食品毒理学化学毒物的一般毒性作用课件.ppt

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1、食品毒理学化学毒物的一般毒性作用第1页，此课件共83页哦要求要求 1.了解了解LD50的计算方法、化学毒物所致机体损的计算方法、化学毒物所致机体损 伤的组织学改变及其评价。伤的组织学改变及其评价。2.熟悉蓄积毒性作用及其评价；急性、亚慢和慢性毒熟悉蓄积毒性作用及其评价；急性、亚慢和慢性毒性试验设计及评价。性试验设计及评价。3.掌握急性、亚慢性和慢性毒性试验的基本概念、染掌握急性、亚慢性和慢性毒性试验的基本概念、染毒途径。毒途径。第2页，此课件共83页哦几个概念：几个概念：化学毒物、毒物与非毒物化学毒物、毒物与非毒物一般毒性作用（一般毒性作用（general toxicity）：）：在一定剂量、

2、一定接触时间和接触方式下对试验动在一定剂量、一定接触时间和接触方式下对试验动物产生的综合毒性效应（又称为基础毒性物产生的综合毒性效应（又称为基础毒性basic toxicity）。）。按接触毒性时间的长短，一般毒性作用分为急性按接触毒性时间的长短，一般毒性作用分为急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。第3页，此课件共83页哦第4页，此课件共83页哦&1 急性毒性作用及其评价急性毒性作用及其评价&2 蓄积毒性及其评价蓄积毒性及其评价&3 亚慢性和慢性毒性作用及其评价亚慢性和慢性毒性作用及其评价第5页，此课件共83页哦1 1 急性毒性作用急性毒性作用一、急性毒性概念和急性毒性

3、试验的目的一、急性毒性概念和急性毒性试验的目的二、急性毒性试验二、急性毒性试验三、急性毒性评价（分级）三、急性毒性评价（分级）第6页，此课件共83页哦一、急性毒性概念和急性毒性试验的目的一、急性毒性概念和急性毒性试验的目的急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)是指机体是指机体(人或试验动物人或试验动物)一一次接触或次接触或2424小时内多次接触小时内多次接触化学物后所引起的快速剧化学物后所引起的快速剧烈的烈的中毒效应中毒效应，包括一般行为、外观改变、形态变，包括一般行为、外观改变、形态变化以及死亡效应。化以及死亡效应。试验动物的染毒途径不同，一次接试验

4、动物的染毒途径不同，一次接触的含义也有所不同。触的含义也有所不同。第7页，此课件共83页哦急性毒性试验急性毒性试验(acute test)(acute test)是指机体是指机体(人或试验动物人或试验动物)一次给与或一次给与或2424小时内多次给予受试物后，短时间内动小时内多次给予受试物后，短时间内动物所产生的毒性反应，包括致死和非致死的指标参数。物所产生的毒性反应，包括致死和非致死的指标参数。第8页，此课件共83页哦目的目的测测试试和和求求出出化化学学毒毒物物对对一一种种或或几几种种试试验验动动物物的的致致死死量量(以以LDLD5050表表示示)以以及及其其它它的的急急性性毒毒性性参参数数，

5、了了解急性毒作用强度。解急性毒作用强度。并并通通过过观观察察动动物物中中毒毒表表现现和和死死亡亡的的情情况况，了了解解急急性性毒毒作作用用性性质质、可可能能的的靶靶器器官官和和致致死死原原因因，提提供供化化学学毒毒物物的的急急性性中中毒毒资资料料、初初步步评评价价对对人人体体产产生生损害的危险性。损害的危险性。第9页，此课件共83页哦探探求求化化学学毒毒物物急急性性毒毒性性的的剂剂量量反反应应关关系系与与中中毒毒特征。特征。为为亚亚慢慢性性、慢慢性性毒毒性性作作用用试试验验的的染染毒毒剂剂量量设设计计提供参考依据。提供参考依据。研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。研究化学毒物急性中毒的预

6、防和急救治疗措施。为毒理学机制研究提供线索为毒理学机制研究提供线索。第10页，此课件共83页哦急性毒性试验常用的毒性参数：急性毒性试验常用的毒性参数：LD50（LC50）Zac（LD50/Limac）LD84/LD16(或或LC84LC16)剂量剂量反应曲线斜率反应曲线斜率 第11页，此课件共83页哦二、急性毒性试验二、急性毒性试验(一一)试验动物试验动物 原则原则：急急性性毒毒性性试试验验要要求求选选择择对对化化学学毒毒物物的的代代谢谢和和毒毒效效应应表表现现与与人人的的反反应应尽尽可可能能一一致致的的试试验验动动物物。（最最基基本和重要的原则）本和重要的原则）动物易于获得动物易于获得品系纯

7、化品系纯化价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件。第12页，此课件共83页哦1 1试验动物的种属和品系试验动物的种属和品系最好用两种种属的动物最好用两种种属的动物啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：狗或猴。非啮齿类：狗或猴。急急性性皮皮肤肤毒毒性性试试验验可可选选用用成成年年大大鼠鼠、豚豚鼠鼠或或家家兔兔，优优先先考考虑虑白白色色家家兔兔。而而急急性性吸吸入入毒毒性性试试验验和和经经口口急性毒性试验则优先考虑大鼠。急性毒性试验则优先考虑大鼠。第13页，此课件共83页哦试验动物的年龄和体重：试验动物的年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择

8、刚急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠动物。例如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家、家兔兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的2020。第14页，此课件共83页哦3.3.试验动物的性别：试验动物的性别：急性毒性试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求LDLD5050，除特殊要求外，除特

9、殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为一般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各半雌雄各半。如果在预试验时发现化学毒物如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、雄动对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是为致畸试。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的验作准备，也可仅作雌性动物的LDLD5050测试。测试。第15页，此课件共83页哦4.动物数量与随机分组：动物数量与随机分组：大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物 每组每组10只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6

10、只只分组原则分组原则随机化原则（了解）随机化原则（了解）第16页，此课件共83页哦5.禁食：禁食：经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。第17页，此课件共83页哦6.实验动物的预检：实验动物的预检：选择健康动物选择健康动物12周的检疫期周的检疫期第18页，此课件共83页哦 （二）试验动物的饲养环境（二）试验动物的饲养环境恒定的温度：恒定的温度：223湿度：湿度：3070

11、%照度：昼夜各半照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格第19页，此课件共83页哦（三）染毒途径的选择（三）染毒途径的选择:染毒途径（染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：）的选择需考虑：模拟模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式方式；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较较；受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。的要求等。最常用的染毒途径为最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮经口、经呼吸道、经皮特殊

12、情况下也可采用注射途径。特殊情况下也可采用注射途径。第20页，此课件共83页哦经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触 :灌胃灌胃:小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.5ml/10g0.5ml/10g 大鼠一次灌胃体积不超过大鼠一次灌胃体积不超过5ml/5ml/只只 家兔不超过家兔不超过10ml/2kg10ml/2kg 狗不超过狗不超过50ml/10kg50ml/10kg 吞咽胶囊吞咽胶囊:经呼吸道接触经呼吸道接触 :静式吸入静式吸入 动式吸入动式吸入 经皮肤接触经皮肤接触 :注射途径接触注射途径接触:第21页，此课件共83页哦（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分

13、组:1 1查阅文献查阅文献了了解解化化学学毒毒物物的的结结构构式式、分分子子量量、常常温温常常压压下下的的状状态态、熔熔点点、沸沸点点、密密度度、闪闪点点、挥挥发发度度、蒸蒸气气压压、水水溶溶性性和和脂脂溶溶性性等等理理化化特特性性，生生产产批批号号及及纯纯度度，杂杂质成分与含量等。质成分与含量等。第22页，此课件共83页哦1 1查阅文献查阅文献确定使用哪一种计算方法求确定使用哪一种计算方法求LDLD5050，然后再设计剂，然后再设计剂 量分组。量分组。LDLD5050的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法等。法等。找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的

14、化学物的毒找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的所测得的LDLD5050(LC(LC5050)值作为受试化学物的预期毒性中值。值作为受试化学物的预期毒性中值。第23页，此课件共83页哦2 2预试验预试验 设设定定以以此此预预期期值值作作为为待待测测化化学学物物的的中中间间剂剂量量组组，并并在在该该剂剂量量的的上上下下各各设设计计l l一一2 2个个剂剂量量组组作作为为预预试试验剂量。验剂量。根据确定的剂量组进行染毒。根据确定的剂量组进行染毒。根据预试验的死亡资料确定组距。根据预

15、试验的死亡资料确定组距。第24页，此课件共83页哦 可根据以下公式计算出剂量分组：可根据以下公式计算出剂量分组：i i=(=(lgLDlgLD9090-lgLDlgLD1010)(n-1)(n-1)或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)式式中中i i为为组组距距(相相邻邻的的两两个个剂剂量量组组对对数数剂剂量量之之差差)；n n为设计的剂量组数。为设计的剂量组数。第25页，此课件共83页哦3 3正式试验正式试验;一般来说、根据试验设计所选用的一般来说、根据试验设计所选用的LDLD5050计算方法来计算方法来确定组数。例如几率单位法、寇氏

16、法一般设确定组数。例如几率单位法、寇氏法一般设6 61010个剂量组；霍恩法固定设个剂量组；霍恩法固定设4 4个剂量组。求得个剂量组。求得i i值后值后以最低剂量组以最低剂量组(LD(LD0 0或或LDLD1010)的对数剂量加上一个的对数剂量加上一个i i值，值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。实值。1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i 第26页，此课件共83页

17、哦（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察试验周期：一般以两周为宜试验周期：一般以两周为宜第27页，此课件共83页哦毒效应观察毒效应观察1.中毒症状中毒症状第28页，此课件共83页哦 2.体重体重在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重的变化。的变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸

18、收和利用，轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾能体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾能功急性损伤，也可能在体重上反映出来。所以，对功急性损伤，也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于存活动物尤其是对低于LDLD5050剂量组的存活动物应剂量组的存活动物应在观察期在观察期1414天内称量其体重的变化以便了解受试天内称量其体重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时间。物引起毒效应的持续时间。第29页，此课件共83页哦3.3.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解急性毒性试验中，对死亡

19、的动物均应及时进行大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验需体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。或进行

20、某些生化指标测定等。第30页，此课件共83页哦4.死亡和死亡时间死亡和死亡时间重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。分出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深人研析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。究化学物的毒作用机制提供参考。第31页，此课件共83页哦三、急性毒性评价三、急性毒性评价外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（WHO）毒性毒性分级分级大鼠一次经大鼠一次经口口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸

21、入4小时，死亡小时，死亡24只的浓度只的浓度(ppm)兔经皮兔经皮LD50(/mg/kg)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kg总量总量(g/60kg)剧毒剧毒1105151000第32页，此课件共83页哦我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法(1994)急性毒性分级急性毒性分级大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)大致相当于大致相当于70kg人的致死量人的致死量6级级(极毒极毒)1稍尝稍尝,150001050克克第33页，此课件共83页哦LD50为了便于比较化学物的毒性及有毒化学物的管理，国内为了便于比较化学物的毒性及有毒化学物的管理，国内外根据外根据LD50值大小提

22、出了许多急性毒性分级标准。值大小提出了许多急性毒性分级标准。LD50值是一个常用的急性毒性评价指标，但不能表示值是一个常用的急性毒性评价指标，但不能表示急性毒性的全部内容：急性毒性的全部内容：1）以死亡作为观察指标；）以死亡作为观察指标；2）是一个统计学估计数值。是一个统计学估计数值。比较不同外来化学物的比较不同外来化学物的LD50或比较同一化学物不同或比较同一化学物不同实验室所测定的实验室所测定的LD50值时，要注实意验条件的同一值时，要注实意验条件的同一性和量概念的等效性，需要检查完整的剂量性和量概念的等效性，需要检查完整的剂量-反应关反应关系资料。系资料。第34页，此课件共83页哦LD5

23、0值的值的95%可信限，剂量可信限，剂量-反应曲线的反应曲线的斜率斜率及动物急性致死的时间都是剂量及动物急性致死的时间都是剂量-反反应关系资料内容。应关系资料内容。斜率小时，在剂量低于斜率小时，在剂量低于LD50值时，致死作值时，致死作用大于斜率大的毒物。用大于斜率大的毒物。致死效应发生的时间越短，危害越大。致死效应发生的时间越短，危害越大。第35页，此课件共83页哦同一化学物的同一化学物的LD50值在不同实验室的测定结值在不同实验室的测定结果可有果可有4-7倍；倍；LD50相似的两种物质，不同相似的两种物质，不同的致死剂量范围内致死毒性不定相同；的致死剂量范围内致死毒性不定相同；LD50不同

24、时，致死毒性不定有明显差别。不同时，致死毒性不定有明显差别。第36页，此课件共83页哦LD16与与LD84用于弥补用于弥补LD50的不足。的不足。用曲线表示剂量与死亡率之间的关系时，用曲线表示剂量与死亡率之间的关系时，LD16与与LD84的比值呈现一种两端平直、中间陡峭的的比值呈现一种两端平直、中间陡峭的S形曲形曲线，其转折点相当于动物死亡率线，其转折点相当于动物死亡率16和和84。LD16与与LD84正好是致死剂量反应曲线的直线部分，正好是致死剂量反应曲线的直线部分，即与动物死亡率的概率单位即与动物死亡率的概率单位4.0和和6.0相当，也是相当，也是LD50值的值的16的值。（的值。（P27

25、面，图面，图1-2）急性毒作用带（急性毒作用带（Zac）带越宽，危险性越小。带越宽，危险性越小。第37页，此课件共83页哦1.消耗的动物量大消耗的动物量大2.获得的信息有限获得的信息有限3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值，不能用来仅仅是一个近似值，不能用来 表示急性毒性的全部内容。表示急性毒性的全部内容。4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的 症状观察是不够的，更需要的是生理学、症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致血液学及其它化验检查所提供的深入细致 的毒性信息。的毒性信息。经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验

26、的局限性第38页，此课件共83页哦评价时需要考虑的其它指标和参数：评价时需要考虑的其它指标和参数：剂量剂量-反应曲线的斜率反应曲线的斜率 动物急性致死的时间动物急性致死的时间 化合物化合物LD84 和和LD16 化合物的急性毒作用带化合物的急性毒作用带第39页，此课件共83页哦LD50的计算方法：的计算方法：寇式法和改进式寇式法寇式法和改进式寇式法概率单位概率单位-对数图解法对数图解法霍恩法霍恩法第40页，此课件共83页哦2 2 蓄积毒性作用及其评价蓄积毒性作用及其评价一、一、基本概念基本概念二二、蓄积毒性试验方法及其评价蓄积毒性试验方法及其评价 第41页，此课件共83页哦一、基本概念一、基本

27、概念 蓄积作用（蓄积作用（accumulation)：当化学物：当化学物 与机体与机体发生亚慢性接触，将反复进入机体，而且当进发生亚慢性接触，将反复进入机体，而且当进入的速度或总量超过代谢转化与排出的速度或入的速度或总量超过代谢转化与排出的速度或总量时，化学物就有可能在机体内逐渐增加并总量时，化学物就有可能在机体内逐渐增加并贮留的现象贮留的现象贮存库贮存库 铅（铅（PbPb）-骨骼骨骼 镉（镉（CdCd）-肾脏肾脏 DDTDDT、TCDDTCDD等等-脂肪组织脂肪组织第42页，此课件共83页哦易蓄积的部位称为易蓄积的部位称为贮存库贮存库。常见的贮存库有血浆蛋白、脂肪组织、肝常见的贮存库有血浆蛋

28、白、脂肪组织、肝脏、肾脏及骨骼。脏、肾脏及骨骼。化学物的贮存形式有：化学物的贮存形式有：母体、结合态、转母体、结合态、转化态化态。第43页，此课件共83页哦 蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础 耐受性是蓄积性的另一种表现形式之一，甚至耐受性是蓄积性的另一种表现形式之一，甚至可能隐藏着潜在的慢性中毒可能隐藏着潜在的慢性中毒 一种外源化学物有无蓄积作用是评定该化学一种外源化学物有无蓄积作用是评定该化学物是否可能引起潜在慢性中毒的论据之一，物是否可能引起潜在慢性中毒的论据之一，也是制定卫生限量标准时安全系数的一种也是制定卫生限量标准时安全系数的一种依据依据第44页，此课

29、件共83页哦 蓄积作用实际上有二个含义：蓄积作用实际上有二个含义：物质蓄积物质蓄积(material accumulation)(material accumulation)功能蓄积功能蓄积(functional accumulation)(functional accumulation)第45页，此课件共83页哦物质蓄积：物质蓄积：实验动物反复多次接触化实验动物反复多次接触化学物后，用化学分析方法能够测得学物后，用化学分析方法能够测得机体内存在该化学物或其代谢产物机体内存在该化学物或其代谢产物 第46页，此课件共83页哦 功能功能(机能机能)蓄积蓄积：有的化学物在长：有的化学物在长期接触后，

30、机体内虽不能测出其原型期接触后，机体内虽不能测出其原型或代谢产物，却出现了慢性毒性作用或代谢产物，却出现了慢性毒性作用第47页，此课件共83页哦功能蓄积可能是功能蓄积可能是 由于贮存体内的化学物或其代谢产物由于贮存体内的化学物或其代谢产物的数量极微，不能检出物质的蓄积的数量极微，不能检出物质的蓄积 或者是由于每次机体接触化学物之后或者是由于每次机体接触化学物之后所引起的损害累积所致所引起的损害累积所致第48页，此课件共83页哦二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价化化学学毒毒物物的的蓄蓄积积作作用用是是发发生生慢慢性性中中毒毒的的物物质质基基础础，因因此此研研究究化化学学毒毒

31、物物在在机机体体内内的的蓄蓄积积性性是是评评价价化化学学毒毒物物能能否否引引起起潜潜在在慢慢性性毒毒性性的的依依据据之之一一，也也是是卫卫生生标标准准制制订订过过程程选选择择安安全系数的主要依据。全系数的主要依据。第49页，此课件共83页哦蓄蓄积积毒毒性性试试验验是是研研究究化化学学毒毒物物基基础础毒毒性性的的重重要要内内容容之之一一，目目的的是是通通过过试试验验求求出出蓄蓄积积系系数数K K，了了解解化化学学毒毒物物蓄蓄积积毒毒性性的的强强弱弱，并并为为慢慢性性毒毒性性试试验验及及其其他他有有关关毒毒性性试试验验的剂量选择提供参考。的剂量选择提供参考。第50页，此课件共83页哦二、蓄积毒性试

32、验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价(一一)蓄积系数法蓄积系数法 蓄蓄积积系系数数(accumulation(accumulation coefficient)coefficient)是是多多次次染染毒毒使使半半数数动动物物出出现现效效应应(或或死死亡亡)的的累累积积剂剂量量EDED5050(n)(n)与与一一次次染染毒毒使使半半数数动动物物出出现现相相同同效效应应(或或死死亡亡)的的剂量剂量EDED5050(1)(1)的比值的比值，即：，即：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1)(1)第51页，此课

33、件共83页哦 1 1固定剂量法：固定剂量法：一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒。一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒。先求出先求出LDLD5050，然后选取相同条件的，然后选取相同条件的4040只只(或更多或更多)实验动实验动物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少2020只，只，雌雄各半。雌雄各半。试验组在试验组在1 12020l l50LD50LD5050的范围内选定一个剂量，每的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒,试验期间观察记试验期间观察记录每组动物死亡数。

34、录每组动物死亡数。第52页，此课件共83页哦 当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量计算累积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据公式计算，根据公式计算K K值，值，然后依表然后依表6 65 5进行评价。但若接触剂量已累积达到进行评价。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂量，也可终止试验。剂量，也可终止试验。第53页，此课件共83页哦 2 2剂量递增法：剂量递增法：第54页，此课件共83页哦 在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即在试验期间，当化

35、学毒物引起动物累积死亡一半时即在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，可终止试验，可终止试验，可终止试验，计算计算计算计算K K K K值进行评价值进行评价值进行评价值进行评价。一般来说，在试验第。一般来说，在试验第2l2l天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达亡数不足一半，说明其累积剂量已达亡数不足一半，说明其累积剂量已达亡数不足一半，说明其累积剂量已达5.26LD5.26LD5.26LD5.26L

36、D50505050，即，即，即，即K K K K5 5 5 5。使用本方法时要注意染毒期间定期使用本方法时要注意染毒期间定期使用本方法时要注意染毒期间定期使用本方法时要注意染毒期间定期(每每4 4 4 4天一次天一次天一次天一次)给动物称给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。第55页，此课件共83页哦3 3剂量固定的剂量固定的2020天蓄积法：天蓄积法：它它通通常常采采用用经经口口灌灌胃胃染染毒毒方方式式，将将动动物物随随机机分分为为5 5个个组组，包包括括阴阴性性对对照照组组和和1/20 1/20 LDLD5050、l/10 l/10 L

37、DLD5050、1/5 1/5 LDLD5050和和1/2 1/2 LDLD5050四四个个剂剂量量组组，每每组组动动物物数数1010只只，雌雌雄雄各各半半。每每日日染染毒毒一一次次，连连续续染毒染毒2020天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。第56页，此课件共83页哦试验结束时根据下列标准进行评定：试验结束时根据下列标准进行评定：各剂量组均无死亡，即为蓄积性不明显；各剂量组均无死亡，即为蓄积性不明显；如如仅仅1/2LD1/2LD5050剂剂量量组组有有死死亡亡，其其他他组组均均无无死死亡亡，则则为为弱蓄积性；弱蓄积性；如如1/20LD1/20LD5050剂

38、剂量量组组无无死死亡亡，其其他他各各组组间间死死亡亡数数有有剂剂量量反应关系时，则为中等蓄积性；反应关系时，则为中等蓄积性；如如1/20LD1/20LD5050剂剂量量组组有有死死亡亡，且且有有剂剂量量反反应应关关系系，则则为强蓄积性。为强蓄积性。第57页，此课件共83页哦(二二)生物半减期法：生物半减期法：生生物物半半减减期期(biological(biological half-lifehalf-life，t t1/21/2)是是指指进进入入机机体的外源化合物由机体消除一半所需的时间。体的外源化合物由机体消除一半所需的时间。用用毒毒物物动动力力学学原原理理描描述述化化学学毒毒物物在在机机体

39、体内内的的蓄蓄积积作作用用。t t1/21/2以以化化合合物物在在体体内内的的数数量量为为基基础础来来表表示示蓄蓄积积性性，是表示外来化合物的蓄积性的重要指标。是表示外来化合物的蓄积性的重要指标。第58页，此课件共83页哦根据摄入量、摄入时间间隔（根据摄入量、摄入时间间隔（t)和和t1/2，可以估，可以估计蓄积情况。计蓄积情况。如果如果t t1/2,则蓄积则蓄积可能可能减少；反之则减少；反之则可能可能蓄积。蓄积。如果如果t=t1/2，也蓄积。，也蓄积。无论化学物无论化学物t1/2长短长短,在与它在与它等时间间隔接触化学等时间间隔接触化学物条件下，化学物都会蓄积物条件下，化学物都会蓄积，并且经过

40、，并且经过6个个t1/2时，蓄积达到最大值。化学物继续进入机体，蓄时，蓄积达到最大值。化学物继续进入机体，蓄积增加几乎为零。蓄积与清除达到平衡。积增加几乎为零。蓄积与清除达到平衡。蓄积极限值蓄积极限值L(mg)=1.44化学物吸收量（化学物吸收量（mg/d）t1/2（d）。）。第59页，此课件共83页哦t1/2测定方法：测定方法：将被检测物由静脉注入，然后按一定时间间将被检测物由静脉注入，然后按一定时间间隔连续多次测定机体接触受试物后试验动物隔连续多次测定机体接触受试物后试验动物血浆中该物质的浓度血浆中该物质的浓度，以时间为横坐标，以血浆，以时间为横坐标，以血浆中物质浓度的对数值为纵坐标绘图，

41、依图求出中物质浓度的对数值为纵坐标绘图，依图求出直线的斜率直线的斜率ke(即速率常数），生物半减期即速率常数），生物半减期t1/2 0.693/ke。生物半减期较生物半减期较短短的物质达到蓄积极限所需时间的物质达到蓄积极限所需时间短，机体一旦停止接触该物质，也短，机体一旦停止接触该物质，也易易于很快从于很快从机体消除。反之则不易消除。机体消除。反之则不易消除。第60页，此课件共83页哦（三）蓄积率及其测定（三）蓄积率及其测定蓄积率：在一定时间内，外来化学物在体内的蓄积率：在一定时间内，外来化学物在体内的蓄积量蓄积量与同一期间进入机体与同一期间进入机体总量总量的百分比。的百分比。测定方法：用两组

42、条件一致的动物，试验组先每日给予测定方法：用两组条件一致的动物，试验组先每日给予一定剂量被检化学物，但动物不能发生死亡，以一定时一定剂量被检化学物，但动物不能发生死亡，以一定时间给予一定剂量后再与对照组同时分别测定该被检物的间给予一定剂量后再与对照组同时分别测定该被检物的LD50。第61页，此课件共83页哦 如果被检化学物在体内有蓄积性（蓄积率如果被检化学物在体内有蓄积性（蓄积率1），则），则由于蓄积试验组动物在进行由于蓄积试验组动物在进行LD50测定前，体内已蓄积一测定前，体内已蓄积一定数量，所以其定数量，所以其LD50必定较对照组小。必定较对照组小。两组动物之间测得的两组动物之间测得的LD

43、50之差认为是前一时期蓄积试之差认为是前一时期蓄积试验组动物体内的蓄积量。验组动物体内的蓄积量。第62页，此课件共83页哦计算方法：蓄积率（计算方法：蓄积率（%）（对照组（对照组LD50-蓄积蓄积试验组试验组LD50）/蓄积期间给予蓄积试验组动物被蓄积期间给予蓄积试验组动物被检物质总量检物质总量100%第63页，此课件共83页哦现有蓄积试验都是以死亡为观察毒效应的指标，现有蓄积试验都是以死亡为观察毒效应的指标，不引起死亡的可能得出弱蓄积性的错误结论。如不引起死亡的可能得出弱蓄积性的错误结论。如氯丁二烯。氯丁二烯。如果在蓄积毒性试验时选用其它指标（如靶器官如果在蓄积毒性试验时选用其它指标（如靶器

44、官的损伤），求取的损伤），求取ED50（n）和和ED50（l），计算蓄积，计算蓄积系数易得正确结论。系数易得正确结论。第64页，此课件共83页哦关于机体耐受性关于机体耐受性机体的耐受性机体的耐受性：某一外来化学物反复作用于机体后，：某一外来化学物反复作用于机体后，有时一些本来可以引起机体呈现一定剂量的效应，却有时一些本来可以引起机体呈现一定剂量的效应，却没有引起反应，必须加大剂量才能使机体呈现预期效没有引起反应，必须加大剂量才能使机体呈现预期效应。应。第65页，此课件共83页哦在蓄积试验结束时，将存活的动物给予一次冲击剂量（一般用一次LD50的剂量）后统计动物死亡率与预先未经化学物处理的对照组

45、的死亡率进行比较，以观察动物在小剂量长期染毒情况下是否出现对毒物的耐受性。耐受性是蓄积性的另一种表现形式。蓄积、耐受性与慢性中毒之间的关系是常要进一步研究的问题。第66页，此课件共83页哦3 3 亚慢性和慢性毒性试验亚慢性和慢性毒性试验一一 亚慢性毒性作用：亚慢性毒性作用：亚慢性毒性的概念亚慢性毒性的概念 亚慢性毒性试验的目的亚慢性毒性试验的目的 亚慢性毒性试验的设计亚慢性毒性试验的设计 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用：慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性试验的目的慢性毒性试验的目的 慢性毒性试验设计慢性毒性试验设计 第67页，此课件共83页哦一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性

46、和慢性毒性试验的概念、目的(一一)概念：概念：亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或实验是指人或实验动物长期动物长期(甚至终生甚至终生)反复接触低剂量的化反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。学毒物所产生的毒性效应。第68页，此课件共83页哦（二）试验目的：（二）试验目的：1.1.确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚

47、急性毒性试验中发现的毒作用提对在急性及亚急性毒性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；中未发现的毒作用；2.2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；第69页，此课件共83页哦3.3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量反应反应(效应效应)关系，以确定外来化合物的毒性下限，即其观察关系，以确定外来化合物的毒性下限，即其观察到有害作用的最低剂量到有害作用的最低剂量(LOAEL)(LOAEL)和未观察到有害作和未观察到有害作用的剂量（用的剂量（NOAELNO

48、AEL），提出此受试物的安全限），提出此受试物的安全限量参考值量参考值;第70页，此课件共83页哦 4.4.研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性;5.5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提供依据观察指标选择提供依据;6.6.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。第71页，此课件共83页哦 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：

49、大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物20 大动物大动物6性别：性别：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半第72页，此课件共83页哦（二）实验动物染毒期限：（二）实验动物染毒期限：工业毒理学工业毒理学 36个月个月食品毒理学食品毒理学 6个月个月1年年环境毒理学环境毒理学 6个月个月1年年致癌试验致癌试验 接近或等于动物的预期寿命接近或等于动物的预期寿命第73页，此课件共83页哦（二）实验动物染毒期限（二

50、）实验动物染毒期限第74页，此课件共83页哦 经消化道经消化道经呼吸道经呼吸道经皮肤经皮肤（三）实验动物染毒方式（三）实验动物染毒方式第75页，此课件共83页哦亚慢性毒性的剂量选择亚慢性毒性的剂量选择阴性对照组阴性对照组低剂量组低剂量组中剂量组中剂量组高剂量组高剂量组 急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量 1/201/5 LD50组距：组距：310倍，最低倍，最低不小于不小于2倍倍慢性毒性的剂量选择慢性毒性的剂量选择阴性对照组阴性对照组低剂量组低剂量组中剂量组中剂量组高剂量组高剂量组 亚慢性阈剂量亚慢性阈剂量1/51/2 1/10 LD50组距：组距：25倍，最低不倍，最低不小于小于2倍倍（四）试