HIVHBV梅毒实验室检测.pptx
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1、培训目标培训目标课程结束时,受训者应能够:课程结束时,受训者应能够:理解实验室检测在诊断和监测理解实验室检测在诊断和监测HIVHIV和和HBVHBV、梅毒感染的重要作用、梅毒感染的重要作用了解诊断和监测了解诊断和监测HIVHIV和和HBVHBV、梅毒感染的不同检测方法、梅毒感染的不同检测方法解释检测结果解释检测结果描述孕产妇及配偶描述孕产妇及配偶/伴侣的检测流程伴侣的检测流程描述暴露婴儿描述暴露婴儿/儿童的检测流程儿童的检测流程1第1页/共94页 妇幼机构 确证实验室1个 0.87%筛查实验室52个 45.6%检测点8个 7%江西省妇幼保健机共114个,省级1个,市级12个,县级101个)全省
2、第2页/共94页一一、HIVHIV、梅梅 毒毒 和和 HBVHBV的的 实验室检测实验室检测简介简介3第3页/共94页综合产前检查服务综合产前检查服务+检测检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV 检测梅毒检测HIV 检测全血细胞计数和其它检测取血样4第4页/共94页HIVHIV和和HBVHBV筛查检测筛查检测筛筛查查检检测测用用于于诊诊断断产产检检、临临产产及及分分娩娩的的孕孕产产妇妇是是否否感感染染H HI IV V和和H HB BV VH HI IV V抗抗体体检检测测乙乙肝肝表表面面抗抗原原(H HB Bs sA Ag g)检检测测筛筛查查检检测测应应具具有有较较高高的的灵灵敏敏度度
3、和和特特异异度度操操作作简简单单、容容易易获获得得、便便宜宜尽尽可可能能在在“当当日日”获获得得结结果果5第5页/共94页iPMTCTiPMTCT筛查检测筛查检测何时使用何种检测?何时使用何种检测?HIVHBV检测方法检测方法HIVHIV快速检测快速检测 和/或 ELISAHBsAgHBsAg检测检测如果有条件,其他乙肝标记物检测检测时间检测时间第一次产检(孕早期)第一次产检(孕早期)或下一次产检时此前未检测,分娩时应检测第一次产检(孕早期)第一次产检(孕早期)或下一次产检时此前未检测,分娩时应检测6第6页/共94页二、二、HIVHIV试验和检测试验和检测7第7页/共94页全国艾滋病检测技术规
4、范(2014年修订版)中的变化2009年版第8页/共94页2014年版第9页/共94页2014年版第10页/共94页补充试验(核酸)第11页/共94页补充试验包括抗体补充试验和核酸补充试验等。建议首选抗体补充试验,如蛋白免疫印迹试验(WB,原确证试验)、条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)。第12页/共94页HIVHIV检测:抗体检测检测:抗体检测一个人感染了一个人感染了HIVHIV病毒后,体内将产生特异性抗病毒后,体内将产生特异性抗体对抗体对抗HIVHIV病毒病毒*。HIVHIV抗体通常在感染后抗体通常在感染后4 64 6周出现,但也有时周出现,但也有时也会在感染后也会在感染后3 3个月才
5、出现。个月才出现。从感染从感染HIVHIV病毒到出现特异的病毒到出现特异的HIVHIV抗体的一段时抗体的一段时期称为期称为“窗口期窗口期”。标准的标准的HIVHIV诊断检测诊断检测*是识别是识别HIVHIV抗体。抗体。注意:注意:*与其他大多数疾病不同,与其他大多数疾病不同,HIVHIV抗体没有保护性作用。抗体没有保护性作用。*所有HIV检测工具应经过SFDA审批,并在有效期内使用。13第13页/共94页感染HIV后各种标志物消长变化第14页/共94页孕产妇艾滋病检测方法包括抗体筛查试验和补充试验。抗体筛查试验包括快速检测(RT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光免疫试验(CLIA)、
6、明胶颗粒凝集试验(PA)等。补充试验包括抗体补充试验和核酸补充试验等。建议首选抗体补充试验,如蛋白免疫印迹试验(WB,原确证试验)、条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)。第15页/共94页HIVHIV抗体检测类型抗体检测类型16第16页/共94页HIVHIV检测:病毒核酸检测检测:病毒核酸检测这些检测检测HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质,并配备专门设备昂贵,不是针对所有人进行的常规检测方法PCR(多聚酶连反应法)检测HIV DNA-PCRHIV DNA-PCR定性检测血液中是否含有病毒,用于诊断诊断1818月龄内婴儿是否感染月龄内婴儿是否感染HI
7、VHIVHIV RNA-PCRHIV RNA-PCR定量检测病毒载量病毒载量,即血浆中的病毒数量,用于监测对抗病毒治疗的反应。监测对抗病毒治疗的反应。17第17页/共94页第18页/共94页 HIV EIA/ELISA(酶联免疫试验)试剂第19页/共94页HIVHIV筛查检测结果的含义筛查检测结果的含义HIV筛查检测结果“阴性阴性(-)(-)”:受检者没有受检者没有感染HIV或者或者受检者已经感染了HIV,但处于窗口期:3个月后再次进行检测HIV筛查检测结果“阳性阳性(+)(+)”:病人可能可能已经感染HIV但应再次重复检测20第20页/共94页HIVHIV确认试验结果的含义确认试验结果的含义
8、如果筛查检测结果阳性阳性,两次重复检测中1次或2次检测结果为阳性阳性,需要进行确认试验免疫印迹法(WB)确认试验结果:阳性阳性病人确认确认感染HIV阴性阴性受检者没有受检者没有感染HIV不确定不确定结果为“不确定”受检者必须在4周后再次采血,重复前述所有步骤进行检测21第21页/共94页抗体检测中的问题初筛实验中的假阳性血液恶性病变自身免疫性疾病多发性胆汁型肝硬化 酒精性肝炎 疫苗接种(流感,乙肝)多发性骨髓瘤肾移植或慢性肾衰竭疟疾或丝虫病 其他 第22页/共94页抗体检测中的问题初筛实验中的假阴性 窗口期 免疫移植 换血输血 恶性肿瘤 免疫功能丧失(B细胞功能缺损)其他(试剂或操作原因第23
9、页/共94页中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程 在产前检查服务中开展整合的检测咨询所采用的HIV检测流程24第24页/共94页产时产时HIVHIV抗体检测流程抗体检测流程中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程*有关确认试验详见幻灯片1425第25页/共94页三、三、儿童儿童HIV HIV 检测检测26第26页/共94页HIVHIV暴露婴儿和儿童的暴露婴儿和儿童的HIVHIV抗体检抗体检测测 不是所有不是所有HIVHIV感染母亲所生儿童都会感染感染母亲所生儿童都会感染HIVHIV,但是如果对,但是如果对12-1812-18个月以内的婴个月以内的婴儿进行儿进行HIVHIV抗
10、体检测抗体检测,所有,所有HIVHIV感染母亲所生婴儿都将是感染母亲所生婴儿都将是HIVHIV检测结果阳性。检测结果阳性。-即使婴儿并没有感染即使婴儿并没有感染HIVHIV-由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内。由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内。母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月,所以12-18月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断。27第27页/共94页未感染婴儿HIV-1抗体S/CO比值动态曲线第28页/共94页婴儿感染早期诊断(婴儿感染早期诊断(EIDEID)HIVHIV病毒检测(病毒检测(DNA-PCRDNA-PCR)HIV病毒检测(DNA-PCR)检测细胞内的HIV病
11、毒,能够检测低至1 10 拷贝前病毒DNA,以及可在HIV暴露婴儿出生后6周内诊断HIV感染用于HIV暴露婴儿HIV感染早期诊断(EID)29第29页/共94页应用应用DNA-PCRDNA-PCR方法进行方法进行婴儿感染早期诊断(婴儿感染早期诊断(EIDEID)()(1 1)如果可以开展HIV DNA-PCR检测,应用干血斑(DBS)在婴儿6 6周龄周龄时进行PCR检测。如果PCR检测结果阳性阳性 尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性阳性,婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性阴性 婴儿出生后3个月再次进行PCR检测30第30页/共94页应用应用DNA-PCRD
12、NA-PCR方法进行方法进行婴儿感染早期诊断(婴儿感染早期诊断(EIDEID)()(2 2)出生后出生后3 3个月个月再次进行HIV DNA-PCR检测如果PCR检测结果阳性阳性 尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性阳性,婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性阴性 婴儿视为未感染HIV考虑在婴儿满12月龄时进行HIV抗体检测(如有必要,在18月龄时再次进行检测)检测结果阴性的婴儿接受母乳喂养,必须在停止母乳喂养后6周再次进行PCR检测,以确保婴儿没有在母乳喂养期间感染HIV。31第31页/共94页婴儿婴儿HIVHIV感染早期诊断流程感染早期诊断流程32第32页/
13、共94页HIVHIV暴露婴儿暴露婴儿/儿童的儿童的HIVHIV抗体检测抗体检测所有HIV感染母亲所生儿童,在出生后6周或3个月未接受EID检测者,应进行HIV抗体检测。检测时间:满12月龄 和满18月龄(必要时,见HIV抗体检测流程)出生后3个月EID检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测满18月龄HIV抗体检测阳性,可确认儿童HIV感染。33第33页/共94页HIVHIV暴露儿童暴露儿童HIVHIV抗体检测流程抗体检测流程34第34页/共94页四、收集、制备干血斑(四、收集、制备干血斑(DBSDBS)操作练习操作练习35第35页/共94页什么是干血斑(什么是干血斑(DBSDBS)?)?干
14、血斑是直接用滤纸收集一滴全血进行干燥用于血样本的长时间储存DBS是用HIV DNA-PCR方法进行婴儿HIV感染早期诊断检测的最佳采血方法HIV DNA和HIV抗体可稳定地保存在干血斑中转运方便:无需冷藏36第36页/共94页如何采集干血斑血样本(如何采集干血斑血样本(1 1)时刻遵循“普遍防护原则”采集足跟血选择合适的采血部位,皮肤消毒(图片中阴影部位)必要时保暖足跟使用一次性消毒采血针足跟置于心脏水平位或之下不要“挤”足跟37第37页/共94页样本类型 末梢血制备DBS抗凝静脉血制备DBS第38页/共94页如何采集干血斑血样本(如何采集干血斑血样本(2 2)1.用消毒纱布擦掉第一滴血2.收
15、集此后滴出的大滴血液3.快速、轻柔地用滤纸片的一面接触血滴4.让血液滴到采血圈中重复步骤1-4,直到整个采血圈全部充满血液。在卡片上标注患者的编号。每个儿童用一张新纸片。收集2-4个血斑。不要:不要:用滤纸片按压出血部位不要多次在同一个采血圈中涂抹血滴在滤纸片两面均滴入血滴39第39页/共94页如何采集干血斑血样本(如何采集干血斑血样本(3 3)采血圈充满后:避免碰触或涂抹血滴水平放置滤纸片,室温下自然晾干血样本(至少4小时)避免阳光直射,不要加热不要将多张滤纸片叠放在一起,避免血滴接触其他表面一旦血样本完全干燥:放入可封闭的塑料袋中加入干燥剂和湿度指示卡干燥、阴凉保存干血斑滤纸片包装袋,直到
16、转送到相关实验室40第40页/共94页五、五、HIVHIV感染的实验室监测感染的实验室监测41第41页/共94页HIVHIV感染的实验室监测感染的实验室监测实验室监测主要用于:决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物是否有抗病毒治疗指征?效果监测抗病毒治疗有效吗?毒性监测抗病毒药物是否引起了其他问题?42第42页/共94页CD4+TCD4+T淋巴细胞是淋巴细胞是HIVHIV病毒攻击的靶细胞病毒攻击的靶细胞CD4+TCD4+T淋巴细胞检测用于:淋巴细胞检测用于:决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物为判断抗病毒治疗成功或失败提供定量依据对调整抗病毒治疗方案提供指导孕期每孕期每3 3个月及产
17、后个月及产后4 64 6周应进行周应进行CD4+TCD4+T淋巴淋巴细胞检测细胞检测(急性感染时可适当推迟检测,因为在急性感染期,CD4+T淋巴细胞通常会下降)CD4+TCD4+T淋巴细胞检测淋巴细胞检测43第43页/共94页第44页/共94页CD4+T细胞绝对数的临床意义评价免疫功能减退的程度和AIDS进程指导治疗策略的制订确定预防机会感染的最佳时机监控抗逆转录病毒(ARV)治疗、细胞因子治疗和保护治疗性疫苗的疗效第45页/共94页艾滋病诊疗指南CD4+T淋巴细胞计数350个细胞ul时,建议定期复查,暂不予治疗;CD4+T淋巴细胞计数在200350个细胞ul时,需考虑患者CD4+T淋巴细胞计
18、数和病毒载量(如有条件检测)的变化以及患者的经济条件和依从性等综合因素后再考虑是否开始治疗。CD4+T淋巴细胞200个细胞ul时,应给予抗卡氏肺孢子虫肺炎的预防性治疗。第46页/共94页病毒载量测量血浆中的病毒数量病毒载量测量血浆中的病毒数量病毒载量检测可用于:病毒载量检测可用于:是抗病毒治疗失败早期、最可靠的标记物,抗病毒治疗失败的原因,如:依从性差耐药监测对抗病毒治疗的反应诊断诊断HIVHIV感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检测测病毒载量(病毒载量(RNA-PCRRNA-PCR)检测)检测47第47页/共94页第48页/共94页在HIV/AIDS中进行病毒
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