实验五金黄色葡萄球菌检测概述PPT课件.ppt
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1、关于实验五金黄色葡萄球菌检测概述第一张,PPT共三十八页,创作于2022年6月生物学特性-菌体形态及培养特征革兰氏阳性球菌,直径为0.8-1.0微米,镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群;无芽孢,不运动;兼性厌氧菌,在好氧条件下生长最好;可在15%氯化钠和40%胆汁中生长第二张,PPT共三十八页,创作于2022年6月生物学特性-菌体形态及培养特征大多数菌株能生长在6.5-46之间(最适温度30-37)能在pH4.2-9.3之间生长(最适pH为7.0-7.5);大多数菌株产生类胡罗卜素,使细胞团呈现出深橙色到浅黄色,色素的产生取决于生长的条件,而且在单个菌株中可能也有变化第三张,PPT共三十八
2、页,创作于2022年6月生物学特性-菌体形态及培养特征好氧生长的细胞产生接触酶;产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶,大多数菌株可水解天然的动物蛋白,例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多肽类如明胶,水解脂类、吐温类和磷脂蛋白质,并释放脂肪酸;所有的毒株产生凝固酶,人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。第四张,PPT共三十八页,创作于2022年6月致病性 金黄色葡萄球菌为条件致病菌,菌株致病力的强弱金黄色葡萄球菌为条件致病菌,菌株致病力的强弱金黄色葡萄球菌为条件致病菌,菌株致病力的强弱金黄色葡萄球菌为条件致病菌,菌株致病力的强弱主要取决于其产生的主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶
3、毒素和侵袭性酶毒素和侵袭性酶毒素和侵袭性酶:a.a.溶血素溶血素溶血素溶血素:外毒素,分:外毒素,分、四种,能损伤血小板,破坏四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死;溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死;b.b.杀白细胞素杀白细胞素杀白细胞素杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞;:可破坏人的白细胞和巨噬细胞;c.c.血浆凝固酶血浆凝固酶血浆凝固酶血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染
4、易局部化与此酶有关;球菌形成的感染易局部化与此酶有关;d.d.脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;e.e.肠毒素肠毒素肠毒素肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为毒素,分为A A、B B、C C、D D、E E五种。五种。第五张,PPT共三十八页,创作于2022年6月致病性葡萄球菌性葡萄球菌性食物中毒食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的
5、疾病,可引发不同程度的急性胃肠炎症状,恶心、呕吐最为突出而且普遍,腹痛、腹泻次之。当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品,如当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品,如牛奶和奶制品、肉、蛋等,在温度条件适宜时,经牛奶和奶制品、肉、蛋等,在温度条件适宜时,经8-108-10小时即可相当数量的肠毒素。小时即可相当数量的肠毒素。第六张,PPT共三十八页,创作于2022年6月分布 在自然界中广泛存在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。在自然界中广泛存在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌,其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头作为人和动物的常见病原菌
6、,其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上,发上,50%50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而,食品受其污染的机会很多。而,食品受其污染的机会很多。传播媒介为被该菌污染的食品,主要为淀粉类传播媒介为被该菌污染的食品,主要为淀粉类(如剩饭、米面、如剩饭、米面、粥等粥等)、牛乳及乳制品,以及鱼、肉、蛋类等。被污染的食物在室温、牛乳及乳制品,以及鱼、肉、蛋类等。被污染的食物在室温2020-22-22放置放置5 5小时以上时,病菌大量繁殖,并产生肠毒素。小时以上时,病菌大量繁殖,并产生肠毒素。第七张,PPT共三十八页,创作于2022年6月流行病
7、学季节分布,多见于春夏季;季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。第八张,PPT共三十八页,创作于2022年6月流行病学 金黄色葡萄球菌肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%33%,加拿大则更多,占45%45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。第九张,PPT共三十八页,创作于20
8、22年6月流行病学肠毒素形成条件:肠毒素形成条件:存放温度,在存放温度,在37C37C内,温度越高,产毒时间越短;内,温度越高,产毒时间越短;存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素;存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素;食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成。第十张,PPT共三十八页,创作于2022年6月耐受力几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金黄色葡萄球菌都有严重的破坏作用肠毒素可耐受100100 30 30分钟不被破坏。对于加工过的食品或食品加工设备而言,此菌或其肠对于加工过的食品或食品加工设备而言,此菌或其肠毒素的存在通常作为卫生条件差的一种指标。毒素的存
9、在通常作为卫生条件差的一种指标。第十一张,PPT共三十八页,创作于2022年6月污染的控制防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染食品食品 防止带菌人群对各种食物的污染:定期对生产加工人员进行健康检查,患局部化脓性感染(如疥疮、手指化脓等)、上呼吸道感染(如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等)的人员要暂时停止其工作或调换岗位。第十二张,PPT共三十八页,创作于2022年6月污染的控制防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染食品食品食品食品 防止金黄色葡萄球菌对防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品奶及其制品的污染:如牛奶厂的污染:如牛奶厂要定期检查奶牛的
10、乳房,不能挤用患化脓性乳腺炎的牛要定期检查奶牛的乳房,不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶;奶挤出后,要迅速冷至奶;奶挤出后,要迅速冷至-10-10以下,以防毒素生成、以下,以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料,注意低温保存。细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料,注意低温保存。第十三张,PPT共三十八页,创作于2022年6月污染的控制防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染防止金黄色葡萄球菌污染食品食品食品食品 对对肉制品肉制品加工厂,患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去加工厂,患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位,经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。病变部位,
11、经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。第十四张,PPT共三十八页,创作于2022年6月污染的控制防止金黄色葡萄球菌防止金黄色葡萄球菌防止金黄色葡萄球菌防止金黄色葡萄球菌肠毒素肠毒素肠毒素肠毒素的生成的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物,以防肠毒素形成;在气温高的春夏季,食物置冷藏或通风阴凉地方也不在气温高的春夏季,食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过应超过6小时,并且食用前要彻底加热。小时,并且食用前要彻底加热。第十五张,PPT共三十八页,创作于2022年6月检测步骤-增菌利用金黄色葡萄球菌利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性(可耐受15%15%的氯化的氯化钠),用含钠),用含10%氯化钠的胰酪
12、胨大豆肉汤增菌。氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌。第十六张,PPT共三十八页,创作于2022年6月检测步骤-分离血平板:金黄色葡萄球菌可以产生溶血素,因此在血平板上产生明显的溶血环。血平板上其血平板上其典型菌落典型菌落呈金黄色,呈金黄色,有时也为白色,大而突起,圆有时也为白色,大而突起,圆形,不透明,表面光滑,有溶形,不透明,表面光滑,有溶血圈。血圈。第十七张,PPT共三十八页,创作于2022年6月检测步骤-分离BP平板平板:胰蛋白胨胰蛋白胨、牛肉膏牛肉膏和和酵母膏酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌
13、株有毒性,并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸甘氨酸和和氯化锂氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。抑制作用。第十八张,PPT共三十八页,创作于2022年6月检测步骤-分离在BPBP平板上其平板上其典型菌落典型菌落为:圆形,光滑突起,湿润,直为:圆形,光滑突起,湿润,直径径2-3mm2-3mm,颜色呈灰色到黑玉色,边缘常为淡色(米,颜色呈灰色到黑玉色,边缘常为淡色(米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色),周围为一黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色),周围为一混混浊带浊带,在其外缘常有一,在其外缘常有一透明圈
14、透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。偶然会遇到不分解脂肪菌株,除无混浊带及透明圈外,偶然会遇到不分解脂肪菌株,除无混浊带及透明圈外,其他外观基本相同。其他外观基本相同。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落,其黑色长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落,其黑色常较典型菌落淡些,且外观可能粗燥,质地较干燥。常较典型菌落淡些,且外观可能粗燥,质地较干燥。第十九张,PPT共三十八页,创作于2022年6月检测步骤-鉴定金黄色葡萄球菌可以产生金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶凝固酶,因此对其鉴别的主要实验是测定其凝固酶。对于凝固不完全的菌株,可以通过一些其他实验来进一对于凝固不完全的菌株,可以通过一
15、些其他实验来进一步步确认确认,例如:厌氧葡萄糖发酵、溶葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核酸酶实验等。所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。第二十张,PPT共三十八页,创作于2022年6月一、实验目的要求一、实验目的要求了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。判断。掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。第二十一张,PPT共三十八页,创作于2022年6月二、原理二、原理二、原
16、理二、原理葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲料、食品葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、剩饭、糕点、牛奶、肉品等糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在,大部以及人和动物的体表粘膜等处均有存在,大部分是不致病,也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个分是不致病,也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症,还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁种。可引起皮肤组织炎症,还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖,产生毒素,人误食了含有毒素的食品,就会发生食物中毒,故食品殖,产生毒素,人误食了含有毒素的食品,就会发
17、生食物中毒,故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险,检查食品中金黄色中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险,检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。葡萄球菌及数量具有实际意义。金黄色葡萄球菌能产生凝固酶,使血浆凝固,多数致病菌株能产生溶血金黄色葡萄球菌能产生凝固酶,使血浆凝固,多数致病菌株能产生溶血毒素,使血琼脂平板菌落周围出现溶血环,在试管中出现溶血反应。这毒素,使血琼脂平板菌落周围出现溶血环,在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。第二十二张,PPT共三十八页,创作于2022年6月 三、试剂和仪器三、试剂
18、和仪器三、试剂和仪器三、试剂和仪器(一)最先准备的器材(一)最先准备的器材(一)最先准备的器材(一)最先准备的器材规格名称规格名称数量数量用途用途1 1、500ml500ml三角瓶三角瓶1 1个个7.5%7.5%氯化钠肉汤氯化钠肉汤 2 2、500ml500ml三角瓶三角瓶1 1个个10%10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤氯化钠胰酪胨大豆肉汤 3 3、250ml250ml三角瓶三角瓶4 4个个制血培养基等制血培养基等4 4、10100mm10100mm试管试管6 6支支血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验5 5、1ml1ml移液管移液管2 2支支6 6、10ml10ml移液管移液管2 2 支支 7 7、直径为
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