基因表达载体的构建精选PPT.ppt

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1、关于基因表达载体的构建第1页，讲稿共14张，创作于星期日先用同一种限制酶先用同一种限制酶分别切割目的基因分别切割目的基因和质粒，再用和质粒，再用DNA连接酶将二者连连接酶将二者连接，形成重组接，形成重组DNA分子。分子。第2页，讲稿共14张，创作于星期日三、将目的基因导入受体细胞（转化）三、将目的基因导入受体细胞（转化）n n常用的受体细胞：常用的受体细胞：n n有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。第3页，讲稿共14张，创作于星期日1、受体细胞是植物细胞、受体细胞是植物细胞n农杆菌转化法：农杆菌转化法：主要侵染双子叶植物（伤主要侵染双子叶植物

2、（伤口分泌酚类化合物吸引农杆菌）口分泌酚类化合物吸引农杆菌）n基因枪法基因枪法n花粉管通道法花粉管通道法第4页，讲稿共14张，创作于星期日1）土壤农杆菌法）土壤农杆菌法第5页，讲稿共14张，创作于星期日2）基因枪法）基因枪法第6页，讲稿共14张，创作于星期日3）花粉管通道法）花粉管通道法第7页，讲稿共14张，创作于星期日2、受体细胞是动物细胞、受体细胞是动物细胞n显微注射法显微注射法n注入动物受精卵注入动物受精卵第8页，讲稿共14张，创作于星期日1982年，世界上第一例体型比普通小年，世界上第一例体型比普通小鼠大鼠大1.8倍的转基因超级小鼠诞生倍的转基因超级小鼠诞生第9页，讲稿共14张，创作于

3、星期日3、受体细胞是微生物、受体细胞是微生物n将目的基因导入原核生物的好处是什么？将目的基因导入原核生物的好处是什么？n繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少n要想使重组要想使重组DNA顺利进入细菌细胞内，最顺利进入细菌细胞内，最大的难题是什么？大的难题是什么？n一般用一般用CaCl2处理，改变细胞膜的通透性，处理，改变细胞膜的通透性，使得重组使得重组DNA能够进入细胞。能够进入细胞。第10页，讲稿共14张，创作于星期日四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检测转基因生物的检测转基因生物的DNA是否插入目的基因是否插入目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质检测性状检测性状分子水分子水平平个体水平个体水平第11页，讲稿共14张，创作于星期日1、检测目的基因、检测目的基因nDNA分子杂交技术分子杂交技术n提取转基因生物的提取转基因生物的DNAn制作分子探针（目的基因的一段单链序列）制作分子探针（目的基因的一段单链序列）n进行分子杂交进行分子杂交第12页，讲稿共14张，创作于星期日2、检测、检测mRNAn分子杂交技术分子杂交技术第13页，讲稿共14张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第14页，讲稿共14张，创作于星期日