肿瘤靶向治疗分子标靶应用进展.pptx

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1、背景资料20世纪70年代前:肿瘤生物学研究：细胞和亚细胞水平肿瘤生物学研究：细胞和亚细胞水平 肿瘤细胞生长失控而处在不断的周期肿瘤细胞生长失控而处在不断的周期性分裂中性分裂中,导致肿瘤细胞分裂速度加快。导致肿瘤细胞分裂速度加快。传统化疗药：针对阻断有丝分裂中微管蛋白传统化疗药：针对阻断有丝分裂中微管蛋白形成的细胞毒性药物和破坏形成的细胞毒性药物和破坏DNA合成的抗合成的抗代谢药物代谢药物 抗瘤谱较广，选择性不强，效果差别很抗瘤谱较广，选择性不强，效果差别很大同时损害正常细胞，有严重不良反应大同时损害正常细胞，有严重不良反应第1页/共79页20世纪世纪70年代后年代后:肿瘤生物学研究：分子水平肿

2、瘤生物学研究：分子水平 肿瘤中癌基因扩增而激活，抑癌基因突变肿瘤中癌基因扩增而激活，抑癌基因突变失活或丢失，基因转录和蛋白产物异常，信失活或丢失，基因转录和蛋白产物异常，信号转导通路异常活化，细胞周期调节失控，号转导通路异常活化，细胞周期调节失控，导致肿瘤细胞不受控制地增殖，细胞凋亡抑导致肿瘤细胞不受控制地增殖，细胞凋亡抑制，肿瘤新生血管形成。制，肿瘤新生血管形成。肿瘤分子生物学研究阐明了肿瘤发生发展中肿瘤分子生物学研究阐明了肿瘤发生发展中的分子机制，为肿瘤药物治疗提供了一种新的分子机制，为肿瘤药物治疗提供了一种新的模式。的模式。第2页/共79页肿瘤的靶向治疗肿瘤的靶向治疗targeted t

3、herapy第3页/共79页依据已知肿瘤发生发展中涉及的异常分子和基因，设计和研制针对这依据已知肿瘤发生发展中涉及的异常分子和基因，设计和研制针对这些已知的特定分子和基因靶点的药物，选择性杀伤肿瘤细胞的治疗方些已知的特定分子和基因靶点的药物，选择性杀伤肿瘤细胞的治疗方法。法。靶向药物只作用于特定靶点的肿瘤，特异性强，能选择性杀伤肿瘤细靶向药物只作用于特定靶点的肿瘤，特异性强，能选择性杀伤肿瘤细胞。胞。第4页/共79页肿瘤靶向药物分类和特性第5页/共79页单克隆抗体药物单克隆抗体药物 非结合型单抗非结合型单抗 结合型单抗结合型单抗小分子化合物小分子化合物 酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂 血管生

4、成抑制剂血管生成抑制剂 蛋白酶体抑制剂蛋白酶体抑制剂 环氧化酶抑制剂环氧化酶抑制剂 雌激素受体抑制剂雌激素受体抑制剂 其它小分子化合物其它小分子化合物 凋亡诱导剂凋亡诱导剂 周期蛋白酶抑制周期蛋白酶抑制剂剂 端粒酶抑制剂端粒酶抑制剂第6页/共79页一、单克隆抗体药物一、单克隆抗体药物某些表面抗原主要存在于恶性细胞而不存在于周围正常细胞上，这些某些表面抗原主要存在于恶性细胞而不存在于周围正常细胞上，这些肿瘤相关抗原可成为特异性抗体结合的靶点。能结合到肿瘤细胞上引肿瘤相关抗原可成为特异性抗体结合的靶点。能结合到肿瘤细胞上引发特异性免疫反应而导致细胞死亡的单抗，称为抗肿瘤单抗药物。发特异性免疫反应而

5、导致细胞死亡的单抗，称为抗肿瘤单抗药物。第7页/共79页1.非结合型单抗非结合型单抗这类药物能直接结合到肿瘤细胞上，触发宿主免疫反应，导致细这类药物能直接结合到肿瘤细胞上，触发宿主免疫反应，导致细胞死亡；或通过抗原抗体结合后，阻断或中和靶分子的生物学活胞死亡；或通过抗原抗体结合后，阻断或中和靶分子的生物学活性，干扰细胞间信号转导而发挥抗肿瘤作用。性，干扰细胞间信号转导而发挥抗肿瘤作用。第8页/共79页CD20-利妥昔单抗利妥昔单抗(rituxmab)商品名商品名:美罗华美罗华1997年真正意义上第一个肿瘤靶向药物年真正意义上第一个肿瘤靶向药物抗抗CD20的人鼠嵌合抗体的人鼠嵌合抗体主要治疗复发

6、性或难治性低度恶性主要治疗复发性或难治性低度恶性B细胞淋巴瘤；现也用于中、高度恶性细胞淋巴瘤；现也用于中、高度恶性B细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。第9页/共79页CD52-阿仑单抗阿仑单抗(alemtuzumab)抗抗CD52的人源化单抗的人源化单抗用于治疗苯丙酸氮芥和氟达拉滨治疗失败的用于治疗苯丙酸氮芥和氟达拉滨治疗失败的B淋巴细胞性白血病，某些淋巴细胞性白血病，某些T细胞淋巴瘤如蕈样霉菌病和细胞淋巴瘤如蕈样霉菌病和Sezary综合征。综合征。第10页/共79页HER2-曲妥珠单抗曲妥珠单抗(trastuzumab)商品名商品名:赫赛汀赫赛汀(herceptin)抗抗EGFR 2(Her2)的人源

7、化单抗的人源化单抗用于治疗用于治疗Her2高表达的乳腺癌和其它恶性肿瘤高表达的乳腺癌和其它恶性肿瘤(胃癌、卵巢癌等胃癌、卵巢癌等)。第11页/共79页EGFR-西妥昔单抗西妥昔单抗(cetuximab)抗抗EGFR(Her1)的人鼠嵌合抗体的人鼠嵌合抗体用于治疗标准化方案无效，且用于治疗标准化方案无效，且EGFR阳性的转移性结直肠癌。阳性的转移性结直肠癌。人源化的单克隆抗体帕尼单抗人源化的单克隆抗体帕尼单抗（Panitumumab）第12页/共79页VEGF-贝伐单抗贝伐单抗(bevacizumab)抗抗VEGF的重组人源化单抗的重组人源化单抗抗肿瘤内新生血管形成的作用抗肿瘤内新生血管形成的作

8、用用于治疗进展期或转移性结直肠癌，与标准化方案联合应用，能用于治疗进展期或转移性结直肠癌，与标准化方案联合应用，能显著提高疗效并延长生存。显著提高疗效并延长生存。第13页/共79页2.结合型单抗结合型单抗由能特异性识别肿瘤抗原的单抗偶联到放射性核素或细胞毒由能特异性识别肿瘤抗原的单抗偶联到放射性核素或细胞毒素上，以提高对肿瘤细胞的杀伤力。素上，以提高对肿瘤细胞的杀伤力。第14页/共79页替伊莫单抗替伊莫单抗(britumomab)第一个得到美国第一个得到美国FDA批准的单抗批准的单抗放射性核素偶联物放射性核素偶联物商品名：商品名：Zevalin由由90Y(钇钇)通过连接螯合剂通过连接螯合剂ti

9、uxetan偶联到鼠抗偶联到鼠抗CD20抗体上的抗肿瘤单抗偶联抗体上的抗肿瘤单抗偶联物。物。用于利妥昔单抗治疗无效或复发的低度恶性用于利妥昔单抗治疗无效或复发的低度恶性B细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。第15页/共79页托西莫单抗托西莫单抗(tositumomab)另一种单抗另一种单抗放射性核素偶联物放射性核素偶联物由由131I(碘碘)偶联偶联(bexxan)到鼠抗到鼠抗CD20抗体抗体用于标准化疗方案治疗无效的低度恶性用于标准化疗方案治疗无效的低度恶性B细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。第16页/共79页吉姆单抗吉姆单抗(gemtuzumab)商品名商品名:Mylotarg第一个得到美国第一个得到美国FDA批

10、准的单抗批准的单抗细胞毒素偶联物细胞毒素偶联物由抗由抗CD33重组人源化单抗与细胞毒类抗肿瘤抗生素刺孢霉素重组人源化单抗与细胞毒类抗肿瘤抗生素刺孢霉素(calicheamicin)偶联偶联而成。而成。用于治疗标准化方案初治失败，用于治疗标准化方案初治失败，CD33阳性急性髓性白血病阳性急性髓性白血病(AML)的的60岁以上的中岁以上的中老年患者，现也可与标准化疗方案联合治疗老年患者，现也可与标准化疗方案联合治疗AML。第17页/共79页二、小分子化合物二、小分子化合物某些非细胞毒性小分子化合物具有明确的作用靶点，通过阻断治疗中异常某些非细胞毒性小分子化合物具有明确的作用靶点，通过阻断治疗中异常

11、活化的活化的激酶、生长因子和信号转导通路激酶、生长因子和信号转导通路等途径来抑制肿瘤的生长，从而达等途径来抑制肿瘤的生长，从而达到治疗的目的。这些小分子化合物称为小分子肿瘤靶向治疗药物。到治疗的目的。这些小分子化合物称为小分子肿瘤靶向治疗药物。第18页/共79页1.酪氨酸激酶抑制剂（酪氨酸激酶抑制剂（TKI）第19页/共79页吉非替尼吉非替尼(gefitinib)商品名：易瑞沙商品名：易瑞沙(iressa)是一种针对表皮生长因子受体是一种针对表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶的口服小分子抑制剂酪氨酸激酶的口服小分子抑制剂用于治疗不能手术或复发的用于治疗不能手术或复发的NSCLC。第20页/

12、共79页埃罗替尼埃罗替尼(erlotinib)一种新的、选择性一种新的、选择性EGFR受体酪氨酸激酶抑制剂受体酪氨酸激酶抑制剂可用于治疗对化疗耐药的可用于治疗对化疗耐药的NSCLC、卵巢癌和头颈部癌等。、卵巢癌和头颈部癌等。拉帕替尼（拉帕替尼（Lapatinib）是一种能同时抑制）是一种能同时抑制EGFR和和HER-2，用于，用于Herceptin耐药的乳腺癌。耐药的乳腺癌。第21页/共79页第22页/共79页KIT阳性和可能阳性肿瘤阳性和可能阳性肿瘤GIST精原细胞瘤精原细胞瘤肥大细胞瘤肥大细胞瘤黑色素瘤黑色素瘤/透明细胞肉瘤透明细胞肉瘤ES/PNETKaposi肉瘤肉瘤/血管肉瘤血管肉瘤孤

13、立性纤维瘤孤立性纤维瘤隆突性皮肤纤维肉瘤隆突性皮肤纤维肉瘤肌纤维母细胞瘤肌纤维母细胞瘤/纤维瘤病纤维瘤病分化良好脂肪肉瘤分化良好脂肪肉瘤转移性小细胞癌转移性小细胞癌第23页/共79页甲磺酸伊马替尼甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)商品名商品名:格列卫格列卫(gleevec)能抑制能抑制BCR-ABL酪氨酸激酶及其下游信号转导通路，酪氨酸激酶及其下游信号转导通路，2001年年FDA批准用于治批准用于治疗慢粒（疗慢粒（CML）；）；能抑制能抑制C-Kit和和PEGFR酪氨酸激酶活性，酪氨酸激酶活性，2002年被批准用于治疗年被批准用于治疗C-kit(CD117)或或PDGFRa阳

14、性的、不能手术或转移性胃肠间质瘤（阳性的、不能手术或转移性胃肠间质瘤（GIST）。）。第24页/共79页VEGFR酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂第25页/共79页VEGFR酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂SU668、SU11248、ZD6474、PTK787/ZK222584等等小分子化合物小分子化合物口服或腹腔注射口服或腹腔注射抑制抑制VEGFR酪氨酸激酶的活性，从而抑制血管内皮细酪氨酸激酶的活性，从而抑制血管内皮细胞生长。胞生长。第26页/共79页其它信号转导通路抑制剂其它信号转导通路抑制剂法尼基转移酶法尼基转移酶(farnesyltransferase)，是，是RAS蛋白活化必不可少的

15、关蛋白活化必不可少的关键酶，抑制法尼基转移酶活性，可阻断键酶，抑制法尼基转移酶活性，可阻断RAS蛋白在细胞内信号转导。蛋白在细胞内信号转导。临床试验阶段。临床试验阶段。第27页/共79页第28页/共79页多靶点酶抑制剂多靶点酶抑制剂索拉菲尼索拉菲尼(sorafenib，商品名，商品名Nexavar)：FDA 10年来第一次批准治疗肾癌的药物，还可用于年来第一次批准治疗肾癌的药物，还可用于HCC,Melanoma,NSCLC。范得他尼范得他尼(vandetanib，ZD6474，商品名，商品名Zactima):口服，口服，NSCLCSunitinib：口服，治疗：口服，治疗GIST和晚期肾癌和晚

16、期肾癌第29页/共79页2.血管生成抑制剂血管生成抑制剂主要针对肿瘤血管形成的某些因子及关键步骤进行干预。主要针对肿瘤血管形成的某些因子及关键步骤进行干预。第30页/共79页血管抑素血管抑素(angiostatin)内皮抑素内皮抑素(endostatin)抑制由碱性成纤维细胞生长因子抑制由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱发的血管生长，特异性诱发的血管生长，特异性抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖，但不直接影响肿瘤细胞的增生。抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖，但不直接影响肿瘤细胞的增生。YH16（Endostar，恩度，恩度)为我国生产的重组人血管内皮抑制素注为我国生产的重组人血管内皮抑制素注射液，用于不

17、能手术的射液，用于不能手术的NSCLC。第31页/共79页VEGFR酪氨酸激酶抑制剂酪氨酸激酶抑制剂抑制抑制VEGFR酪氨酸激酶的活酪氨酸激酶的活性，从而抑制血管内皮细胞生性，从而抑制血管内皮细胞生长。长。第32页/共79页O-(氯乙酰氯乙酰-氨甲酰基氨甲酰基)烟曲霉醇烟曲霉醇(TNP-470)一种烟曲霉菌分泌的烟曲霉素的人工合成类似物，对血管内皮细胞一种烟曲霉菌分泌的烟曲霉素的人工合成类似物，对血管内皮细胞增殖的抑制作用强，无明显毒副作用。增殖的抑制作用强，无明显毒副作用。第33页/共79页金属蛋白酶抑制剂金属蛋白酶抑制剂能与基质金属蛋白酶（能与基质金属蛋白酶（MMPs）活性部位的锌结合，抑

18、制血管生）活性部位的锌结合，抑制血管生成。成。第34页/共79页沙利度胺沙利度胺(thalisdomide)反应停反应停抑制抑制bFGF 和和VEGF介导的血管生成；也可抑制介导的血管生成；也可抑制TNF-a合成，合成，阻断阻断NF-kB激活，下调细胞表面粘附分子和减少自由基生成。激活，下调细胞表面粘附分子和减少自由基生成。第35页/共79页3.蛋白酶体抑制剂蛋白酶体抑制剂多酶复合体多酶复合体蛋白酶体蛋白酶体(proteasome)在调节细胞周期上起作用，促进细在调节细胞周期上起作用，促进细胞增殖。胞增殖。硼替佐米硼替佐米(bortezomib)，2003年年FDA批准用于治疗复发性和难治性多

19、发性批准用于治疗复发性和难治性多发性骨髓瘤。骨髓瘤。第36页/共79页4.环氧化酶抑制剂环氧化酶抑制剂环氧化酶环氧化酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素合成过程中的催化酶，包括是前列腺素合成过程中的催化酶，包括COX1和和COX2。结肠腺瘤和结肠癌高表达结肠腺瘤和结肠癌高表达COX2，肺癌、乳腺癌、前列腺癌及脑肿瘤也常过表达，肺癌、乳腺癌、前列腺癌及脑肿瘤也常过表达COX2。选择性选择性COX2抑制剂抑制剂西乐葆西乐葆(celeoxib)用于治疗家族性多发性腺瘤性息肉用于治疗家族性多发性腺瘤性息肉(FAP)，可，可降低结肠癌的发生。降低结肠癌的发生。第37页/共79页5.雌激素

20、受体抑制剂雌激素受体抑制剂他莫西芬他莫西芬(tamoxifen)，能与雌二醇竞争雌激，能与雌二醇竞争雌激素受体，与胞质雌激素受体结合形成复合物，素受体，与胞质雌激素受体结合形成复合物，进入细胞后不能刺激进入细胞后不能刺激RNA和蛋白质合成，从和蛋白质合成，从而抑制依赖雌激素才能生长的肿瘤。而抑制依赖雌激素才能生长的肿瘤。用于治疗绝经后乳腺癌患者的姑息治疗和手用于治疗绝经后乳腺癌患者的姑息治疗和手术后的辅助治疗，也可治疗子宫内膜样腺癌。术后的辅助治疗，也可治疗子宫内膜样腺癌。阿那曲唑阿那曲唑(anastrozole)，来曲唑，来曲唑(letrozole)和和依西美坦依西美坦(exemestane

21、)等芳香化酶抑制剂，等芳香化酶抑制剂，能与内源性底物竞争芳香化酶的活性部位，能与内源性底物竞争芳香化酶的活性部位，抑制酶的活性，明显降低雌激素水平，可用抑制酶的活性，明显降低雌激素水平，可用于治疗绝经妇女的晚期乳腺癌。于治疗绝经妇女的晚期乳腺癌。第38页/共79页6.其它小分子化合物其它小分子化合物(正在临床试验阶段正在临床试验阶段)凋亡诱导剂凋亡诱导剂周期蛋白酶抑制剂周期蛋白酶抑制剂端粒酶抑制剂端粒酶抑制剂反义核苷酸反义核苷酸第39页/共79页肿瘤靶向治疗中肿瘤靶向治疗中分子靶点的检测及结果判读分子靶点的检测及结果判读第40页/共79页分子靶点检测的常用技术分子靶点检测的常用技术免疫组织化学

22、免疫组织化学(IHC)实时荧光定量实时荧光定量PCR(qRT-PCR)荧光原位杂交荧光原位杂交(FISH)显色原位杂交显色原位杂交(CISH)DNA测序测序(DNA Sequence)第41页/共79页1.免疫组织化学技术免疫组织化学技术(IHC)检测肿瘤分子靶点的蛋白产物表达情况。检测肿瘤分子靶点的蛋白产物表达情况。最常用和最简便。最常用和最简便。第42页/共79页CD20正常正常B淋巴细胞从前体淋巴细胞从前体B细胞到前细胞到前浆细胞，绝大多数浆细胞，绝大多数B细胞淋巴瘤均细胞淋巴瘤均表达；表达；阳性反应定位于细胞膜上。阳性反应定位于细胞膜上。第43页/共79页C-KIT蛋白蛋白(CD117

23、)非受体酪氨酸激酶非受体酪氨酸激酶绝大多数绝大多数GIST存在存在C-KIT基因功能获得基因功能获得性突变，导致该基因性突变，导致该基因不需与配体结合，即不需与配体结合，即可发生自磷酸化而激可发生自磷酸化而激活信号转导通路活信号转导通路CD117的阳性反应定的阳性反应定位于细胞膜或和胞浆。位于细胞膜或和胞浆。第44页/共79页HER2蛋白具有受体酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体蛋白，在控制上皮细胞生长、具有受体酪氨酸激酶活性的表皮生长因子受体蛋白，在控制上皮细胞生长、分化、粘附和活动等细胞信号转导通路的活化上起重要作用。分化、粘附和活动等细胞信号转导通路的活化上起重要作用。曲妥珠单抗能下调过度

24、表达曲妥珠单抗能下调过度表达HER2蛋白的乳癌癌细胞表面蛋白的乳癌癌细胞表面HER2受体的数受体的数目。目。1998年年FDA批准了单抗治疗前的标准检测程序批准了单抗治疗前的标准检测程序检测对象为浸润性乳腺癌检测对象为浸润性乳腺癌阳性反应定位于细胞膜阳性反应定位于细胞膜第45页/共79页第46页/共79页ST.GALLEN 2007HER2：乳腺癌危险因素的新定义：乳腺癌危险因素的新定义RISK G1 T2ER/PR+淋巴结淋巴结-HER2-LVI无无淋巴结淋巴结1-3 和和HER2+,ER/PR-或或淋巴结淋巴结4年龄年龄2淋巴结淋巴结-,HER2+,ER/PR-或或LVI 侵润淋巴结侵润淋

25、巴结1-3且且HER2-,ER/PR+低低中中高高RISK第47页/共79页2007 ASCO/CAP GuidelinesScore 0 No staining is observed or cell membrane staining is observed in less than10%of the tumor cells.Score 1+A faint perceptible membrane staining can be detected in more than 10%of the tumor cells.The cells are only stained in part of

26、 their membrane.Score 2+A weak to moderate complete membrane staining is observed in more than 10%of the tumor cells.Score 3+A strong complete membrane staining is observed in more than 30%of the tumor cells.JCO,25(1):2007第48页/共79页2009版中国乳腺癌版中国乳腺癌HER2指南指南0：无着色，或：无着色，或10%的浸润癌细胞呈现弱或中度强的浸润癌细胞呈现弱或中度强度，且

27、不完整的膜着色；度，且不完整的膜着色；2+：10%浸润癌细胞呈现弱或中度强度，浸润癌细胞呈现弱或中度强度，且完整的膜着色；或且完整的膜着色；或30%癌细胞胞膜强染色，连续，环癌细胞胞膜强染色，连续，环绕整个胞膜。绕整个胞膜。第49页/共79页0,1+Negative2+equivocal3+Positive(曲妥珠治疗指征曲妥珠治疗指征)第50页/共79页第51页/共79页EGFR/HER1蛋白位于位于7p的的EGFR基因的蛋白产物，广泛分布于哺乳动物的上皮细胞中基因的蛋白产物，广泛分布于哺乳动物的上皮细胞中西妥昔单抗直接作用于西妥昔单抗直接作用于EGFR的细胞外配体结合区，阻断的细胞外配体结

28、合区，阻断EGF和和TGF等配体与等配体与EGFR结合，从而抑制细胞内酪氨酸激酶的活性，导致肿瘤细胞生长抑制和凋亡结合，从而抑制细胞内酪氨酸激酶的活性，导致肿瘤细胞生长抑制和凋亡2004年年FDA批准西妥昔单抗用于治疗批准西妥昔单抗用于治疗EGFR阳性的转移性大肠癌阳性的转移性大肠癌第52页/共79页EGFR/HER1蛋白蛋白阳性反应定位于细胞阳性反应定位于细胞膜。膜。反应强度分为反应强度分为1+、2+、3+。1%癌细胞的胞膜染癌细胞的胞膜染色超过背景细胞即为色超过背景细胞即为阳性，无论染色是否阳性，无论染色是否完整环绕胞膜。完整环绕胞膜。第53页/共79页ER、PR蛋白蛋白阳性反应定位于细胞

29、核。阳性反应定位于细胞核。染色强度及百分比。染色强度及百分比。2010 ASCO/CAP guideline 1%Positive,10%确切的用药标准，确切的用药标准，1-10%，需综合考虑，需综合考虑第54页/共79页2.实时荧光定量实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肿瘤分子靶点的检测肿瘤分子靶点的mRNA表达情况。表达情况。操作简单，灵敏度高，快速，高通量。操作简单，灵敏度高，快速，高通量。仪器昂贵，最好需要标准仪器昂贵，最好需要标准PCR室。室。有替代测序应用于基因突变检测，如有替代测序应用于基因突变检测，如EGFR,K-ras检测。检测。第55页/共79页2-ct第56页/共7

30、9页3.荧光原位杂交技术荧光原位杂交技术(FISH)是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记的的DNA探针与细胞核内的探针与细胞核内的DNA靶序列杂交。靶序列杂交。在荧光显微镜下，于细胞和在荧光显微镜下，于细胞和(或或)组织原位观察组织原位观察并分析细胞核内杂交于并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的多种彩靶序列的多种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色体色探针信号，以获得细胞内多条染色体(或染或染色体片段色体片段)或多种基因状态的信息。或多种基因状态的信息。FISH检测基因扩增，准确性比其它检测技术检测基因扩增，准确性比其它检测技术高，可避免由于染色体的多体而呈

31、现的假阳高，可避免由于染色体的多体而呈现的假阳性，金标准。性，金标准。缺点：技术操作复杂，试剂及设备昂贵。缺点：技术操作复杂，试剂及设备昂贵。第57页/共79页样本预处理样本预处理探针、样本变性探针、样本变性探针样本杂交探针样本杂交杂交后洗涤杂交后洗涤结果观察结果观察原理及实验操作原理及实验操作第58页/共79页HER2基因：基因：FISHHER2试剂盒为双色荧光标记探针：试剂盒为双色荧光标记探针：HER-2基因，为橘红色荧光，该基因所在的基因，为橘红色荧光，该基因所在的17号染色体着丝点为绿色荧光作为内对照，用于判断号染色体着丝点为绿色荧光作为内对照，用于判断HER-2基因的拷贝数增多是真正

32、基因的拷贝数增多是真正扩增，还是由于扩增，还是由于17号染色体的多体而导致号染色体的多体而导致HER2基因拷贝数相对增多。基因拷贝数相对增多。O/G2.2，PostiveO/G2.0 or O6 PostiveO/G90%第67页/共79页Concordance between FISH and IHC HER-2 status determination using the 30%criterionFISH-positiveF ISH-negativeTotalIHC-positive(3+)1699178IHC-negative(0,1+,2+)12104116Total181113294

33、ConcordanceEstimate95%CI coefficient0.8500.787 to 0.913Sensitivity93.4%89.9%to 96.9%Specificity92.0%87.1%to 96.9%Overall*92.9%90.0%to 95.8%第68页/共79页IHC,CISH,FISH符合率符合率IHCCISH（）（）FISH（）（）Group I0/1+,n=69无扩增，无扩增，67/69（97）无扩增，无扩增，69/69（100）Group II3+,n=50扩增，扩增，47/50（94）扩增，扩增，46/50（92）Group III2+，n=135

34、无扩增，无扩增，89/135；（；（66）扩增，扩增，37/135；（；（27）第69页/共79页5.DNA测序技术测序技术将组织中将组织中DNA提取后行提取后行PCR扩增，然后用测序分析仪分析有无基因突变、突变扩增，然后用测序分析仪分析有无基因突变、突变位点和突变形式的方法。位点和突变形式的方法。目前主要用于目前主要用于C-KIT、PDGFR、K-ras、EGFR、BRAF等突变，为临床靶向等突变，为临床靶向药物治疗和疗效判断提供客观依据。药物治疗和疗效判断提供客观依据。第70页/共79页基因序列分析基因序列分析PDGFRA-18 杂合性点突变：杂合性点突变：AA:842位，位，GACGTC

35、，杂合子，天门冬氨酸，杂合子，天门冬氨酸(Asp,D)缬氨酸缬氨酸(Val,V)。第71页/共79页C-KIT基因基因大多数大多数GIST存在存在C-KIT基因突变，突变率基因突变，突变率72.6%；突变用药才有效。突变用药才有效。其中：第其中：第11号外显子占号外显子占64%，第，第9号外显子占号外显子占7%，第，第13号外显子占号外显子占1%，第，第17号外显子占号外显子占0.6%。第72页/共79页EGFR基因基因回顾性回顾性期临床研究显示：吉非替尼对女性、非吸烟、细支气管肺泡癌患者有期临床研究显示：吉非替尼对女性、非吸烟、细支气管肺泡癌患者有效效存在杂合性突变致存在杂合性突变致EGFR

36、功能性获得的患者才对吉非替尼治疗有反应功能性获得的患者才对吉非替尼治疗有反应非小细胞肺癌：检测非小细胞肺癌：检测EGFR外显子外显子18-21的突变状况的突变状况第73页/共79页K-ras 突变突变2009年年7月月FDA：维克替比（帕尼单抗：维克替比（帕尼单抗Panitumumab）和爱必妥）和爱必妥（西妥昔单抗（西妥昔单抗Cetuximab）药品说明书）药品说明书:如果患者肿瘤细胞中如果患者肿瘤细胞中K-ras基因的基因的12或或13密码子发生突变，不能获益。密码子发生突变，不能获益。NCCN及及ASCO:CRC、HCC接受接受EGFR单抗治疗必须检测单抗治疗必须检测K-ras基因有无突

37、变。基因有无突变。第74页/共79页21世纪病理世纪病理提供疾病提供疾病 病理诊断病理诊断 预后指标预后指标 预测指标预测指标 分子靶点分子靶点要求要求 病理形态学基础病理形态学基础 分子病理学知识分子病理学知识 细胞和分子遗传学技术细胞和分子遗传学技术第75页/共79页Question 1.下列分子靶点检测检测技术应下列分子靶点检测检测技术应用正确的有那些用正确的有那些IHC检测蛋白表达检测蛋白表达qRT-PCR检测检测DNA扩增扩增CISH检测检测mRNA表达表达DNA Sequence检测基因突变检测基因突变FISH检测基因扩增检测基因扩增第76页/共79页Question 2.下列那些靶向药物治疗选下列那些靶向药物治疗选择是合适的？择是合适的？A.乳腺癌乳腺癌HER2 FISH检测检测O/G=1.7，用，用Heceptin治疗治疗B.胃肠间质瘤胃肠间质瘤c-kit检测有突变用检测有突变用Gleevec治疗治疗C.结肠癌结肠癌K-ras检测有突变，用检测有突变，用Cetuximab 治治疗疗D.肺腺癌肺腺癌EGFR检测有突变，用检测有突变，用Iressa治疗治疗E.弥漫大弥漫大B 细胞瘤免疫组化检测细胞瘤免疫组化检测CD20+，用，用Rituxmab治疗治疗第77页/共79页第78页/共79页感谢您的观看！第79页/共79页