甾体激素类药物分析.pptx

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1、基本结构：环戊烷骈多氢菲ABC12345678910111213141516171819D第一节 基本结构与分类第1页/共65页分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素第2页/共65页一、肾上腺皮质激素氢化可的松第3页/共65页醋酸地塞米松第4页/共65页主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试剂、与羰基试剂反应反应 C17 醇酮基醇酮基还还 原原 性性第5页/共65页二、雄性激素及蛋白同化激素丙酸睾酮第6页/共65页苯丙酸诺龙第7页/共65页主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试剂、与羰基试剂反应反应 C17 羟基羟基(可

2、可)成酯成酯第8页/共65页孕激素黄体酮第9页/共65页主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试剂、与羰基试剂反应反应C17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰化纳与亚硝基铁氰化纳反应反应C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3反应反应第10页/共65页雌激素炔雌醇第11页/共65页主要活性基团主要活性基团性性 质质A环为环为3OH 苯环苯环UV、与重氮苯磺酸、与重氮苯磺酸盐反应盐反应C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3反应反应C17 羟基羟基可成酯可成酯第12页/共65页第二节 鉴别试验一、物理常数的测定1、熔点：2、比旋光度：偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光物质1g的溶液，在一定的

3、波长和温度下测得的旋光度。如醋酸地塞米松：二氧六环中10mg/ml下比旋度+82883、吸收系数：如醋酸地塞米松在无水乙醇中240nm（15 g/ml）吸收系数为343371 第13页/共65页 （一）与强酸的呈色反应（母核）甾体激素类药物呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl二、化学鉴别法第14页/共65页与硫酸显色反应 显 色 荧光 加水稀释泼尼松龙 深红 絮状灰泼尼松 橙 黄蓝绿炔雌醚 橙红 黄绿 红色 炔雌醇 橙红 黄绿 絮状玫红醋酸可的松 黄或微 褪色并澄 带橙 清第15页/共65页(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色 四氮唑盐OH1、C17 醇酮基还原性A.呈色反应B.

4、沉淀反应肾上腺皮质激素药物氨制硝酸银Ag黑色碱性 酒石酸铜Cu2O橙红色第16页/共65页甾酮类激素药物呈色羰基试剂2.C3酮基和C20酮基常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼第17页/共65页异烟腙（黄色）睾酮第18页/共65页黄体酮异烟双腙（黄色）第19页/共65页具有甲酮基或活泼亚甲基药物呈色 亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛3.甲酮基黄体酮其他甾体亚硝基铁 氰化钠蓝紫色淡橙色不显色第20页/共65页黄体酮蓝紫色第21页/共65页含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银5.乙炔基4.酚羟基雌激素类药物重氮苯磺酸红色偶氮染料第22页/共65页炔雌醇白第23页/共65页有机氟F有机破坏有

5、机氯Cl6.有机卤素茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸硝酸银AgCl 呈色（蓝紫色）第24页/共65页茜素氟蓝蓝紫色F-第25页/共65页7.酯的反应 C17或C21位上羟基的酯，水解产生相应的羧酸，再根据羧酸的性质进行鉴别。如：香第26页/共65页特臭特臭第27页/共65页三、制备衍生物测定m.p.（一）缩氨基脲的生成（二）酯的水解第28页/共65页-3-酮 240nm苯环 280nm四、UV法第29页/共65页结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基炔雌醇五、IR法第30页/共65页六、TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主

6、斑点相同。第31页/共65页七、HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。第32页/共65页第三节 特殊杂质检查一、有关物质的检查来源：原料、中间体、异构体、降解产物特点：（1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似方法（具有一定分离能力）：TLC法（高低浓度对比法）；HPLC法（主成分自身对照）第33页/共65页（一）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：v 规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色第34页/共65页醋酸氟轻松:检查有关物质 取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成

7、3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97 :3）为展开剂，展开后晾干，在105干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。第35页/共65页特点：（1）简便易行，不需特殊的仪器；（2）不需对照品；（3）只能控制单个杂质的限量；（4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。第36页/共65页（二）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：v 规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积特点：（1）需特殊的仪器

8、；（2）不需对照品；（3）可以控制杂质的总量；第37页/共65页来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢原理及方法：二、硒的检查第38页/共65页醋酸氟轻松检查硒 取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml容量瓶中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用水加至刻度。取硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.0 0.2后，转移至分液漏斗中，用水少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液（12）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基萘试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2，静置分层，

9、取环己烷脱水后，测A378nm。规定 A供A对。第39页/共65页三、有机溶剂残留量的检查 （甲醇和丙酮）甲醇 0.3%丙酮 5.0%GC法内标法定量第40页/共65页原理及方法：供试液对照液钼酸铵磷钼酸铵H+还原磷钼酸蓝（钼蓝）740nmA样A对四、游离磷酸盐的检查第41页/共65页检查 游离磷酸地塞米松磷酸钠 精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20放置3050分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。第42页/共65页一、

10、HPLC法各国药典多采用RPHPLC（大多内标法）特点 用样量少，灵敏度高，分离效果好,测定速度快.甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰。第四节 含量测定第43页/共65页二、UV法-3-酮 240nm肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素 苯环 280nm（）雌激素第44页/共65页 肾上腺皮质激素类C17-醇酮基强还原性1.原理OH-还原(一)四氮唑比色法有色甲臜四氮唑盐醇酮基-a-17C三、比色法第45页/共65页三苯甲臜深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）第46页/共65页蓝四氮唑（BT）第47页/共65页双甲臜（暗蓝）第48页/共6

11、5页2.方法对照品法4045暗第49页/共65页3.讨论（1）基团对反应速度的影响C11=O C11OHC21OH C21-酯21位酯化后反应速度减慢，酯化基团越大反应速度越慢第50页/共65页（2）溶剂、水分的影响含水量5%含水10%A10%含水30%几无反应 无醛无水乙醇醛 A 无水乙醇第51页/共65页（3）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：第52页/共65页（4）O2与光线的影响反应过程反应产物怕光避光、快速O2影响颜色强度和稳定性隔绝空气、快速、充N2第53页/共65页（5）温度与时间t甲臜分解%ChP 25 4045BP

12、 30 1h第54页/共65页肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3酮基1.原理HCl（缩合）(二)异烟肼比色法第55页/共65页异烟腙（黄色）第56页/共65页2.方法：暗45对照品法A供A对C供C对C供A供A对C对第57页/共65页（1）溶剂的选择异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇3.讨论酸、异烟肼的量(2)盐酸:异烟肼=2:1第58页/共65页（3）水分、温度、O2与光线的影响含水量腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响温度t 第59页/共65页反应速度（4）C3=O C17=O、C20=O C11=O 不反应反应专属性 C3酮基第60页/共65页1.原理max=465max=515雌激素（三、）Kober反应比色法：第61页/共65页第62页/共65页雌二醇-3-甲醚max=465max=515第63页/共65页四、非水溶液滴定法 五、生物样品中甾体激素的分析五、生物样品中甾体激素的分析第64页/共65页感谢您的观看！第65页/共65页