结和讨论1.循循环环免免疫疫复复合合物物的的检检测测有有助助于于辅辅助助诊诊断断某某些些免免疫疫复复合合物物疾疾病病，如如血血清清病病、SLE、慢慢性性活活动动性性肝肝炎炎时时，CIC往往往往较较高高；此此外外，对对CIC的的动动态态检检测测有有助助于于监监视视某某些些疾疾病病的的发发展展，协协助助判判断断疗疗效效和和预预后后；有有助助于探讨研究于探讨研究III型变态反应疾病的发病机制。型变态反应疾病的发病机制。2.此此法法快快速速简简便便，但但特特异异性性较较差差，仅仅适适于于筛筛选选。CIC检检测测方方法法较较多多，原原

31、理理各各不不相相同同，结结果果也也不不尽尽一一样样，因因此此最最好好采采用用多多种种方方法法同同时时进进行行，以以提提高高阳阳性性检检出出率率。由由于于在在病病理理状状态态下下往往往往是是单单一一种种类类抗抗原原抗抗体体复复合合物物增增高高，这这种种增增高高只只有有达达到到影影响响总总CIC水水平平才才能能被被检检出出，所所以以有有时检测抗原特异性时检测抗原特异性CIC更为重要。更为重要。思考题思考题 循环免疫复合物检测的临床意义？循环免疫复合物检测的临床意义？病案讨论病案讨论 超敏反应性疾病超敏反应性疾病实验目的实验目的 通过病案讨论、提出问题、应用免疫学技术检测有通过病案讨论、提出问题、应

32、用免疫学技术检测有关免疫学指标，将免疫学技术应用于临床实践，对临床关免疫学指标，将免疫学技术应用于临床实践，对临床疾病做出诊断或医疗建议，进而对有关问题产生深入研疾病做出诊断或医疗建议，进而对有关问题产生深入研究的学习动机。究的学习动机。病案讨论一病案讨论一 患者王患者王X，女，女28岁。因上呼吸道感染前来我院就诊。按医嘱作青霉岁。因上呼吸道感染前来我院就诊。按医嘱作青霉素皮试阴性，给静滴青霉素素皮试阴性，给静滴青霉素800万万U加加5%GNS250ml。患者上午。患者上午9点左右点左右开始输液，约开始输液，约1点点40分左右输液毕，无任何不适反应，下午分左右输液毕，无任何不适反应，下午3点左

33、右患者点左右患者感觉全身不适，似有好多虫子、蚂蚁在身上爬，全身紧困，随即出现心感觉全身不适，似有好多虫子、蚂蚁在身上爬，全身紧困，随即出现心慌等不适前来复诊。一般尚可，痛苦面容，测慌等不适前来复诊。一般尚可，痛苦面容，测BP100/70mmHg、P128次次/分、心电监护提示频繁室早、分、心电监护提示频繁室早、R30次次/分、明显缺氧症。遵医嘱给肌注肾分、明显缺氧症。遵医嘱给肌注肾上腺素上腺素1ml，5%GNS250ml，地塞米松，地塞米松10mg静滴；第二组静滴；第二组10%GNS250ml，利多卡因，利多卡因100mg，给氧等处理后症状仍无明显改善转，给氧等处理后症状仍无明显改善转入入院治

34、疗，入院后给抗过敏、抗心律失常治疗，一周后病人自觉症状入入院治疗，入院后给抗过敏、抗心律失常治疗，一周后病人自觉症状消失，痊愈出院。消失，痊愈出院。问题：问题：1.1.该患者有可能属于哪型超敏反应？该患者有可能属于哪型超敏反应？2.2.如何进行免疫学诊断？如何进行免疫学诊断？病案讨论二病案讨论二 第一胎足月儿，顺产无窒息，体重第一胎足月儿，顺产无窒息，体重3200克，生后母乳克，生后母乳喂养。第喂养。第2天出现黄疸，第天出现黄疸，第3天加重，测总胆红素天加重，测总胆红素18mg/dl，患儿精神较差，有贫血貌。体查：除黄疸外，无其他阳性患儿精神较差，有贫血貌。体查：除黄疸外，无其他阳性体征。母亲

35、为体征。母亲为Rh阴性血型，胎儿为阴性血型，胎儿为Rh阳性血型。阳性血型。问题：问题：1.1.如何进行诊断和鉴别诊断？如何进行诊断和鉴别诊断？2.2.还须做哪些实验室检查？还须做哪些实验室检查？病案讨论三病案讨论三 患患者者何何X，女女，19岁岁，自自3年年前前有有间间断断关关节节疼疼痛痛，曾曾服服用用解解热热止止痛痛的的西西药药无无明明显显好好转转，半半年年前前出出现现面面部部红红斑斑，发发热热，关关节节疼疼痛痛加加重重，诊诊断断为为“系系统统性性红红斑斑狼狼疮疮”，应应用用强强的的松松及及环环磷磷酰酰胺胺等等药药物物治治疗疗，半半年年来来面面部部红红斑斑时时轻轻时时重重，就就诊诊时时口口服

36、服强强的的松松每每日日15mg，面面部部蝶蝶形形红红斑斑呈呈暗暗红红色色，双双手手红红斑斑色色鲜鲜，自自觉觉发发热热，五五心心烦烦热热，体体温温正正常常，口口干干咽咽燥燥，失失眠眠盗盗汗汗，口口腔腔溃溃疡疡，脱脱发发，疲疲乏乏，多多关关节节疼疼痛痛，下下肢肢皮皮下下见见数数个个紫紫斑斑，刷刷牙牙时时偶偶有有牙牙龈龈出出血血，腰腰部部有有酸酸痛痛感感，饮饮食食及及二二便便正正常常，月月经经量量少少，色色淡淡，舌舌淡淡红红，苔苔薄薄黄黄，脉脉弦弦细细，心心肺肺无无明明显显阳阳性性体体征征。初初步步判判断断为为III型型超超敏敏反反应应。化化验验血血红红蛋蛋白白103g/L，血血白白细细胞胞5.01

37、09/L，血血小小板板60109/L，尿尿蛋蛋白白+，24小小时时尿尿蛋蛋白白定定量量3.0g，尿尿中中红红细细胞胞+，血血沉沉34mm/h，肝肝肾肾功功能能正正常常，抗抗核核抗抗体体阳阳性性，滴滴度度为为1:160，抗抗Sm抗抗体体阳阳性性，血血免免疫疫球球蛋蛋白白系系在在正正常常范范围围，补补体体C3稍稍低低于正常。于正常。问题：试分析还须做哪些实验室检查以进一步明确诊断？问题：试分析还须做哪些实验室检查以进一步明确诊断？病案讨论四病案讨论四 女女性性，59岁岁，间间断断咳咳嗽嗽、咳咳痰痰5年年，加加重重伴伴咯咯血血2个个月月。患患者者5年年前前受受凉凉后后低低热热、咳咳嗽嗽、咳咳白白色色

38、粘粘痰痰，给给予予抗抗生生素素及及祛祛痰痰治治疗疗，1个个月月后后症症状状不不见见好好转转，体体重重逐逐渐渐下下降降，后后拍拍胸胸片片诊诊为为“浸浸润润型型肺肺结结核核”，肌肌注注链链霉霉素素1个个月月，口口服服利利福福平平、雷雷米米封封3个个月月，症症状状逐逐渐渐减减轻轻，遂遂自自行行停停药药，此此后后一一直直咳咳嗽嗽，少少量量白白痰痰，未未再再复复查查胸胸片片。2个个月月前前劳劳累累后后咳咳嗽嗽加加重重，少少量量咯咯血血伴伴低低热热、盗盗汗汗、胸胸闷闷、乏乏力力又又来来诊诊。体体查查：两两上上肺肺呼呼吸吸音音稍稍减减低低，并并闻闻及及少少量量湿湿罗罗音音，心心叩叩不不大大，心心率率94次次

39、/分分，律齐，无杂音。结核菌素皮试阳性。律齐，无杂音。结核菌素皮试阳性。问题：问题：1 1、该患者属于哪一型超敏反应？、该患者属于哪一型超敏反应？2 2、还须做哪些实验室检查？、还须做哪些实验室检查？病案讨论提示病案讨论提示病案讨论一：病案讨论一：1.该患者属于该患者属于I型超敏反应。型超敏反应。2.免疫学诊断免疫学诊断 分为体内检测（如皮肤试验）和体外分为体内检测（如皮肤试验）和体外IgE测定，详见实验一和临床见习。测定，详见实验一和临床见习。病案讨论二：病案讨论二：1.诊断和鉴别诊断诊断和鉴别诊断（1）生理性黄疸：生后）生理性黄疸：生后23d出现，出现，45d达到高峰，总胆红素值达到高峰，

40、总胆红素值12.9mg/dl，710d消退。消退。本例特点：总胆红素本例特点：总胆红素18mg/dl，超过峰值。，超过峰值。（2）感染性黄疸：先天感染：查血）感染性黄疸：先天感染：查血“TORCH”后天感染：有没有感染病灶后天感染：有没有感染病灶 本例无症状、无感染病灶、母亲无感染史，可排除感染性黄疸。本例无症状、无感染病灶、母亲无感染史，可排除感染性黄疸。因胎儿总胆红素因胎儿总胆红素18mg/dl，精神较差，有贫血貌，母亲为，精神较差，有贫血貌，母亲为Rh阴性血型，阴性血型，胎儿为胎儿为Rh阳性血型。阳性血型。是否为血型不合引起的新生儿溶血？是否为血型不合引起的新生儿溶血？2.实验室检查实验

41、室检查（1）血常规）血常规（2）Rh抗体检测抗体检测（3）直接）直接Coombs试验和间接试验和间接Coombs试验（须检测母亲血清中试验（须检测母亲血清中IgG抗体效价）抗体效价）病案讨论三：病案讨论三：实验室检查：实验室检查：1.血常规血常规2.尿常规尿常规3.肝、肾功能、腹部肝、肾功能、腹部B超超4.ANA 谱及其他免疫抗体检查谱及其他免疫抗体检查5.血清免疫球蛋白，补体血清免疫球蛋白，补体C3、C4检查检查6.循环免疫复合物检测并结合局部免疫复合物的免疫组化检循环免疫复合物检测并结合局部免疫复合物的免疫组化检测结果以明确病变是否与测结果以明确病变是否与III型超敏反应有关。型超敏反应有

42、关。病案讨论四：病案讨论四：该患者属于该患者属于IV型超敏反应。型超敏反应。实验室检查：实验室检查：1.X线胸片线胸片 2.化学发光法测结核分枝杆菌化学发光法测结核分枝杆菌RNA3.痰找结核菌，必要时经纤维支气管镜取分泌物找结核菌，支气痰找结核菌，必要时经纤维支气管镜取分泌物找结核菌，支气管内膜活检，血清结核抗体检测。管内膜活检，血清结核抗体检测。4.化验：血常规、化验：血常规、ESR、尿常规、尿常规 临床见习临床见习 临床常用超敏反应性疾病临床常用超敏反应性疾病 免疫学检测项目与临床应用免疫学检测项目与临床应用实验目的实验目的 掌握各型超敏反应常用的免疫学检测项掌握各型超敏反应常用的免疫学检

43、测项目及临床应用目及临床应用一、一、I I型超敏反应免疫学检测项目及临床应用型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1.I型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目2.临床应用临床应用（1）寻找变应原：）寻找变应原：（2）预防药物或疫苗过敏：）预防药物或疫苗过敏：（3）评价宿主细胞免疫状态：）评价宿主细胞免疫状态：（4）传染病的诊断：）传染病的诊断：二、二、IIII型超敏反应免疫学检测项目及临床应用型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1.II型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目2.临床应用临床应用 通过检测孕妇血清或胎儿羊水通过检测孕妇血清或胎儿羊水Rh抗体可

44、防抗体可防止止Rh血型不合所致死胎或新生儿溶血症的发生。血型不合所致死胎或新生儿溶血症的发生。Coombs试验临床应用同前。试验临床应用同前。三、三、IIIIII型超敏反应免疫学检测项目及临床应用型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1.III型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目2.临床应用临床应用 抗原特异性免疫复合物检测方法的优点是特异性抗原特异性免疫复合物检测方法的优点是特异性高，通过检测可以了解引起免疫复合物病的抗原，但高，通过检测可以了解引起免疫复合物病的抗原，但在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚在大多数情况下，免疫复合物中的抗原性质不太清楚或非常复杂

45、，所以抗原特异性方法并不常用。抗原非或非常复杂，所以抗原特异性方法并不常用。抗原非特异性免疫复合物的检测仅是检测血清中循环免疫复特异性免疫复合物的检测仅是检测血清中循环免疫复合物，方法很多，其原理各不相同，用一种方法测定合物，方法很多，其原理各不相同，用一种方法测定为阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫组化为阳性，另一种方法检测可能为阴性；但与免疫组化法一起检测，其意义就大得多。法一起检测，其意义就大得多。四、四、IVIV型超敏反应免疫学检测项目及临床应用型超敏反应免疫学检测项目及临床应用1.IV型超敏反应常见的免疫学检测项目型超敏反应常见的免疫学检测项目 皮肤试验，常用的方法是结核菌素皮

46、试和斑贴试验皮肤试验，常用的方法是结核菌素皮试和斑贴试验 （patch test）。）。2.临床应用临床应用 1）寻寻找找变变应应原原：斑斑贴贴试试验验主主要要用用于于寻寻找找接接触触性性皮皮炎炎变变应原。应原。2）结结核核菌菌素素皮皮试试目目的的：了了解解机机体体是是否否对对结结核核杆杆菌菌有有免免疫疫力力；接接种种卡卡介介苗苗后后的的免免疫疫效效果果观观察察；排排除除结核杆菌感染；结核杆菌感染；了解机体细胞免疫功能状况。了解机体细胞免疫功能状况。3）传染病的诊断）传染病的诊断 中南大学中南大学 张文玲张文玲此此课课件下件下载载可自行可自行编辑编辑修改，修改，仅仅供参考！供参考！感感谢谢您的支持，我您的支持，我们们努力做得更好！努力做得更好！谢谢谢谢