放散试验学习.pptx

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1、第1页/共21页第2页/共21页放散试验方法 放散试验的方法很多，ABO 血型IgM 抗体以热放散法为常用。Rh 血型IgG 抗体以乙醚放散法为常用。第3页/共21页加热放散法 试剂操作注意事项第4页/共21页第5页/共21页加热放散法试剂抗 A和抗B分型血清。2%A 型和B型试剂红细胞盐水悬液。受检红细胞。第6页/共21页加热放散法操作1.将受检红细胞以大量生理盐水洗涤3 次，末次洗涤后，将盐水除尽，取压实红细胞l份，分别与2 份抗A 和抗B 分型血清混合。置4lh，每隔10min 将试管振摇1次，使充分混合。第7页/共21页加热放散法操作2.离心去除上清液，以 4冷盐水洗涤红细胞3-4 次

2、，倾去洗涤液，留取压实红细胞，加1/2容积的生理盐水(如放散液不立刻进行检查，应以AB型血清代理生理盐水)，置56 水浴中10 min,每隔15 s 振摇l 次，使吸附在红细胞上的抗体充分放散。第8页/共21页加热放散法操作3.立刻以3000r/min离心，离心时套管内放温水，使温度尽量保持在56，分离得的上清液即为放散液。4.将放散液用2%A 型和B 型试剂红细胞鉴定抗体，即可检出受检红细胞的血型。第9页/共21页加热放散法操作 如实验的目的鉴定A亚型，则可用已知A亚型红细胞同时作放散实验，按放散液抗体的强度A1A2A3AxAm，判定受检红细胞亚型的型别，B亚型的放散液鉴定方法相似。第10页

3、/共21页加热放散法注意事项1.为了使放散液内含有最多的抗体，吸收血清量应加大。2.放散时，应严格注意温度和时间。温度过高红细胞易溶解;温度过低，抗体从红细胞上放散不完全。3.直接抗人球蛋白试验阳性的红细胞，如新生儿溶血病患儿或自身免疫性溶血性贫血患者，经洗涤后即可作抗体放散试验。4.放散液中抗体易变性，故应立刻进行鉴定。若需保存，应将抗体放散于选定的AB型血清或牛白蛋白液中。第11页/共21页第12页/共21页乙醚放散法 试剂操作特点第13页/共21页乙醚放散法试剂受检者血清相应抗原的红细胞(抗凝血)乙醚（分析试剂）AB血清第14页/共21页乙醚放散法操作取具有相应抗抗原的抗凝血，离心后吸去

4、血浆，加大量生理盐水，洗涤1次，离心，取压实红细胞备用。取受检者血清5ml，加压实红细胞1 ml，混匀后放在适当温度中1小时，在此期间要摇匀1-2次。离心。离心后取出，将上清液吸出另放1管，鉴定上清液中的抗体。第15页/共21页乙醚放散法操作将红细胞用盐水洗涤3次，离心压实红细胞。取1体积压实红细胞，加1体积AB型血清或生理盐水和2体积乙醚，颠倒摇匀10min，然后以3000r/min离心5 min.离心后即分成3层，最上层是乙醚，中层是细胞基质，下层是具有抗体的放散液，其色深红。第16页/共21页第17页/共21页乙醚放散法操作用清洁的吸管吸出放散液，若有混浊，可再离心1次。将放散液放置37水浴中30 min，除尽乙醚，然后鉴定抗体。第18页/共21页乙醚放散法特点本试验适用于鉴定 Rh 抗体。最大优点用于检查获得性溶血性贫血，此种患者的红细胞为直接抗人球蛋白试验阳性，说明在体内已有自身抗体吸附在红细胞上。这种抗体常常有 Rh 特异性。第19页/共21页第20页/共21页感谢您的观看！第21页/共21页