Waters AllianceHPLC 操作及维护教案.pptx

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1、会计学1Waters Alliance HPLC 操作及维护操作及维护主要内容主要内容基本构造仪器日常操作仪器常见故障及维护保养第1页/共35页基本构造基本构造n n溶剂输送系统溶剂输送系统溶剂输送系统溶剂输送系统(串联泵串联泵串联泵串联泵)n n进样系统进样系统进样系统进样系统n n柱温箱柱温箱柱温箱柱温箱n n检测器检测器检测器检测器基本构造第2页/共35页基本构造基本构造溶剂瓶控制面板样品盘串联泵进样器在线脱气机Waters e2695示意图第3页/共35页溶剂输送系统溶剂输送系统溶剂输送系统溶剂输送系统基本构造第4页/共35页基本构造基本构造2695溶剂输送系统（串联泵）示意图第5页/

2、共35页溶剂管理系统中的流路溶剂管理系统中的流路 Prime/Vent ValveInletCheckvalveInletCheckvalveABCDFront基本构造第6页/共35页样品管理系统样品管理系统样品管理系统样品管理系统基本构造第7页/共35页n n样品管理系统可存放和定位样品样品管理系统可存放和定位样品样品管理系统可存放和定位样品样品管理系统可存放和定位样品瓶并将样品注入溶剂流。样品瓶并将样品注入溶剂流。样品瓶并将样品注入溶剂流。样品瓶并将样品注入溶剂流。样品管理系统有管理系统有管理系统有管理系统有 5 5 5 5 个样品转盘。个样品转盘。个样品转盘。个样品转盘。n n每个样品转

3、盘中最多可容纳每个样品转盘中最多可容纳每个样品转盘中最多可容纳每个样品转盘中最多可容纳 24 24 24 24 个样品瓶，共计可容纳个样品瓶，共计可容纳个样品瓶，共计可容纳个样品瓶，共计可容纳 120 120 120 120 个个个个样品瓶。样品瓶。样品瓶。样品瓶。基本构造第8页/共35页样品管理系统中的流路基本构造第9页/共35页基本构造基本构造柱 温 箱第10页/共35页基本构造基本构造检测器第11页/共35页仪器日常操作仪器日常操作n n开机开机开机开机n n操作前准备操作前准备操作前准备操作前准备n n灌注柱塞密封泵灌注柱塞密封泵灌注柱塞密封泵灌注柱塞密封泵(Prime Seal Wa

4、sh)(Prime Seal Wash)n n灌注针头清洗泵灌注针头清洗泵灌注针头清洗泵灌注针头清洗泵 (Prime Needle Wash)(Prime Needle Wash)n n打开真空脱气机打开真空脱气机打开真空脱气机打开真空脱气机n n干灌注干灌注干灌注干灌注(Dry Prime)(Dry Prime)n n湿灌注湿灌注湿灌注湿灌注(Wet Prime)(Wet Prime)n n冲洗进样器冲洗进样器冲洗进样器冲洗进样器 (Purge Injector)(Purge Injector)日常操作第12页/共35页 依次打开依次打开依次打开依次打开LAC/ELAC/ELAC/ELAC/

5、E采集服务器、采集服务器、采集服务器、采集服务器、2695269526952695分离单元、所需检测器以分离单元、所需检测器以分离单元、所需检测器以分离单元、所需检测器以 及计算机的电源。仪器进行及计算机的电源。仪器进行及计算机的电源。仪器进行及计算机的电源。仪器进行5 5 5 5分钟自检后，出现以下画面分钟自检后，出现以下画面分钟自检后，出现以下画面分钟自检后，出现以下画面。仪器日常操作仪器日常操作开机第13页/共35页仪器日常操作仪器日常操作第14页/共35页n n用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经用色谱

6、纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经0.450.450.450.45m m m m滤滤滤滤膜膜膜膜过滤，脱气应充分。过滤，脱气应充分。过滤，脱气应充分。过滤，脱气应充分。n n必须确保必须确保必须确保必须确保6 6 6 6根管子全部插到溶剂瓶的底部。根管子全部插到溶剂瓶的底部。根管子全部插到溶剂瓶的底部。根管子全部插到溶剂瓶的底部。n n准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（Seal WashSeal WashSeal WashSeal Wash）液体。）液体。）液体。）液体。n n准备合适的灌注针头清洗泵（准备合

7、适的灌注针头清洗泵（准备合适的灌注针头清洗泵（准备合适的灌注针头清洗泵（Needle WashNeedle WashNeedle WashNeedle Wash）液体。）液体。）液体。）液体。操作前准备仪器日常操作第15页/共35页灌注柱塞密封清洗泵(Prime Seal Wash)仪器日常操作当首次使用或整个管路都已干燥时1.回到Menu 画面，选择Diag。2.将注射器适配器连接到注射器。3.移除密封清洗入口管路上的滤头。4.将注射器装满清洗液，然后将注射器适配器连到密封清洗管路末端。5.按Prime Seal Wash，再按Start。6.推进注射器使清洗液进入系统。7.当有溶剂从密封清

8、洗废液管中流出时，按Halt。8.重新安装滤头。9.按Close返回。注意事项：当更换溶液时，只需执行步骤1，5，7和9。第16页/共35页灌注针头清洗泵(Prime Needle Wash)仪器日常操作注意事项：1 溶剂的选择：根据样品及流动相的化学特性来作选择。2 若为浓度较高的样品需要较强的溶剂来清洗。3 若样品对pH较敏感，应考虑洗针液的pH。第17页/共35页1.按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面。2.利用方向键 将光标移至“Degasser”位置，按Enter。3.利用上下键选择模式为ON，如下图所示。打开真空脱气机（Degasser）注意事项：在开启真空脱

9、气机时，要确认所有溶剂管路都充满溶 剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime 操作。仪器日常操作第18页/共35页干灌注（干灌注（干灌注（干灌注（Dry primeDry prime）：）：）：）：系统第一次运行或系系统第一次运行或系统中无溶液时进行。统中无溶液时进行。1 将溶剂管路插入到相应的容器。2 轻轻摇动滤头，以除去可能存在的气泡。3 将注射器连到灌注/排放阀。如图所示。4 逆时针旋转阀1/2圈，将其打开。5 按Status屏幕中的Direct Function键，选择Dry Prime，然后按Enter。6 在上述对话框中，选择要灌注的溶剂管路对应的屏幕键。如图所示。7 抽回注

10、射器活塞以将溶剂抽出管路。仪器日常操作第19页/共35页湿灌注（Wet prime）：更换流动相；排除气泡；仪器闲置了一段时间。仪器日常操作注意事项：为避免损坏柱塞密封，仅在流路中存在溶剂时执行湿灌注。若更换流动相与之前流动相不互溶，采用中间溶液过渡。以最低粘度的溶液开始湿灌注，以帮助清除管路中的空气。第20页/共35页执行湿灌注执行湿灌注执行湿灌注执行湿灌注1 1 在在在在“status”status”屏幕的屏幕的屏幕的屏幕的“Composition”Composition”字段中，为字段中，为字段中，为字段中，为要用于湿灌注的溶剂输入要用于湿灌注的溶剂输入要用于湿灌注的溶剂输入要用于湿灌注

11、的溶剂输入“100%”100%”。2 2 按按按按“Direct Function”Direct Function”键，选择键，选择键，选择键，选择“Wet Prime”Wet Prime”，出现湿灌注对，出现湿灌注对，出现湿灌注对，出现湿灌注对话框。话框。话框。话框。3 3 按按按按“OK”OK”，执行湿灌注。，执行湿灌注。，执行湿灌注。，执行湿灌注。4 4 可根据实际情况重复灌注。可根据实际情况重复灌注。可根据实际情况重复灌注。可根据实际情况重复灌注。仪器日常操作第21页/共35页冲洗自动进样器（冲洗自动进样器（冲洗自动进样器（冲洗自动进样器（Purge InjectorPurge Inj

12、ector）n n更换为当前流动相更换为当前流动相更换为当前流动相更换为当前流动相 n n清除流路或注射器中的气泡清除流路或注射器中的气泡清除流路或注射器中的气泡清除流路或注射器中的气泡仪器日常操作第22页/共35页仪器日常操作日常操作步骤选择合适溶剂 湿灌注清洗系统 Purge Injector实验操作 洗针 平衡系统 Purge Injector洗针 第23页/共35页常见故障及维护保养常见故障及维护保养常见故障及维护保养常见故障及维护保养n n流动相流动相流动相流动相n n输液泵输液泵输液泵输液泵n n进样系统进样系统进样系统进样系统n n色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱n n检测器检测器检测器

13、检测器仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第24页/共35页仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养流动相故障故障可能原因可能原因排除排除基线噪声大；出毛刺基线噪声大；出毛刺脱气不充分脱气不充分充分脱气充分脱气泵压力不稳；流动相泵压力不稳；流动相供给不畅供给不畅流动相接近用完或滤流动相接近用完或滤头堵塞头堵塞用用HPLC试剂试剂/溶剂，溶剂，并使用并使用0.45m滤膜过滤膜过滤滤产生有规则噪声；基产生有规则噪声；基线上升；梯度洗脱出线上升；梯度洗脱出鬼峰鬼峰流动相被污染流动相被污染使用干净容器，确认使用干净容器，确认试剂未被污染试剂未被污染第25页/共35页仪器维护保养仪器维护保养

14、输液泵输液泵输液泵输液泵故障故障可能原因可能原因排除排除打不出溶剂（缓冲盐流动相）打不出溶剂（缓冲盐流动相）球和阀座粘在一起，堵死球和阀座粘在一起，堵死用高质量不同极性溶剂用高质量不同极性溶剂冲洗；更换新单向阀。冲洗；更换新单向阀。压力和流速变化大压力和流速变化大球和阀座密封不严，压力球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中不稳，气泡进入阀中清除气泡：打开排液阀，清除气泡：打开排液阀，用脱过气的甲醇大流量用脱过气的甲醇大流量冲洗，一般可解决问题。冲洗，一般可解决问题。Wet Prime从泵头往外渗漏流动相，色谱从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变峰的保留时间会改变泵垫圈磨损或破碎泵垫圈

15、磨损或破碎更换新垫圈更换新垫圈柱塞杆磨损、漏液柱塞杆磨损、漏液使用不当被折断使用不当被折断被卡住，不能运动被卡住，不能运动正常损耗或安装不合适正常损耗或安装不合适更换新柱塞杆更换新柱塞杆第26页/共35页注意事项注意事项注意事项注意事项n n每天实验结束一定要认真冲洗泵每天实验结束一定要认真冲洗泵,减少密封垫损耗及堵塞。减少密封垫损耗及堵塞。n n输液泵的垫圈要和流动相匹配协输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的调。多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈适用于甲醇、水、乙但有的垫圈适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。变软。n n注意流

16、动相组分的互溶性，使用注意流动相组分的互溶性，使用正确的正确的Seal Wash 溶剂。溶剂。n n必要时清洗单向阀：如果使用过必要时清洗单向阀：如果使用过缓冲盐溶液应使用缓冲盐溶液应使用40 50的温水超声的温水超声20min。如果使用过。如果使用过纯乙腈应使用异丙醇超声纯乙腈应使用异丙醇超声20min。如果使用过其他流动相或上述两如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后应使用纯甲醇超声种溶液超声后应使用纯甲醇超声20min。仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第27页/共35页进样系统进样系统进样系统进样系统故障故障可能原因可能原因排除排除针弯、折断、抽不上样、针弯、折断、抽不上样

17、、瓶破碎瓶破碎样品瓶不配套样品瓶不配套更换合适的样品瓶更换合适的样品瓶进样器针头堵塞进样器针头堵塞样品、缓冲样品、缓冲盐、隔垫碎片、盐、隔垫碎片、针头本身针头本身可用溶剂清洗，或换新针头可用溶剂清洗，或换新针头空白溶剂出色谱峰空白溶剂出色谱峰洗针未洗净洗针未洗净更换洗针液，或调整样品瓶更换洗针液，或调整样品瓶顺序顺序仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第28页/共35页注意事项注意事项注意事项注意事项n n每次批量进完样后手动清洗，或最每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针后进一针50ul流动相，如果流动相流动相，如果流动相中有盐的话则用纯净水替代缓冲盐中有盐的话则用纯净水替代缓冲盐那

18、部分比例。那部分比例。n n打开样品仓盖后，等待样品盘停止打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出，注意保持样品仓内转动后再取出，注意保持样品仓内和样品盘清洁。和样品盘清洁。n n使用微量进样瓶请设定正确的针尖使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值。高度值。n n注射器，样品瓶最好使用仪器自配注射器，样品瓶最好使用仪器自配的，不要用其它仪器的。的，不要用其它仪器的。n n仪器右侧的仪器右侧的Syringe要注意不能有气要注意不能有气泡，一旦出现，应使用面板上的泡，一旦出现，应使用面板上的Purge Injector功能。功能。n n停机前一定冲洗干净进样器内残留停机前一定冲洗干净进样器内残留的

19、样品或缓冲盐，防止样品和无机的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成样品交叉污染，硬件磨盐沉积造成样品交叉污染，硬件磨损或管路堵塞。损或管路堵塞。仪器常见故障及维护保养第29页/共35页色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第30页/共35页注意事项注意事项注意事项注意事项n npHpH值范围。值范围。值范围。值范围。n n样品过滤。样品过滤。样品过滤。样品过滤。n n柱压不能太高，防止冲击太大。柱压不能太高，防止冲击太大。柱压不能太高，防止冲击太大。柱压不能太高，防止冲击太大。n n预柱的使用。预柱的使用。预柱的使用。预柱的使用。n n长时间不用时要保存好长时间

20、不用时要保存好长时间不用时要保存好长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐一定要洗去缓冲盐一定要洗去缓冲盐一定要洗去缓冲盐,加入大于加入大于加入大于加入大于10%10%有机溶剂，将柱两端有机溶剂，将柱两端有机溶剂，将柱两端有机溶剂，将柱两端拧紧拧紧拧紧拧紧,保持柱填料湿润。保持柱填料湿润。保持柱填料湿润。保持柱填料湿润。仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第31页/共35页故障故障排除排除基线噪声大基线噪声大,灵敏度低灵敏度低灯故障更换灯灯故障更换灯流动池内有气泡流动池内有气泡用脱气甲醇，不同流量冲洗用脱气甲醇，不同流量冲洗池堵塞池堵塞用可溶堵塞物的溶剂冲洗（缓冲用可溶堵塞物的溶剂冲洗（

21、缓冲盐用水冲洗）盐用水冲洗）池污染池污染异丙醇、二氯甲烷、异丙醇、二氯甲烷、6mol/L HNO3冲洗冲洗基线漂移基线漂移温度影响温度影响检测器仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第32页/共35页仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养注意事项 不要挡住检测器散热风扇和通风孔不要挡住检测器散热风扇和通风孔检测器灯有一定寿命，超过4小时不用时可以不开灯。不要随意更改检测器进、出口管路不要随意更改检测器进、出口管路 示差折光检测器使用前、后均应充分清洗参比池示差折光检测器使用前、后均应充分清洗参比池 (Purge)(Purge)长时间停用检测器时，应在检测池中充满甲醇或乙腈，长时间停用检测器时，应在检测池中充满甲醇或乙腈，必要时密封检测器进、出口管路必要时密封检测器进、出口管路 第33页/共35页第34页/共35页