肠道病原菌分离与鉴定一.pptx

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1、培养基的制备(一)肉汤培养基材料：鲜牛肉、蛋白胨、氯化钠、pH试纸、10碳酸氢钠、试管、三角烧瓶、蒸馏水等。方法 1将新鲜牛肉500g切碎或搅碎，加水1000ml，放4冰箱或冷处浸泡过夜，然后煮沸30min，放凉，使残余的脂肪凝固，再用绒布或滤纸过滤，将滤液补足为原量。21000ml肉水中加入蛋白胨10g、氯化钠5g，加热溶解。3用精密pH试纸测酸碱度，用10碳酸氢钠校正pH为左右。过碱时，可用10醋酸校正之。4分装于试管中或三角烧瓶中，15磅(121)高压蒸气灭菌2030min。第1页/共10页高压蒸汽灭菌器第2页/共10页(二)普通琼脂培养基材料：肉水、蛋白胨、氯化钠、琼脂、无菌平皿、灭菌

2、试管、三角烧瓶等。方法 1按上记数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧瓶中，加热溶化。2用pH试纸测酸碱度，用10碳酸氢钠校正pH为左右。315磅高压蒸气灭菌2030min。4趁热将溶化的培养基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约15ml，凝固后即成普通琼脂平板培养基；如趁热将培养基倒入灭菌试管内，再将试管斜放试验台上，凝固后即成普通琼脂斜面培养基。第3页/共10页(三)血液琼脂培养基 有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂培养基上生长不良，可用血液琼脂培养基进行培养。材料 普通琼脂培养基 血液(脱纤维羊血或兔血)方法 1加热溶化普通琼脂培养基。2待冷至50左右时，加入无菌的脱纤维血液，混匀(注意勿

3、使产生泡沫)。3分注于灭菌试管或平皿中制成血斜面和血平板培养基。第4页/共10页琼脂培养基的制备成分 蛋白胨 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20g 乳糖溶液(20)50ml 伊红溶液(2)20ml 美蓝溶液)20ml 蒸馏水 1000ml制法 将蛋白胨和磷酸氢二钾加温溶化于蒸馏水中 校正pH值为加入琼脂 煮沸溶化过滤后分装三角瓶中，每瓶定量分装 15磅30min高压灭菌 以无菌操作法按量加入经10磅20min高压灭菌的乳糖、伊红美兰液，混匀后倾注平皿备用。第5页/共10页培养基原理 大肠杆菌能分解乳糖产酸，使培养基pH值下降，伊红与美蓝相结合成一种复合物，酸性环境中，菌体带正电，易与伊红结合

4、，故菌落呈紫黑色或紫红色，并有金属光泽。碱性环境中伊红与美蓝不结合，病原菌不分解乳糖，不产酸故菌落为无色半透明。其次，伊红、美蓝有抑制革兰氏阳性菌生长的作用。用途 用于分离肠道致病菌，是一种鉴别培养基。并有弱的选择作用。第6页/共10页第7页/共10页肥达氏反应肥达氏反应通常用已知的伤寒杆菌“O”、“H”菌液和甲、乙型副伤寒杆菌“H”菌液与病人血清作定量凝集试验(试管法)，以检测病人血清中有无相应抗体存在，根据抗体含量多少及增长情况用于伤寒、副伤寒病的辅助诊断。材料 待检可疑伤寒病人血清(1:10稀释)诊断菌液：伤寒杆菌“O”(O)伤寒杆菌“H”(OH)甲型副伤寒杆菌“H”(PA)乙型副伤寒杆

5、菌“H”(PB)生理盐水 吸管，小试管等。第8页/共10页方法本实验四人一组，每人取本实验四人一组，每人取6只小试管，排成一列，计只小试管，排成一列，计四列为一完整试验。分别标明每列管号和诊断菌液如四列为一完整试验。分别标明每列管号和诊断菌液如“O”、“OH”、“PA”、“PB”。按下表先向每管。按下表先向每管加生理盐水，再加加生理盐水，再加10倍稀释病人血清于第倍稀释病人血清于第l管，做顺序管，做顺序的等倍稀释，最后加入等量的诊断菌液，充分混匀，的等倍稀释，最后加入等量的诊断菌液，充分混匀，置置37 24h，再放室温，再放室温24小时后观察结果。小时后观察结果。试试 管管123456生理盐水（生理盐水（ml）0.50.50.50.50.50.5病理血清病理血清10X（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5弃去弃去诊断菌液（诊断菌液（ml）0.50.50.50.50.50.5第9页/共10页感谢您的观看！第10页/共10页