免疫学检测技术 (3)精选PPT.ppt
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1、关于免疫学检测技术(3)第1页,讲稿共41张,创作于星期日 免免免免疫疫疫疫学学学学诊诊诊诊断断断断第一节第一节 抗原或抗体的检测抗原或抗体的检测第2页,讲稿共41张,创作于星期日 抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的原理物质基础:抗原的物质基础:抗原的抗原决定基抗原决定基与抗体的与抗体的抗原结合部位抗原结合部位之间的结构互补性。之间的结构互补性。两者相互结合,在适宜条件下,出现可两者相互结合,在适宜条件下,出现可见反应。见反应。第3页,讲稿共41张,创作于星期日 一、抗原抗体反应的一、抗原抗体反应的特点及其影响因素特点及其影响因素1、特异性、特异性2、可见性(比例适合)、可见性(比例适合)3、可
2、逆性、可逆性第4页,讲稿共41张,创作于星期日1.特异性特异性抗原A抗原C抗原B特异性反应交叉反应无反应第5页,讲稿共41张,创作于星期日2、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性抗原抗体按适当比例结合,形成肉眼可见的现象抗原抗体按适当比例结合,形成肉眼可见的现象抗原抗体按适当比例结合,形成肉眼可见的现象抗原抗体按适当比例结合,形成肉眼可见的现象适合比例性适合比例性抗体含量抗原含量前带后带等价带第6页,讲稿共41张,创作于星期日网格学说(网格学说(lattice theorylattice theory)抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适第7页,讲稿共41张,创作于星期日3.可逆性可逆性亲和
3、力(亲和力(亲和力(亲和力(affimityaffimity)与亲合力()与亲合力()与亲合力()与亲合力(avidityavidity)抗体抗原之间的结合力大小。抗体抗原之间的结合力大小。抗体抗原之间的结合力大小。抗体抗原之间的结合力大小。结合力大则亲和力强结合力大则亲和力强结合力大则亲和力强结合力大则亲和力强 ,不易解离,反之则然。,不易解离,反之则然。,不易解离,反之则然。,不易解离,反之则然。K(亲和常数)=Ag+AbAg Ab第8页,讲稿共41张,创作于星期日应应 用用1、利用已知抗原检测未知抗体、利用已知抗原检测未知抗体(1)检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病:)检测病原微生物
4、的相应抗体以辅助诊断疾病:伤寒伤寒病、流行性乙型脑炎、病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。病等。(2)检测自身抗体)检测自身抗体诊断自身免疫病:诊断自身免疫病:SLE、类风湿性关节、类风湿性关节炎等炎等2、利用已知抗体检测未知抗原、利用已知抗体检测未知抗原(1)鉴定病原菌:诊断疾病)鉴定病原菌:诊断疾病(2)检测肿瘤相关抗原:检测甲胎蛋白以诊断肝癌)检测肿瘤相关抗原:检测甲胎蛋白以诊断肝癌(3)检测血型抗原、)检测血型抗原、HLA抗原:鉴定血型,亲子鉴定抗原:鉴定血型,亲子鉴定(4)检测药物半抗原:)检测药物半抗原:确认运动员是否服用兴奋剂确认运动员是否服用兴奋剂第9页,讲稿共41张,创作于星期
5、日二、二、抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法 凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体参与的抗原抗体反应补体参与的抗原抗体反应免疫标记技术免疫标记技术第10页,讲稿共41张,创作于星期日第11页,讲稿共41张,创作于星期日 (一)(一)凝集反应(凝集反应(agglutinationagglutination)颗颗粒粒性性抗抗原原(红红细细胞胞、细细菌菌、乳乳胶胶颗颗粒粒等等)与与抗抗体体特异性结合,形成肉眼可见的凝集块。特异性结合,形成肉眼可见的凝集块。1 1、直接凝集、直接凝集、直接凝集、直接凝集(direct agglutination)(direct agglutination)玻片凝
6、集、试管凝集玻片凝集、试管凝集玻片凝集、试管凝集玻片凝集、试管凝集2 2、间接凝集(、间接凝集(、间接凝集(、间接凝集(indirect agglutinationindirect agglutination)3 3、抗球蛋白试验(、抗球蛋白试验(、抗球蛋白试验(、抗球蛋白试验(CoombsCoombs试验)试验)试验)试验)抗原与单价抗体(不完全抗体)结合不出现凝集块,抗原与单价抗体(不完全抗体)结合不出现凝集块,抗原与单价抗体(不完全抗体)结合不出现凝集块,抗原与单价抗体(不完全抗体)结合不出现凝集块,再加入抗球蛋白后即形成凝集块。再加入抗球蛋白后即形成凝集块。再加入抗球蛋白后即形成凝集块
7、。再加入抗球蛋白后即形成凝集块。用于检测抗用于检测抗用于检测抗用于检测抗RhRh抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。血细胞凝集实验及补体血细胞凝集实验及补体结合实验结合实验第12页,讲稿共41张,创作于星期日第13页,讲稿共41张,创作于星期日(二)沉淀反应(二)沉淀反应(precipitationprecipitation)1、单向免疫扩散(single immunodiffusion):常用于测定):常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。可溶性抗原可溶性抗原可溶性抗原可溶性抗原(免疫球蛋白、细胞裂解物
8、、组织浸液等)与相应(免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等)与相应(免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等)与相应(免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等)与相应抗体结合,抗体结合,抗体结合,抗体结合,形成不溶性免疫复合物,出现不透明的沉淀物。多在半形成不溶性免疫复合物,出现不透明的沉淀物。多在半形成不溶性免疫复合物,出现不透明的沉淀物。多在半形成不溶性免疫复合物,出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行,形成白色的沉淀。固体琼脂凝胶上进行,形成白色的沉淀。固体琼脂凝胶上进行,形成白色的沉淀。固体琼脂凝胶上进行,形成白色的沉淀。沉淀环沉淀环沉淀环沉淀环抗体混于琼脂凝胶抗体混于琼脂凝胶抗体混于琼脂凝胶
9、抗体混于琼脂凝胶中制板中制板中制板中制板环的直径与抗原含环的直径与抗原含环的直径与抗原含环的直径与抗原含量成正相关量成正相关量成正相关量成正相关单向免疫扩散及免疫电泳单向免疫扩散及免疫电泳第14页,讲稿共41张,创作于星期日1、单向免疫扩散(single immunodiffusion):常用于测定):常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。第15页,讲稿共41张,创作于星期日(四)免疫标记技术(四)免疫标记技术第16页,讲稿共41张,创作于星期日 用用用用标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊进行抗原抗体反
10、应借以提高免疫学诊进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性断的敏感性断的敏感性断的敏感性荧光素荧光素荧光素荧光素 :异硫氰酸荧光素(黄绿色异硫氰酸荧光素(黄绿色异硫氰酸荧光素(黄绿色异硫氰酸荧光素(黄绿色荧光)、藻红蛋白、荧光)、藻红蛋白、荧光)、藻红蛋白、荧光)、藻红蛋白、罗丹明(红色罗丹明(红色罗丹明(红色罗丹明(红色荧光)荧光)荧光)荧光)放射性同位素:放射性同位素:放射性同位素:放射性同位素:125125I I、131131I I酶:酶:辣根过氧化物酶、辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶硷性磷酸酶免疫荧光检测法(免疫荧光检测法(免疫荧光检测法(免疫荧光检测法(
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