培养基的配制精选PPT.ppt

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1、关于培养基的配制第1页，讲稿共27张，创作于星期日 培养基培养基培养基培养基(culture medium)(culture medium)是指人工配制的、适合微生是指人工配制的、适合微生是指人工配制的、适合微生是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多

2、，不同种类的和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应培养基一般都应培养基一般都应培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。为了满足微生物生长繁殖或积

3、累代谢产物的要求，还为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的必须控制培养基合适的必须控制培养基合适的必须控制培养基合适的pHpH。实验原理实验原理实验原理实验原理第2页，讲稿共27张，创作于星期日牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和通的细菌

4、基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和NaClNaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCLNaCL提供无提供无提供无提供无机盐。机盐。机盐。机盐。琼脂在常用浓度下琼脂在常用浓度下琼脂在常用浓度下琼脂在常用浓度下9696时溶化，在时溶化，在时溶化，在时溶化，在4040时凝固

5、，时凝固，时凝固，时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。第3页，讲稿共27张，创作于星期日常用培养基：常用培养基：常用培养基：常用培养基：牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏

6、一号培养基用于培养放线菌；高氏一号培养基用于培养放线菌；高氏一号培养基用于培养放线菌；高氏一号培养基用于培养放线菌；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为；半固体培养基琼脂加量为；半固体培养基琼脂加量为；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%0.5%-0.8%。第

7、4页，讲稿共27张，创作于星期日实验分组安排实验分组安排实验分组安排实验分组安排4-54-5人一组人一组人一组人一组配制牛肉膏蛋白胨配制牛肉膏蛋白胨配制牛肉膏蛋白胨配制牛肉膏蛋白胨固体固体固体固体培养基培养基培养基培养基 400 mL400 mL 马铃薯糖琼脂培养基马铃薯糖琼脂培养基马铃薯糖琼脂培养基马铃薯糖琼脂培养基 200 mL200 mL 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）200 mL 200 mL 平皿平皿平皿平皿3030个个个个 99 mL99 mL无菌水无菌水无菌水无菌水 装三角瓶装三角瓶装三角瓶装三角瓶

8、 6 6 瓶瓶瓶瓶 9 mL9 mL无菌水无菌水无菌水无菌水 试管装试管装试管装试管装 12 12 支支支支 1 mL 1 mL 吸管吸管吸管吸管 15 15 支支支支 牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固体固体固体固体培养基培养基培养基培养基 斜面斜面斜面斜面 5 5支支支支第5页，讲稿共27张，创作于星期日牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏 3g3g蛋白胨蛋白胨蛋白胨蛋白胨 10g 10g NaCl 5gNaCl 5g琼脂琼脂琼脂琼脂 15-20g15-20g水水水水 1000ml1000m

9、lpH 7.4-7.6pH 7.4-7.6第6页，讲稿共27张，创作于星期日 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）淀粉琼脂培养基（高氏培养基）：可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉 20 g 20 g 硝酸钾硝酸钾硝酸钾硝酸钾 1 g 1 g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾磷酸氢二钾磷酸氢二钾 0.5 g0.5 gNaCl 0.5 gNaCl 0.5 g硫酸镁硫酸镁硫酸镁硫酸镁 0.5g 0.5g 硫酸亚铁硫酸亚铁硫酸亚铁硫酸亚铁 0.010.01克克克克 琼脂琼脂琼脂琼脂 15-20g15-20g水水水水 1000ml1000mlpH 7.2-7.4

10、pH 7.2-7.4第7页，讲稿共27张，创作于星期日马铃薯蔗糖琼脂培养基：马铃薯蔗糖琼脂培养基：马铃薯蔗糖琼脂培养基：马铃薯蔗糖琼脂培养基：把马铃薯洗净去皮，取把马铃薯洗净去皮，取把马铃薯洗净去皮，取把马铃薯洗净去皮，取200200克切成小块，克切成小块，克切成小块，克切成小块，加水加水加水加水10001000毫升，煮沸半小时后，补足水毫升，煮沸半小时后，补足水毫升，煮沸半小时后，补足水毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入分。在滤液中加入分。在滤液中加入分。在滤液中加入1515克琼脂，煮沸溶解克琼脂，煮沸溶解克琼脂，煮沸溶解克琼脂，煮沸溶解后加蔗糖后加蔗糖后加蔗糖后加蔗糖2020克补足

11、水分克补足水分克补足水分克补足水分 pHpH值调到值调到值调到值调到7.27.27.47.4 第8页，讲稿共27张，创作于星期日1 1、称量及溶化、称量及溶化2 2、调、调pH pH 3 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤）、加琼脂、溶化、定容、（过滤）4 4、分装、加塞、包扎、分装、加塞、包扎5 5、灭菌、灭菌6 6、摆斜面、摆斜面操作步骤操作步骤 第9页，讲稿共27张，创作于星期日 称量与溶化：称量与溶化：注意：注意：1 1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；

12、然后将牛肉膏连同称量纸少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。落，用玻璃棒将纸捞出即可。操作步骤操作步骤 (continued)(continued)第10页，讲稿共27张，创作于星期日 称量与溶化：称量与溶化：注意：注意：2 2）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品瓶盖也不要盖错。擦干，

13、再称取另一药品瓶盖也不要盖错。操作步骤操作步骤 (continued)(continued)第11页，讲稿共27张，创作于星期日调调pHpH值：值：在未调在未调pHpH值前，先用精密值前，先用精密pHpH试纸测量培养基的试纸测量培养基的原始原始pHpH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入入1 mol/L NaOH1 mol/L NaOH边加边搅拌，并随时用边加边搅拌，并随时用pHpH试纸试纸测其测其pHpH，直至，直至pHpH达要求。反之，用达要求。反之，用1mol/L HCl1mol/L HCl进行调节。进行调节。操作步骤操作步骤 (continued)(c

14、ontinued)第12页，讲稿共27张，创作于星期日加琼脂、溶化、定容、（过滤）加琼脂、溶化、定容、（过滤）加琼脂、溶化、定容、（过滤）加琼脂、溶化、定容、（过滤）琼脂一般应在调好了琼脂一般应在调好了琼脂一般应在调好了琼脂一般应在调好了pHpHpHpH后加入，琼脂的加入不会后加入，琼脂的加入不会后加入，琼脂的加入不会后加入，琼脂的加入不会影响培养基的影响培养基的影响培养基的影响培养基的pHpHpHpH。琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，

15、导致部分斜面不凝固或过软，另外部分易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多。则琼脂过多。则琼脂过多。则琼脂过多。加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。小，应补充水分至所需量。小，应补充水分至所需量。小，应补充水分至所需量。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued)(continued)(continued)(conti

16、nued)第13页，讲稿共27张，创作于星期日分装：分装：分装：分装：1 1）装量：）装量：）装量：）装量：液体液体液体液体试管高度的试管高度的试管高度的试管高度的1/41/4左右左右左右左右 固体固体固体固体试管高度的试管高度的试管高度的试管高度的1/5 1/5，灭菌后摆斜面，灭菌后摆斜面，灭菌后摆斜面，灭菌后摆斜面 半固体半固体半固体半固体一般为试管高度的一般为试管高度的一般为试管高度的一般为试管高度的1/31/3，灭菌后垂直放，灭菌后垂直放，灭菌后垂直放，灭菌后垂直放置置置置操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued)(continued)第14页，讲稿共27张，创作于星期日

17、棉塞制作方法：棉塞制作方法：棉塞制作方法：棉塞制作方法：加塞：加塞：棉塞棉塞 或或 硅胶塞硅胶塞 作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。并保证有良好的通气性能。第15页，讲稿共27张，创作于星期日包扎：包扎：包扎：包扎：加塞后，试管通常每加塞后，试管通常每加塞后，试管通常每加塞后，试管通常每7 7支一起，包上一层牛皮纸或两层报支一起，包上一层牛皮纸或两层报支一起，包上一层牛皮纸或两层报支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。纸，用线绳扎紧。三角瓶加

18、塞后也用牛皮纸包扎。纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued)(continued)灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸灭菌时包牛皮纸第16页，讲稿共27张，创作于星期日灭菌：灭菌：灭菌：灭菌

19、：培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌 通常灭菌条件为通常灭菌条件为通常灭菌条件为通常灭菌条件为1.05kg/cm1.05kg/cm2 2,121,121灭菌灭菌灭菌灭菌2020分钟；分钟；分钟；分钟；含糖量高的培养基，则为含糖量高的培养基，则为含糖量高的培养基，则为含糖量高的培养基，则为0.56kg/cm0.56kg/cm2 2,115,115灭菌灭菌灭菌灭菌3030分分分分钟。钟。钟。钟。操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤 (continued)(continued)第17页，讲稿共27张，创作于星期日摆斜面

20、：摆斜面：摆斜面：摆斜面：成扎摆放，不需将每支试管单独摆放成扎摆放，不需将每支试管单独摆放成扎摆放，不需将每支试管单独摆放成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 最好待培养基冷至最好待培养基冷至最好待培养基冷至最好待培养基冷至6060时摆斜面，以免形成大时摆斜面，以免形成大时摆斜面，以免形成大时摆斜面，以免形成大量冷凝水量冷凝水量冷凝水量冷凝水无菌检查：无菌检查：无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放在将灭菌的培养基放在将灭菌的培养基放在将灭菌的培养基放在3737温箱中培养温箱中培养温箱中培养温箱中培养24-4824-48小时，小时，小时，小时，以检查灭菌是否彻底。以检查灭菌是否彻底。以检查灭菌是否彻

21、底。以检查灭菌是否彻底。第18页，讲稿共27张，创作于星期日二二 消毒与灭菌消毒与灭菌第19页，讲稿共27张，创作于星期日 加加加加热热热热法法法法干热法干热法干热法干热法湿热法湿热法湿热法湿热法火焰烧灼火焰烧灼火焰烧灼火焰烧灼热空气灭菌热空气灭菌热空气灭菌热空气灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌间歇灭菌间歇灭菌间歇灭菌间歇灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌巴斯德消毒巴斯德消毒巴斯德消毒巴斯德消毒实验原理实验原理实验原理实验原理1 1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理

22、。2 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。实验目的实验目的实验目的实验目的第20页，讲稿共27张，创作于星期日 滤膜过滤器的滤膜是一种滤膜过滤器的滤膜是一种滤膜过滤器的滤膜是一种滤膜过滤器的滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为多孔纤维素，孔径一般为多孔纤维素，孔径一般为多孔纤维素，孔径一般为0.45um0.45um，过滤时，液体和小，过滤时，液体和小，过滤时，液体和小，过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截流分子物质通过，细菌被截流分子物质通过，细菌被截流分子物质通

23、过，细菌被截流在滤膜上。在滤膜上。在滤膜上。在滤膜上。过滤除菌过滤除菌过滤除菌过滤除菌 许多材料，如血清、许多材料，如血清、许多材料，如血清、许多材料，如血清、糖溶液等，用一般加糖溶液等，用一般加糖溶液等，用一般加糖溶液等，用一般加热消毒灭菌方法，均热消毒灭菌方法，均热消毒灭菌方法，均热消毒灭菌方法，均会被热破坏，应采用会被热破坏，应采用会被热破坏，应采用会被热破坏，应采用过滤除菌。过滤除菌。过滤除菌。过滤除菌。应用最广的过滤应用最广的过滤应用最广的过滤应用最广的过滤器有蔡氏器有蔡氏器有蔡氏器有蔡氏(Seitz)(Seitz)过过过过滤器和膜过滤器。滤器和膜过滤器。滤器和膜过滤器。滤器和膜过滤

24、器。第21页，讲稿共27张，创作于星期日紫外线灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌紫外线灭菌 紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在200-300 nm,200-300 nm,具有杀菌作用，其具有杀菌作用，其具有杀菌作用，其具有杀菌作用，其中以中以中以中以265-266 nm265-266 nm杀菌力最强。杀菌力最强。杀菌力最强。杀菌力最强。无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。菌。菌。菌。实验原理实验原理实验原理实验原理 (continued)(continued)第2

25、2页，讲稿共27张，创作于星期日干热灭菌干热灭菌干热灭菌干热灭菌电烤箱电烤箱电烤箱电烤箱实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤 1 1、干热灭菌、干热灭菌、干热灭菌、干热灭菌 2 2、压力蒸汽灭菌、压力蒸汽灭菌、压力蒸汽灭菌、压力蒸汽灭菌第23页，讲稿共27张，创作于星期日干热灭菌干热灭菌干热灭菌干热灭菌1 1、装入待灭菌物品、装入待灭菌物品、装入待灭菌物品、装入待灭菌物品2 2、升温、升温、升温、升温 接通电源，加热升温至接通电源，加热升温至接通电源，加热升温至接通电源，加热升温至160-170160-170。3 3、恒温、恒温、恒温、恒温 保持保持保持保持

26、160-170160-170 2 2小时。小时。小时。小时。4 4、降温、降温、降温、降温 切断电源，自然降温。切断电源，自然降温。切断电源，自然降温。切断电源，自然降温。5 5、开箱取物、开箱取物、开箱取物、开箱取物 待烤箱温度降到待烤箱温度降到待烤箱温度降到待烤箱温度降到7070以下以后，方以下以后，方以下以后，方以下以后，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于可打开箱门，取出物品。箱内温度高于可打开箱门，取出物品。箱内温度高于可打开箱门，取出物品。箱内温度高于7070，切勿自，切勿自，切勿自，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤 (continued)(continued)第24页，讲稿共27张，创作于星期日实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤(continued)压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌第25页，讲稿共27张，创作于星期日第26页，讲稿共27张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第27页，讲稿共27张，创作于星期日