高考一轮植物组织培养技术 (2).ppt

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1、高考一轮植物组织培养技术现在学习的是第1页，共61页植物的组织培养现在学习的是第2页，共61页 在在无菌培养无菌培养的条件下，将的条件下，将离体的离体的植物器官（根，茎，植物器官（根，茎，叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞叶，花，果实等）、组织（形成层，花药组织等）、细胞（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养（体细胞，生殖细胞等）以及原生质体等培养在人工配制在人工配制的培养基的培养基上，并给予适当的培养条件，使其上，并给予适当的培养条件，使其长成完整植株长成完整植株的过程。的过程。考点一考点一 植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程一、基本概念一、基本概念1、植物组织培

2、养、植物组织培养:植物组织培养的原理植物组织培养的原理:植物细胞的全能性植物细胞的全能性现在学习的是第3页，共61页 2、外植体：、外植体：从活体植株上切下的，从活体植株上切下的，用于组织培养的细胞、用于组织培养的细胞、组织和器官。一般包括组织和器官。一般包括茎尖、根、茎、叶、花、茎尖、根、茎、叶、花、种子等器官以及他们形种子等器官以及他们形成的体细胞胚等材料。成的体细胞胚等材料。现在学习的是第4页，共61页 3、脱分化：、脱分化：已经高度分化已经高度分化的植物器官、的植物器官、组织或细胞，在切割损伤和组织或细胞，在切割损伤和培养物内外因素的共同作用培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失原来的分

3、化结下，逐渐丧失原来的分化结构和功能，构和功能，最后形成无组织最后形成无组织的细胞团或愈伤组织的细胞团或愈伤组织的过程。的过程。现在学习的是第5页，共61页4、愈伤组织：、愈伤组织：在人工培养基上由外植体在人工培养基上由外植体脱脱分化分化形成的形成的一团无序生长的薄壁一团无序生长的薄壁细胞细胞。（具有细胞分裂能力）。（具有细胞分裂能力）5、胚状体：、胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的形成的与合子胚相类似的结构与合子胚相类似的结构。现在学习的是第6页，共

4、61页6、再分化：、再分化：已经脱分化的细胞已经脱分化的细胞在一定条件下，又可在一定条件下，又可经过愈伤组织或胚状体，再经过愈伤组织或胚状体，再分化出根和分化出根和芽，形成完整植株芽，形成完整植株，这一过程叫作再，这一过程叫作再分化。分化。7、不定芽：、不定芽：凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽凡从叶、根、或茎节间等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽的部位生出的芽，则统称为不定芽 现在学习的是第7页，共61页现在学习的是第8页，共61页二、影响植物组织培养的因素二、影响植物组织培养的因素1 1、植物材料的选择、植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸

5、杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果验结果菊花的组织培养一般选择菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部未开花植株的茎上部新萌生的侧枝新萌生的侧枝。现在学习的是第9页，共61页2 2、离体的植物组织和细胞对营养、环境等条件的、离体的植物组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基要求相对特殊，需配置不同的培养基MSMS培养基主要成分包括：培养基主要成分包括：A A、大量元素大量元素:N:N、P P、S S、K K、CaCa、MgMg等等B B、微量元素微量元素:B:B、Mn

6、Mn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCo等等C C、有机物有机物、植物激素植物激素现在学习的是第10页，共61页MS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例现在学习的是第11页，共61页讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2 2中微生物培养基的配方相比，中微生物培养基的配方相比，MSMS培养基的配方有培养基的配方有哪些明显的不同？哪些明显的不同？答：答：微量元素和大量元素提供微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无植物细胞生活所必需的无机盐；机盐；蔗糖蔗糖提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；提供碳源，同时能够维持培养基

7、的渗透压；甘氨酸、维生素甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。求。微生物培养基微生物培养基以以有机营养有机营养为主。与微生物的培养不同，为主。与微生物的培养不同，MSMS培养基培养基则需提供则需提供大量无机营养大量无机营养，无机盐混合物包括植，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。物生长必须的大量元素和微量元素两大类。现在学习的是第12页，共61页常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：生

8、长素类：2 2，4 4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2 2，4 4D D）、吲哚）、吲哚乙酸（乙酸（IAAIAA）、萘乙酸（）、萘乙酸（NAANAA）、吲哚丁酸）、吲哚丁酸（IBAIBA）细胞分裂素类：细胞分裂素类：激动素（激动素（KTKT）、）、6 6苄基嘌呤（苄基嘌呤（6 6BABA）、玉米素（）、玉米素（ZTZT）赤霉素类：赤霉素类：赤霉酸（赤霉酸（GA3GA3）3 3、植物激素的影响、植物激素的影响现在学习的是第13页，共61页生长素和细胞分裂素作用生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素

9、存在的情分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使用先使用生长素，后使用细胞分裂素细胞分裂素有利于细胞分裂，但不有利于细胞分裂，但不利分化利分化先使用细胞分裂素后使先使用细胞分裂素后使用生长素用生长素细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化同时使用同时使用分化频率高分化频率高记忆口诀：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同时提高分化率。记忆口诀：生前分裂不分化，生后分裂又分化，同时提高分化率。现在学习的是第14页，共61页生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素：有利于有利于根根的分化的分化

10、生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素：生长素生长素生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素再分化再分化植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养不需要光不需要光不需要光不需要光需要光需要光需要光需要光现在学习的是第16页，共61页考点一植物考点一植物组织组织培养的基本培养的基本过过程程【回扣教材】【回扣教材】1细细胞胞分分化化：在在植植物物的的个个体体发发育育过过程程中中，细细胞胞在在_ _ 上上都都会会出出现现 的的差差异异，形形成成这这些些差差异异的的过过程程叫叫 。2脱分化：由脱分化：由 的植物的植物组织组织或或细细胞胞产产生生_ 的的过过程，称

11、程，称为为植物植物细细胞的胞的 。形态、结构和功能形态、结构和功能稳定性稳定性细胞分化细胞分化高度分化高度分化愈伤组织愈伤组织脱分化脱分化(去分化去分化)现在学习的是第17页，共61页 3愈愈伤组织伤组织：细细胞排列疏松而无胞排列疏松而无规则规则，是一种，是一种_ 的呈的呈 _的薄壁的薄壁细细胞。胞。4再分化：脱分化再分化：脱分化产产生的生的_ 继续进继续进行培养，行培养，又可以重新分化成又可以重新分化成 等器官，叫再分化。等器官，叫再分化。5影响植物组织培养的因素影响植物组织培养的因素 (1)的选择直接关系到实验的成败。对于的选择直接关系到实验的成败。对于 植物材料，材料的植物材料，材料的

12、、保存时间的、保存时间的_ 等也会影等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择未开花植株响实验结果。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的的 的侧枝。的侧枝。高度液泡化高度液泡化无定形状态无定形状态愈伤组织愈伤组织根或芽根或芽植物材料植物材料同一种同一种年龄年龄长短长短茎上部新萌发茎上部新萌发现在学习的是第18页，共61页(2)适适宜宜的的培培养养基基(_)，主主要要成成分分包包括括：_ ；，如如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；，如如甘甘氨氨酸酸、烟烟酸酸、肌肌醇醇、维维生生素素以以及及蔗蔗糖糖；常常常常添添加加植植物物激激素素，_ _ 和和 是是 细细胞胞分分裂裂、脱分化和再分化

13、的脱分化和再分化的 激素。激素。(3)pH、温温度度、光光照照等等条条件件也也很很重重要要。进进行行菊菊花花的的组组织织培培养养，一一般般将将pH控控制制在在 左左右右，温温度度控控制制在在_ ，并且每日用日光灯照射，并且每日用日光灯照射 。N、P、K、Ca、Mg、S微量元素微量元素有机物有机物生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素启动启动关键性关键性5.8182212 hMS培养基培养基现在学习的是第19页，共61页【典例精析】【典例精析】【例【例1】下面关于植物组织培养的叙述，正确的是】下面关于植物组织培养的叙述，正确的是()A叶肉细胞脱分化后可形成无定形状态的薄壁细胞叶肉细胞脱分化后可形成无定

14、形状态的薄壁细胞B叶肉细胞经再分化过程可形成愈伤组织叶肉细胞经再分化过程可形成愈伤组织C通过植物组织培养，可培育出性状更优良的品种通过植物组织培养，可培育出性状更优良的品种D植物体的任何一个体细胞经离体培养都表现出全能性植物体的任何一个体细胞经离体培养都表现出全能性【解解析析】B错错，愈愈伤伤组组织织是是经经脱脱分分化化产产生生的的。C错错，植植物物组组织织培培养养属属无无性性繁繁殖殖，产产生生的的后后代代性性状状一一般般与与亲亲本本性性状状相相同同。D错错，植植物物体体上的病老细胞一般不再具有全能性。上的病老细胞一般不再具有全能性。A现在学习的是第20页，共61页一、制备一、制备MSMS固体

15、培养基固体培养基MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般使用多种营养成分，实验室一般使用4 4。C C保存配制好的培养基母液来制备保存配制好的培养基母液来制备.1 1、配置各种母液、配置各种母液考点二考点二 菊花组织培养的实验操作菊花组织培养的实验操作现在学习的是第21页，共61页无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩1010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩100100倍，常温保存倍，常温保存.激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按按1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成母液的质量浓度单独配制成母液.用母液配制培养基时

16、，需要根据各种母液的用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量浓缩倍数，计算用量.现在学习的是第22页，共61页2 2、配置培养基、配置培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml.100ml.配制培养液配制培养液 调调PHPH培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素必添加植物激素.3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌菌.现在学习的是第23页，共61页1 1、选材选材：菊花茎段，取生长旺盛的

17、嫩枝：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝.二、外植体消毒二、外植体消毒2 2、消毒消毒流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min20min左右左右.现在学习的是第24页，共61页 酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为数为7070的酒精中摇动的酒精中摇动2 23 3次次，持续，持续6 67s7s，立即将，立即将外植体取出，在无菌水中清洗外植体取出，在无菌水中清洗.消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面

18、的水分，放入质量取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为分数为0.10.1的的氯化汞氯化汞溶液中溶液中1 12min2min，取出后在无菌，取出后在无菌水中至少清洗水中至少清洗3 3次，漂净次，漂净消毒液消毒液.现在学习的是第25页，共61页三、接种三、接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用是至关重要的。用7070的酒精喷雾的酒精喷雾使空气消毒，使空气消毒，酒酒精或新洁尔灭精或新洁尔灭擦擦洗工作台并用洗工作台并用紫外线紫外线照射照射2020分钟分钟1 1、接种室消毒、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作

19、要求操作要在操作要在酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都完成，每次使用器械后，都需要需要用火焰用火焰灼烧灭菌灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种现在学习的是第26页，共61页现在学习的是第27页，共61页4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为为7070的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，火焰上烧一遍，冷却后再接种冷却后再接种。外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数

20、量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 34 4块，菊的块，菊的茎或叶茎或叶6 68 8块，也不要太少，以充分利用培养基中块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件的营养成分和光照条件.插入时应注意方向，插入时应注意方向，不要倒插不要倒插。茎段、茎尖基部茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分插入培养基利于吸收水分和养分.现在学习的是第28页，共61页思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？吗？答：每种材料或配方答：每种材料或配方至少要做一组以上至少要做一组以上的重复。设的重复。设置对照实验可以取用一个

21、经过灭菌的装有培养基的锥置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。养基制作合格，没有被杂菌污染。现在学习的是第29页，共61页四、培养四、培养1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养从接种外植体到出现愈伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周周时间。时间。2 2周之内周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见

22、光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2 2周周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养代培养.现在学习的是第30页，共61页继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为一代为20d20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质

23、，造成自身中毒。如果愈伤组外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为织长到直径为1 11.5cm1.5cm时，就可以进行时，就可以进行试管苗试管苗培养，培养，否则还需进行第二代继代培养否则还需进行第二代继代培养.2 2、愈伤组织的继代培养、愈伤组织的继代培养在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色.现在学习的是第31页，共61页3 3、试管苗的培养、试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基

24、，进行试管苗的行试管苗的见光培养见光培养.现在学习的是第32页，共61页五、移栽五、移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日口膜，让试管苗在培养间生长几日.1 1、打开封口膜、打开封口膜2 2、清洗转移、清洗转移用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间生活一段时间.3 3、移栽、移栽珍珠岩：珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培透性好，适合栽培.幼苗长壮后，移栽到土

25、壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中.现在学习的是第33页，共61页六、栽培六、栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花时浇水、施肥，直至开花.现在学习的是第34页，共61页结果分析与评价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格现在学习的是第35页，共61页1、培养基的灭菌（、培养基的灭菌（高压

26、蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（、外植体的消毒（酒精、氯化汞酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（、接种的无菌操作（酒精、酒精灯酒精、酒精灯灼烧灼烧）4、无菌箱无菌箱中的培养；中的培养；5、移栽到、移栽到消过毒消过毒的环境中生存一段时间。的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现在整个操作过程中，是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？现在学习的是第36页，共61页课题延伸课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养易进行组织培养.2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季.现在学习的是第

27、37页，共61页考点二菊花的考点二菊花的组织组织培养的培养的实验实验操作操作【回扣教材】【回扣教材】菊花植物菊花植物组织组织培养的培养的实验实验操作，操作，归纳归纳如下：如下：1制制备备MS固固体体培培养养基基：具具体体操操作作是是配配制制各各种种_、配配制培养基、制培养基、_。2外植体外植体_。3接接种种：要要先先消消毒毒_(70%酒酒精精)，所所有有的的接接种种操操作作都都必必须须在在_旁旁进进行。行。母液母液灭灭菌菌消毒消毒工作台工作台酒精灯酒精灯现在学习的是第38页，共61页4培培养养：_中中培培养养，培培养养期期间间_，培培养养温温度控制在度控制在_，每日用日光灯光照，每日用日光灯光

28、照12 h。5_：打打开开培培养养瓶瓶封封口口膜膜培培养养_清清洗洗根根部部培培养养基基移移植植到到消消毒毒蛭蛭石石或或珍珍珠珠岩岩等等环环境境移移栽栽到到_中。中。6栽栽培培：观观察察并并记记录录幼幼苗苗_，适适时时浇浇水水、施施肥肥，直直至至_。无菌箱无菌箱定期消毒定期消毒1822移栽移栽流水流水土壤土壤生生长长情况情况开花开花现在学习的是第39页，共61页【典例精析】【典例精析】【例例2】在在菊菊花花的的组组织织培培养养操操作作完完成成了了3 4天天后后，观观察察同同一一温温室室中中的的外外植植体体，发发现现有有的的瓶瓶内内外外植植体体正正常常生生长长，有有的的瓶瓶内内外外植植体体死死亡

29、亡，你你认为认为外植体死亡的原因不可能是外植体死亡的原因不可能是()A接种接种时时所用的培养基所用的培养基灭灭菌不菌不彻彻底底B接种工具灼接种工具灼烧烧后未待冷却就接种外植体后未待冷却就接种外植体C愈愈伤组织伤组织形成初期没有形成初期没有给给予充足的光照予充足的光照D培培养养过过程程中中保保持持温温度度、pH的的适适宜宜，但但没没有有及及时时调调整整各各种种营营养物养物质质、激素的比例、激素的比例【解解析析】愈愈伤伤组组织织形形成成初初期期不不需需要要给给予予光光照照，这这不不是是导导致致外外植植体死亡的原因。体死亡的原因。C现在学习的是第40页，共61页单倍体育种的过程？单倍体育种的过程？花

30、药离体培养（花药离体培养（N）单倍体植株（单倍体植株（N）秋水仙素处理，使秋水仙素处理，使染色体翻倍染色体翻倍植株（植株（2N）特点：特点：1 明显缩短育种年限明显缩短育种年限2 后代植株都为纯合子。后代植株都为纯合子。正常植株（正常植株（2N）考点三考点三 月季的花药培养月季的花药培养知识回顾知识回顾现在学习的是第41页，共61页花的结构花的结构花托花托花萼花萼花瓣花瓣雄蕊雄蕊花药花药花丝花丝雌蕊雌蕊柱头柱头花柱花柱子房子房知识回顾知识回顾现在学习的是第42页，共61页花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉囊状结构，内有很多花粉（一）被子植物的花粉发育（一）被子植物的花粉发育1 雄蕊雄蕊

31、一、基础知识一、基础知识2 花粉的概念花粉的概念:由由花粉母细胞花粉母细胞经过经过减数分裂减数分裂形成的形成的单单倍体的生殖细胞倍体的生殖细胞.现在学习的是第43页，共61页小孢子四分体时期小孢子四分体时期单核期单核期双核期双核期被子植物花粉发育过程被子植物花粉发育过程现在学习的是第44页，共61页小小孢孢子子母母细细胞胞花花粉粉母母细细胞胞小孢子小孢子减数减数分裂分裂有丝分裂有丝分裂花粉管细胞核花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞核有分有分丝裂丝裂2 2精子精子1 1个个营养细胞营养细胞生殖细胞生殖细胞4 4个个4 4个个4 4个个4 4个个4 4个个8 8个个（小孢子四分体时期（小孢子四分体时期

32、单核居中期单核居中期单核靠边期单核靠边期花粉粒双花粉粒双核期）核期）被子植物花粉的发育过程4 4个个4 4个个4 4个个现在学习的是第45页，共61页1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（的是（）A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果结果C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段期、单核期、双核期等阶段D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞

33、中央侧，再移到细胞中央BD对点训练对点训练现在学习的是第46页，共61页（二）产生花粉植株的两种途径（二）产生花粉植株的两种途径移栽移栽花药中花药中的花粉的花粉胚状体胚状体脱分化脱分化 愈伤组织愈伤组织 花药中花药中的花粉的花粉脱分化脱分化 分化分化 丛芽丛芽 再分化再分化 丛芽丛芽 诱导诱导生根生根原因：培养基中的激素种类及浓度配比原因：培养基中的激素种类及浓度配比现在学习的是第47页，共61页1、材料的选择、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同不同植物的诱导成功率不同.同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响直接的影响.（一般选月季的初花期）（

34、一般选月季的初花期）合适的花粉发育期合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）2、培养基的组成、培养基的组成（MSMS培养基培养基+不同比例的植物生长不同比例的植物生长调节激素）调节激素）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等(三三)、影响花药培养的主要因素、影响花药培养的主要因素注意：选择最合适的花粉发育时期注意：选择最合适的花粉发育时期:单单核期核期 不选择单核期之前花药原因：不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎花药质地幼嫩，容易破碎；不选择单核期之后花药原因：不选择单核期之后花药原因：花瓣花瓣开始

35、松动，给材料消毒带来困难困难开始松动，给材料消毒带来困难困难；挑选单核期花药方法：应当选择完挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。现在学习的是第48页，共61页实验操作实验操作一、材料的选取一、材料的选取二、材料的消毒二、材料的消毒三、接种和培养三、接种和培养现在学习的是第49页，共61页（一）材料选取（一）材料选取 2、通过、通过镜检镜检来确定是否处于适宜的发育期来确定是否处于适宜的发育期。方法：方法：醋酸洋红法醋酸洋红法(将染色体染成红色将染色体染成红色)焙花青焙花青-铬矾法铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色花粉细胞核染成蓝黑色)。1、

36、从花药看从花药看：月季的初花期：月季的初花期 从花粉看：从花粉看：单核期单核期 从花蕾看从花蕾看：完全未开放的：完全未开放的 花药（载玻片上）花药（载玻片上）1%的醋酸洋红的醋酸洋红1滴滴用镊柄将花药捣碎，盖用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理花药（在卡诺氏固定液中处理20min）取出，置于载玻片上取出，置于载玻片上焙花青铬矾溶液染色焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）黑色）现在学习的是第50页，共61页（二）材料的消毒（二）材料的消毒5 5

37、、无菌水冲洗、无菌水冲洗3 35 5次次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用、花蕾用体积分数为体积分数为70%的酒精的酒精浸泡浸泡30秒秒2、无菌水清洗、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入、放入质量分数为质量分数为0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分钟分钟 （质量分数为质量分数为1%的的次氯酸钙溶液次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液或饱和漂白粉溶液）现在学习的是第51页，共61页为什么花瓣松动会给材为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？料的消毒带来困难？答：花瓣松动后，微答：花瓣松动后

38、，微生物就可能侵入到花药，生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。给材料的消毒带来困难。为什么花瓣松动会给为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？材料的消毒带来困难？现在学习的是第52页，共61页（三）接种和培养（三）接种和培养 1 1、灭菌后花蕾，要在、灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。即将花药接种到培养基上。3、通常每瓶接种花药、通常每瓶接种花药 ，温度控制在，温度控制在 左右，左右，。幼小植株形成后才。幼小植株形成后才 。2、在剥离花药时，要尽量、在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织从

39、受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。一般经过一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释愈伤组织或释放出胚状体放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。植株。4 、进一步鉴定和筛选：、进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化常常会出现染色体倍性的变化无菌条件无菌条件不损伤花药不损伤花药去除花丝去除花丝7-10个个25不需要光照不需要光照

40、需要光照需要光照主要原因是主要原因是花粉管核和生花粉管核和生殖核融合殖核融合造成造成的的现在学习的是第53页，共61页植物组织培养技术与花药培养技术的比较植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目项目 植物组织培养植物组织培养 花药培养技术花药培养技术相同点相同点1、培养基配制方法、无菌技术及接种操、培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。作等基本相同。2、都经过了脱分化、都经过了脱分化不同点不同点1、离体培养的外植体、离体培养的外植体为为体细胞体细胞。2、有丝分裂的过程，、有丝分裂的过程，染染色体数量不变色体数量不变。1、花粉是、花粉是生殖细胞生殖细胞，得到的得到的单倍体植株单倍体植株，

41、弱小，弱小且高度不育。且高度不育。2、秋水仙素处理，染色、秋水仙素处理，染色体加倍，恢复正常的染体加倍，恢复正常的染色体数，为色体数，为纯种纯种纯种纯种。现在学习的是第54页，共61页课题成果评价课题成果评价一一、选材是否恰当、选材是否恰当二二、无菌技术是否过关、无菌技术是否过关三三、接种是否成功、接种是否成功课外拓展延伸课外拓展延伸人工种子人工种子现在学习的是第55页，共61页人工种子人工种子胚状体胚状体人工种皮人工种皮人工胚乳人工胚乳自然种子自然种子胚胚种皮种皮胚乳胚乳现在学习的是第56页，共61页胚状体包埋在胶囊内形成球状结构：胚状体包埋在胶囊内形成球状结构：胶质化合物薄膜胶质化合物薄膜

42、种皮种皮营养成分和植物激素营养成分和植物激素 人工胚乳人工胚乳胚状体胚状体新植物的幼体新植物的幼体优点：优点：快速繁殖，解决作物繁殖能快速繁殖，解决作物繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问力差、结子困难或发芽率低等问题。固定杂种优势。题。固定杂种优势。现在学习的是第57页，共61页考点三月季的花考点三月季的花药药培养培养【回扣教材】【回扣教材】1花花粉粉是是_的的生生殖殖细细胞胞，是是由由花花粉粉母母细细胞胞经经过过_形成的。形成的。2被被子子植植物物花花粉粉的的发发育育要要经经历历_时时期期、_期期和和_期期等等阶阶段段，其其中中单单核核期期又又分分为为_期期和和_期两个期两个时时期，双核期包

43、括花粉管期，双核期包括花粉管细细胞核和胞核和_细细胞核。胞核。单单倍体倍体减数分裂减数分裂小小孢孢子四分体子四分体单单核核双核双核单核居中单核居中单单核靠核靠边边生殖生殖现在学习的是第58页，共61页3产产生生花花粉粉植植株株(即即单单倍倍体体植植株株)的的两两种种途途径径：一一是是花花粉粉通通过过_阶阶段段发发育育为为植植株株，二二是是通通过过_阶阶段段发发育育为为植植株株。这这两两种种途途径径的的区区别别主主要要取取决决于于培培养养基基中中_的的种种类类及其及其_的配比。的配比。4诱诱导导花花粉粉植植株株能能否否成成功功及及诱诱导导成成功功率率高高低低，受受多多种种因因素素的的影影响响，其

44、其中中_与与_是是主主要要的的影影响响因素。因素。5选选择择花花药药时时，一一般般要要通通过过_来来确确定定其其中中的的花花粉粉是是否否处处于于适适宜宜的的发发育育期期，最最常常用用的的方方法法有有_，但但某某些些植植物物的的花花粉粉细细胞胞核核_，需需采采用用_法法，这这种种方方法法能能将将花花粉粉细细胞核染成胞核染成_色。色。胚状体胚状体愈愈伤组织伤组织激素激素浓浓度度材料的选择材料的选择培养基的组成培养基的组成镜检镜检醋酸洋醋酸洋红红法法不易着色不易着色焙花青焙花青铬矾铬矾蓝蓝黑黑现在学习的是第59页，共61页6 在在 使使 用用 焙焙 花花 青青铬铬钒钒溶溶液液时时，需需要要首首先先将

45、将花花药药用用_处处理理20 min。该该试试剂剂的的配配制制方方法法是是将将_按体按体积积比比为为_的比例混合均匀。的比例混合均匀。7花花药药培培养养中中，特特别别是是通通过过_形形成成的的花花粉粉植植株株，常常会会出出现现_的的变变化化，因因此此需需对对培培养养出出来来的的植植株株作作_。卡诺氏固定液卡诺氏固定液无水酒精和冰醋酸无水酒精和冰醋酸3 1愈愈伤组织伤组织染色体倍性染色体倍性进一步鉴定和筛选进一步鉴定和筛选现在学习的是第60页，共61页【典例精析】【典例精析】【例例3】月月季季的的花花药药培培养养过过程程的的难难点点之之一一是是材材料料的的选选择择，下下列列有有关关材材料选择的叙述中正确的是料选择的叙述中正确的是()A从花药来看，应当选择盛花期的花药从花药来看，应当选择盛花期的花药B从花粉来看，应当选择小孢子四分体期的花粉从花粉来看，应当选择小孢子四分体期的花粉C从花蕾来看，应当选择略微开放的花蕾从花蕾来看，应当选择略微开放的花蕾D从从检检测测花花粉粉的的实实验验方方法法看看，应应该该用用显显微微镜镜观观察察已已染染色色的的花花粉样品临时装片粉样品临时装片【解解析析】A错错，应应选选择择初初花花期期的的花花药药。B错错，应应选选择择单单核核期期的的花花粉粉。C错，应选择完全未开放的花蕾。错，应选择完全未开放的花蕾。D现在学习的是第61页，共61页