艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术讲稿.ppt

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1、关于艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术第一页，讲稿共四十五页哦艾滋病抗体检测及样品处理艾滋病抗体检测及样品处理一、一、HIV抗体抗体检测筛查检测筛查方法方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。）第二页，讲稿共四十五页哦二、二、筛查筛查程序程序初筛和复检流程（图1）第三页，讲稿共四十五页哦第四页，讲稿共四十五页哦三、三、筛查试验结筛查试验结果的果的报报告告（建议用修改后附表3）（例）HIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。第五页，讲稿共四十五页哦四四、HIV感感染

2、染产产妇妇所所生生儿儿童童HIV抗体抗体检测检测策略及流程策略及流程 1 1、适用范、适用范围围HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。第六页，讲稿共四十五页哦2 2、检测检测程序程序第七页，讲稿共四十五页哦五、五、样样品的品的处处理理1 1样样品的保存品的保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于28，一周以上应存放于-20以下。2.2.样样品的运送品的运送（例）（例）（1）应符合生物安全要求；(2)应采用三层容器对样品进行包装。第八页，讲稿共四十五页哦第第一一层层容容器器：

3、直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。第第三三层层容容器器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签、联系方式，还应易于消毒。第九页，讲稿共四十五页哦第十页，讲稿共四十五页哦(3)用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻冻存存条件下运送。第十一页，讲稿共四十五页哦质量控制质量控制一一、艾艾滋滋病病抗抗体体检检测测的的统统计计学学室内室内质质量控制量控制1 1、试剂试剂盒内部盒内部对对照照即试剂盒提供的阳性和阴性对照血清。

4、用于判断实验的有效性，不能作为室内质控品使用，内部对照结果无效，必须重新试验。第十二页，讲稿共四十五页哦2 2、室内、室内质质控品控品为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的23倍为宜。作用：判断该批临床样品检测的有效性，每每次次实实验验必必须须包包含含室室内内质质控控品品，其结果无效，必须重新试验。第十三页，讲稿共四十五页哦二二、统统计计室室内内质质控控的的主主要要表表示示方法方法建立建立质质控控图图最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，下面以ELISA方法检测

5、HIV抗体为例，描述建立质控图步骤：第十四页，讲稿共四十五页哦第十五页，讲稿共四十五页哦第十六页，讲稿共四十五页哦第十七页，讲稿共四十五页哦2 2、绘绘制制质质控控图图（a）在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数（）和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。（b）将均值（）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标（Y轴），每一批次试验作横座标（x轴），绘制质控图。第十八页，讲稿共四十五页哦（c）从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。第十九页，讲稿共四十五页哦3 3、质质控控规则规则及其

6、使用及其使用质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，目前有许多质控规则，常用的是12S和13S规则。（a）告警（12S）：当外部质控品的S/CO值超出+2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。第二十页，讲稿共四十五页哦（b）失控（13S）：当外部质控品的S/CO值超出+3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品 稳定性下降所致。（c）漂移：连续几次（35次）外部质控品的S/CO值都落在均值的一侧则称为漂移，提示实验条件发生了较大的变化。（d）趋势：连续几次（

7、57次）外部质控品的S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。第二十一页，讲稿共四十五页哦艾滋病实验室生物安全艾滋病实验室生物安全一、一、HIV的生物危害的生物危害第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。第二十二页，讲稿共四十五页哦二二、HIV相相关关检检测测的的生生物物安安全全级别级别HIV抗体检测应在符合级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。第二十三页，讲稿共四十五页哦三、生物安全保三、生物安全保证证措施措施1 1、建立安全制度、建立安全制度艾滋病检测实验室应建立下列

8、安全制度(1)实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP）。(2)意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。(3)信息安全及保密制度：信息安全及保密制度：（例）（例）第二十四页，讲稿共四十五页哦2 2、培、培训训和管理和管理3 3、个人保健和防、个人保健和防护护4 4、安全操作、安全操作5 5、实验实验室的清室的清洁洁和消毒和消毒工作完毕应对工作台面消毒，推荐用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作过程中如有样品、检测试剂外溅，应及时消毒。第二十五页，讲稿共四十五页哦如有大量高浓度的传染性液体溅出，在清洁之前应先用1%的次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦

9、净。离心样品时要使用密闭的罐和密封头，防止离心时液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。第二十六页，讲稿共四十五页哦四、四、污污染物染物处处理理1 1、艾艾滋滋病病实实验验室室产产生生的的所所有有废废弃弃物物，包包括括不不再再需需要要的的样样品品、培培养养物物和和其其它它物物品品，均均应应视视为为感感染染性性废废弃弃物物，应应置置于于专专用用的的密密封封防防漏漏容容器器中中，安安全全运运至至消消毒毒室室，经经高高压压消消毒毒后后再再进进行行处处理理或或废废弃。弃。第二十七页，讲稿共四十五页哦2 2、艾滋病、艾滋病检测实验检测实验室常用的消毒方法室常用的消毒方法（1）物理消毒方法a 高压蒸汽消毒，

10、121，保持1520min;b 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140，保持23h。（2）化学消毒方法 含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯20005000mg/L）、75%乙醇、2%戊二醛第二十八页，讲稿共四十五页哦（3）艾滋病检测实验室物品常用的消毒方法a、废弃物缸：5000mg/L 次氯酸钠。b、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。c、溢出物：5000mg/L次氯酸钠。d、污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。第二十九页，讲稿共四十五页哦艾滋病检测实验室质量管理艾滋病检测实验室质量管理一、范一、范围围艾滋病检测实验室质量管理包括质

11、量保证、质量控制和质量评价第三十页，讲稿共四十五页哦二、二、质质量保量保证证1 1、人、人员员培培训训检测技术人员需经过上岗培训和在岗持续培训。筛查实验室技术人员至少每2年1次。第三十一页，讲稿共四十五页哦2 2、环环境条件境条件艾滋病抗体筛查实验室的设置及其建筑、设施、设备必须符合全全国国艾艾滋滋病病检检测测工工作作管管理理办办法法的要求。HCV，HBV及梅毒等血清学检测在满足实验室管理要求和保证生物安全的条件下，可以与HIV检测共享空间和设备，应避免交叉污染。第三十二页，讲稿共四十五页哦3 3、样样品采集、运送和品采集、运送和处处理理4 4、检测检测方法和方法和试剂试剂的的选择选择5 5、

12、设备维护设备维护与校准与校准6 6、实验实验耗材耗材7 7、文件和文件管理、文件和文件管理第三十三页，讲稿共四十五页哦8 8、标标准操作程序准操作程序（SOP）筛查实验室SOP文件包括：（1）样品的接收、登记、处理、保存和运输；（2）检测方法和步骤；（3）试剂使用和保存；（4）仪器的使用维护和校准；（5）质量控制要求及程序；（6）结果解释与报告；（7）保密程序；（8）实验室数据、相关文件记录与保存；（9）不确定样品追踪和处理；（10）实验室安全防护及实验室的清理和消毒；第三十四页，讲稿共四十五页哦（11）标题和编号；（12）编写和修订日期；（13）编写和修订人员姓名；（14）方法、目的和应用范

13、围；（15）检测设备；（16）试剂及有效期；（17）安全防护相关步骤；（18）结果的解释和报告；（19）附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。第三十五页，讲稿共四十五页哦9 9、实验实验原始原始记录记录表表（附表附表4）1010、结结果果报报告告1111、样样品登品登记记和保存和保存第三十六页，讲稿共四十五页哦三、三、质质量控制量控制四、四、质质量量评评价价包括内部质量评价和外部质量评价。1 1、内部、内部质质量量评评价价2 2、外部、外部质质量量评评价价筛查实验室应参加省级职能工作考核和PT。第三十七页，讲稿共四十五页哦3 3、职职能工作考核能工作考核现场评价内容，筛查实

14、验室现场评价应包括：实验室人员组成及其职责分工；实验室分区、布局、恒温设施；仪器设备及其使用、校准记录；质量保证文件、实验室SOP文件及原始记录；实验室的安全防护措施，安全用品及安全规程；第三十八页，讲稿共四十五页哦消毒与污物处理方法及设施；HIV检测资料数据库的建设、存档、备份、安全和保密；样品保存和安全；开展的HIV检测项目和检测试剂等。第三十九页，讲稿共四十五页哦梅毒、乙肝检测要点梅毒、乙肝检测要点一一、梅梅毒毒螺螺旋旋体体感感染染人人体体后后出出现现两两种种抗抗体体，特特异异体抗体和非特异性抗体。体抗体和非特异性抗体。特特异异性性抗抗体体(TPHA)：为lgM，这种抗体一旦产生，终身是

15、阳性。灵敏度高、特异性强非特异性抗体（反非特异性抗体（反应应素素 RPR）：为lgA与lgM的混合物，随病情发展而变化。可与正常生物组织中的类脂抗原发生非特异性结合。第四十页，讲稿共四十五页哦二二、梅梅毒毒特特异异性性抗抗体体检检测测：用于证实试验，即使患者已经经过充分的治疗，IgG抗体仍保持阳性 所以不能用以观察疗效、复发及再感染。方法有方法有：TP-ELISA酶联免疫法、TPPA。第四十一页，讲稿共四十五页哦梅梅毒毒非非特特异异性性抗抗体体检检测测：用于梅毒诊断疗效观察和对复发或再感染的监测。方方法法有有：性病实验室试验（又称VDRL试验）、快速血浆反应素(RPR)试验、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、世界卫生组织推荐用RPR等方法进行过筛试验，出现阳性者再用TPHA等方法进行确认试验。第四十二页，讲稿共四十五页哦三三、梅梅毒毒滴滴度度测测定定使使用用仪仪器器：水平旋转仪 转速：100转/min 室温四、乙肝定性：四、乙肝定性：检测方法同艾滋病筛查。五、乙肝定量：五、乙肝定量：乙肝病毒DNA检测特点：灵敏度高、易出现假阳性、数据波动大 要点：合理分区、防止污染。第四十三页，讲稿共四十五页哦谢谢大家！第四十四页，讲稿共四十五页哦感感谢谢大大家家观观看看第四十五页，讲稿共四十五页哦