维生素类药物的分析 (7)讲稿.ppt

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1、关于维生素类药物的分析(7)第一页，讲稿共七十八页哦维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所必是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。需的微量营养物质。人体不能合成维生素人体不能合成维生素 VitA、D、E、K等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB VitC、叶酸、烟酸、叶酸、烟酸第二页，讲稿共七十八页哦-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素A第三页，讲稿共七十八页哦溶解性溶解性（一）（一）不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等性质性质一、一、第四页，讲稿共

2、七十八页哦为一个具有为一个具有共轭多烯侧链的共轭多烯侧链的 环己烯环己烯（二）（二）v 具有具有UV吸收吸收 325-328nmv V VA A主要为全反式主要为全反式V VA,A,存在多种立体存在多种立体异构化合物异构化合物,如：新维生素如：新维生素A Aa a,新维生新维生素素A Ab b,新维生素新维生素A Ac c,异维生素异维生素A Aa a，异维，异维生素生素A Ab b 第五页，讲稿共七十八页哦维生素维生素A 325.5 100%新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%

3、异维生素异维生素Ab 324 24%相对生物效价相对生物效价第六页，讲稿共七十八页哦VitA2VitA3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应第七页，讲稿共七十八页哦鲸醇鲸醇第八页，讲稿共七十八页哦v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化维生素维生素A A醋酸酯在临床上较常用醋酸酯在临床上较常用共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（三）（三）第九页，讲稿共七十八页哦环氧化物环氧化物VitAVitA醛醛VitAVitA酸酸第十页，讲稿共七十八页哦（四）（四）与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应CHCl3第十一页，讲稿共七十八页哦三氯化锑反应三氯化锑反应（一

4、）（一）无醇无醇CHCl3鉴别鉴别二、二、第十二页，讲稿共七十八页哦蓝色蓝色紫红紫红条件条件 无水无醇无水无醇三氯化锑水解生成氯化氧锑三氯化锑水解生成氯化氧锑乙醇可与乙醇可与C+作用而使正电荷消失作用而使正电荷消失第十三页，讲稿共七十八页哦方法方法 取维生素取维生素A A油溶液油溶液1d1d，加加氯仿氯仿10 ml10 ml，振摇溶解，取出两，振摇溶解，取出两滴，加氯仿滴，加氯仿2 ml2 ml，与，与25%25%三氯化三氯化锑氯仿液锑氯仿液0.5 ml0.5 ml反应，成蓝色，反应，成蓝色，渐成紫红。渐成紫红。第十四页，讲稿共七十八页哦 BP BP（20052005）max为为326nm一个

5、吸收峰一个吸收峰UVUV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰且在且在332nm的波长处的波长处有较低的吸收峰或拐点有较低的吸收峰或拐点第十五页，讲稿共七十八页哦去水去水VitA（VitA3）VitAHCl 第十六页，讲稿共七十八页哦讨论讨论 维生素维生素 A A有五个共扼双有五个共扼双键，无水乙醇溶液在键，无水乙醇溶液在 326 nm326 nm处有最大吸收，盐酸催化加热处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成脱水，成6 6个双键，故，波长红个双键，故，波长红移，同时在移，同时在350-390350-390之间出现之间出现3 3个吸收峰。个吸收峰。第十七页，讲稿共七十八页哦

6、max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰第十八页，讲稿共七十八页哦USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定规定斑点颜色斑点颜色和和Rf值值BP 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑（三）（三）TLC法法对照品法对照品法第十九页，讲稿共七十八页哦 (一一)UV法法三三.含量测定含量测定 (二二)HPLC法法第二十页，讲稿共七十八页哦（三）三氯化锑比色法（三）三氯化锑比色法标准曲线法标准曲线法1.原理：维生素原理：维生素A与与三氯化锑的无水氯仿三氯化锑的无水氯仿溶液作用溶液作用,产生产生不稳定的蓝色不稳定的蓝色,在在618nm620nm波长处有最大吸收波长处

7、有最大吸收,符合符合Beer定律定律.2.方法：取维生素方法：取维生素A A对照品，制成系列浓对照品，制成系列浓度的氯仿溶液，加入一定量的度的氯仿溶液，加入一定量的三氯化锑三氯化锑无水氯仿无水氯仿溶液，在溶液，在5s 10s内内,于于620nm波长处测定吸收度，绘制标准曲线。按同波长处测定吸收度，绘制标准曲线。按同法测定供试液的吸收度，根据标准曲线计法测定供试液的吸收度，根据标准曲线计算含量。算含量。第二十一页，讲稿共七十八页哦 氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)连接而成的季铵类连接而成的季铵类化合物化合物HClCl-第二节第二节 维生素维生素B1的分析的分析(盐酸硫胺盐酸

8、硫胺)第二十二页，讲稿共七十八页哦 二二 、性质、性质（一）（一）溶解性：易溶于水，水溶液呈溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性酸性（二）（二）硫色素反应：噻唑环在碱硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，再与嘧啶环上的氨性介质中开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。成具有荧光的硫色素。第二十三页，讲稿共七十八页哦嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨噻唑环噻唑环 季铵季铵1、可与酸成盐、可与酸成盐2、与生物碱、与生物碱3、含量测定、含量测定 非水碱量法非水碱量法（四）（四）碱性碱性（三）（三）UVUV 共轭双键共轭双键maxmax=246=246nmnm

9、第二十四页，讲稿共七十八页哦ChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应第二十五页，讲稿共七十八页哦第二十六页，讲稿共七十八页哦硫色素硫色素(O)第二十七页，讲稿共七十八页哦方法方法 取本品约取本品约5mg5mg，加氢氧化钠，加氢氧化钠2.5ml2.5ml，加铁氰化钠试液，加铁氰化钠试液0.5ml0.5ml与正与正丁醇丁醇5ml,5ml,强烈振摇强烈振摇2min,2min,放置分层，放置分层，上面醇层显强烈蓝色荧光。加酸消上面醇层显强烈蓝色荧光。加酸消失，再加碱又重现。失，再加碱又重现。专属性反应。专属性反应。第二十八页，讲稿共七十八页哦(二二)沉淀反应沉淀反应 VitB1H

10、+H+H+H+第二十九页，讲稿共七十八页哦S元素反应Cl-反应（三）其他反应（三）其他反应第三十页，讲稿共七十八页哦三、三、含量测定含量测定电位滴定法指示终点电位滴定法指示终点（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法原理：维生素原理：维生素B B1 1分子含有分子含有2 2个碱性个碱性的已成盐的已成盐的的伯胺伯胺和和季铵季铵基团，在非水溶液中均与基团，在非水溶液中均与HClOHClO4 4作用，作用，根据消耗根据消耗HClOHClO4 4的量可以计算维的量可以计算维生素生素B B1 1的含量。的含量。第三十一页，讲稿共七十八页哦(二二)UV ChP片剂、注射剂片剂、注射剂=421A=ECL第三

11、十二页，讲稿共七十八页哦（一）结构（一）结构 为为L-L-抗坏血酸，在化学结构上和糖类似。有抗坏血酸，在化学结构上和糖类似。有4 4种光学异构体，种光学异构体，L L构型的右旋体活性最强。具构型的右旋体活性最强。具有二烯醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳有二烯醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（C C4 4，C C5 5），性质活泼。），性质活泼。L L抗坏血酸抗坏血酸第三节 维生素C第三十三页，讲稿共七十八页哦（二）性质（二）性质1 1溶解性溶解性2 2易溶于水，水溶液呈酸性；在乙醇易溶于水，水溶液呈酸性；在乙醇3 3中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。第三十四页，讲

12、稿共七十八页哦 2 2 酸性酸性C C3 3OHOH的酸性较的酸性较强。强。pKpK1 1=4.17=4.17，C C2 2OHOH的酸性的酸性较弱较弱pKpK2 2=11.57=11.57。故表现为一元酸故表现为一元酸的性质。能与碳的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。酸氢钠成钠盐。第三十五页，讲稿共七十八页哦二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构3强还原性强还原性二烯醇结构的还原性极强。二烯醇结构的还原性极强。第三十六页，讲稿共七十八页哦有活性有活性有活性有活性无活性无活性L L抗坏血酸抗坏血酸去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸第三十七页，讲稿共七十八页哦4 4光学活性光学活性手性手

13、性C C（C C4 4、C C5 5）L(+)L(+)抗坏血酸活性抗坏血酸活性最强最强*第三十八页，讲稿共七十八页哦5 5 水解性水解性第三十九页，讲稿共七十八页哦第四十页，讲稿共七十八页哦506 6 具糖的性质具糖的性质 结构与糖类相似结构与糖类相似 有糖类的显色反应有糖类的显色反应水解、脱羧水解、脱羧第四十一页，讲稿共七十八页哦7 7 紫外特征紫外特征243nm243nm或中性或中性第四十二页，讲稿共七十八页哦二二.鉴别试验鉴别试验(一一)与氧化剂反应与氧化剂反应第四十三页，讲稿共七十八页哦1、与、与AgNO3反应反应(ChP2005)2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP20

14、05)氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OH第四十四页，讲稿共七十八页哦（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）3、与碱性酒石酸铜反应、与碱性酒石酸铜反应 USP4、与、与KMnO4反应反应第四十五页，讲稿共七十八页哦糖类的反应糖类的反应（二）（二）或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP第四十六页，讲稿共七十八页哦第四十七页，讲稿共七十八页哦（蓝色）（蓝色）(糠醛糠醛)（戊糖）（戊糖）50(吡咯吡咯)脱羧脱羧第四十八页，讲稿共七十八页哦(三三)UV (BP)维生素维生素C 在在0.01mol/L HCl中中,在在243nm有最大吸收有最大吸收第四十九页，讲稿共七十八页哦指示剂指示剂 淀粉指示液

15、淀粉指示液三三 含量测定含量测定(一一)碘量法碘量法1.原理原理维生素维生素C C在在醋酸醋酸酸性条件下酸性条件下,可被可被碘定量氧化碘定量氧化.根据消耗碘的体积根据消耗碘的体积,可以计算维生素可以计算维生素C C的含量的含量第五十页，讲稿共七十八页哦H+第五十一页，讲稿共七十八页哦 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加，精密称定，加新沸过的冷水新沸过的冷水100ml与与稀醋酸稀醋酸10ml使溶解，使溶解，加加淀粉指示液淀粉指示液1ml，立即用，立即用碘滴定液碘滴定液（0.1mol/L）滴定）滴定，至溶液显蓝色，在至溶液显蓝色，在30秒内不褪秒内不褪。每每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol

16、/L)相当相当于于8.806mg的的C6H8O62.方法方法第五十二页，讲稿共七十八页哦3.讨论讨论（1）酸性环境）酸性环境 d.HAc 减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（2）新沸冷新沸冷H2O 赶走水中赶走水中O2（3）立即滴定）立即滴定 减少减少O2的干扰的干扰第五十三页，讲稿共七十八页哦(二)2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法1.原理原理自身指示终点法自身指示终点法终点：终点：显示过量的显示过量的2，6-二氯靛酚的颜色二氯靛酚的颜色（粉红色）（粉红色）2.2.方法方法第五十四页，讲稿共七十八页哦3.讨论讨论（1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC（2）快速滴

17、定）快速滴定 2min内内 防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰第五十五页，讲稿共七十八页哦（3）缺点）缺点不稳定不稳定 需经常标定需经常标定 贮备液贮备液 贮存贮存一周一周第五十六页，讲稿共七十八页哦*第三节第三节 维生素维生素E的分析的分析苯并二氢吡喃醇的衍生物苯并二氢吡喃醇的衍生物苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚醋酸酯醋酸酯主要有主要有，等异构体，其中以等异构体，其中以-异构异构体的生理活性最强。体的生理活性最强。结构分结构分3 3部分：部分：苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链第五十七页，讲稿共七十八页哦生物效价生物效

18、价 右旋体右旋体 :消旋体消旋体 =1.4：10 （天然品）（天然品）（合成品）（合成品）dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯第五十八页，讲稿共七十八页哦一一、性质性质1、溶解性、溶解性 为微黄色或黄色透明的粘稠液体，为微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶易溶于有机溶剂，不溶于水于有机溶剂，不溶于水2、UV 苯环苯环3、酯键、酯键 易水解生成游离生育酚易水解生成游离生育酚4、氧化性氧化性 维生素维生素E在无氧条件下对热稳定在无氧条件下对热稳定,加热加热200也不也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。其破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。其氧化产物为氧化产物为-生育醌或生育醌或-生育酚二聚体。

19、生育酚二聚体。第五十九页，讲稿共七十八页哦二、鉴别试验二、鉴别试验（一）硝酸反应（一）硝酸反应橙红色75,15第六十页，讲稿共七十八页哦（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNO3强氧化剂第六十一页，讲稿共七十八页哦 取本品约取本品约30mg，加无水乙，加无水乙醇醇10ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸2ml，摇，摇匀，在匀，在75加热加热15分钟，溶液分钟，溶液应显应显橙红色橙红色。第六十二页，讲稿共七十八页哦（二）三氯化铁联吡啶反应（二）三氯化铁联吡啶反应原理：原理：维生素维生素E在碱性条件下，水解生成在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取游离的生育酚，生育酚经乙醚提取

20、后，可被后，可被FeCl3氧化生成对氧化生成对-生育醌，生育醌，同时同时Fe3+被还原为被还原为Fe2+，Fe2+与联吡与联吡啶生成红色的配位离子。啶生成红色的配位离子。第六十三页，讲稿共七十八页哦生育酚生育酚对对-生育醌生育醌O弱氧化剂Fe2+第六十四页，讲稿共七十八页哦红色红色第六十五页，讲稿共七十八页哦 =41.045.5max=284nmmin=254nm(三三)UV法法VE0.01%无水乙醇溶液无水乙醇溶液第六十六页，讲稿共七十八页哦薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5）VitE Rf =0.7(四四)TLC)

21、TLC法法第六十七页，讲稿共七十八页哦游离生育酚游离生育酚 利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。故在一定条件以定量氧化。故在一定条件以消耗硫酸消耗硫酸铈滴定液体积来控制游离生育酚的限铈滴定液体积来控制游离生育酚的限量。量。检查检查 三、三、原理原理（一）（一）中国药典采用硫酸铈滴定法检查制备中国药典采用硫酸铈滴定法检查制备过程中未酯化的生育酚过程中未酯化的生育酚第六十八页，讲稿共七十八页哦硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）（二）试剂（二）试剂第六十九页，讲稿共七十八页哦（M生育酚生育酚=430.8）例例

22、 取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液溶解后，加二苯胺试液1滴，滴，用硫酸铈液（用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，）滴定，消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过不得过 1.0ml。第七十页，讲稿共七十八页哦2.15限量限量（三）（三）第七十一页，讲稿共七十八页哦药典规定药典规定消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量应重新计算硫酸铈的消耗量第七十二页，讲稿共七十八页哦四、四、含量测定含量测定GC法（法（Ch.P、USP、BP）（一）（一）GC

23、特点特点1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳定、极挥发性低、不稳定、极性强的药物不适宜用性强的药物不适宜用GC 法，法，VE沸点达沸点达350，但可以不经衍，但可以不经衍生化直接用生化直接用GC法法第七十三页，讲稿共七十八页哦载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子第七十四页，讲稿共七十八页哦第七十五页，讲稿共七十八页哦内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近第七十六页，讲稿共七十八页哦BP GC 内标内标 正三十二烷正三十二烷 R1.4USP GC 内标内标 十六酸十六醇酯十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外标外标 R2.6第七十七页，讲稿共七十八页哦感感谢谢大大家家观观看看第七十八页，讲稿共七十八页哦