鸭疫里默氏杆菌精选PPT讲稿.ppt

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1、关于关于鸭疫里默氏杆疫里默氏杆菌菌第一页，讲稿共三十七页哦主要内容主要内容鸭疫里默鸭疫里默氏杆菌氏杆菌概述概述防治防治疫苗疫苗病原病原血清型血清型致病因子致病因子第二页，讲稿共三十七页哦一、概述一、概述 鸭疫里默氏杆菌病（鸭传染性浆膜炎），又名鸭疫里默氏杆菌病（鸭传染性浆膜炎），又名新鸭病，鸭疫综合征。该病是由鸭疫里默氏杆菌引新鸭病，鸭疫综合征。该病是由鸭疫里默氏杆菌引起的一种慢性或急性败血症状的接触性传染病。由起的一种慢性或急性败血症状的接触性传染病。由于该病的高发病率与高死亡率，已成为危害各国养于该病的高发病率与高死亡率，已成为危害各国养鸭业的主要细菌性传染病之一。鸭业的主要细菌性传染病之

2、一。第三页，讲稿共三十七页哦 流行病学流行病学 易感动物：易感动物：家鸭、火鸡、鹅、番鸭、野鸟，以家鸭、火鸡、鹅、番鸭、野鸟，以 2-8 周龄的鸭最周龄的鸭最 为常见。为常见。传播途径：传播途径：经污染的饲料、饮水、飞沫、尘埃等通过呼吸道和经污染的饲料、饮水、飞沫、尘埃等通过呼吸道和 消化道，以及损伤的皮肤等途径传播。消化道，以及损伤的皮肤等途径传播。流行季节：流行季节：一年四季均可发病，以气温低、湿度大的季节发病和死亡最高一年四季均可发病，以气温低、湿度大的季节发病和死亡最高 第四页，讲稿共三十七页哦临床症状临床症状图图1.1.眼周围粘湿形成眼周围粘湿形成“眼圈眼圈”图图2.2.绿色下痢绿色

3、下痢 第五页，讲稿共三十七页哦 图图3.3.关节炎所致的站立不稳关节炎所致的站立不稳 图图4.4.死时的角弓反张死时的角弓反张第六页，讲稿共三十七页哦 病理变化病理变化 剖检以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎及脑膜炎为基剖检以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎及脑膜炎为基本特征。本特征。图图5.5.纤维素性心包炎纤维素性心包炎 图图6.6.纤维素性脑膜炎纤维素性脑膜炎第七页，讲稿共三十七页哦 鸭疫里默氏杆菌鸭疫里默氏杆菌(RA)是鸭疫里默氏杆菌病的病原是鸭疫里默氏杆菌病的病原 菌。菌。Hendrison和和Hilbert于于1932年首次分离鉴定。该病菌年首次分离鉴定。该病菌 先后被列入莫拉氏菌属、

4、巴氏杆菌属。先后被列入莫拉氏菌属、巴氏杆菌属。根据培养特性、根据培养特性、16srRNA序列和表型，明确了其分类序列和表型，明确了其分类 地位，并由地位，并由Segers等等(1993)建议鸭疫里默氏杆菌独立出来建议鸭疫里默氏杆菌独立出来 成立鸭疫里默氏杆菌属。成立鸭疫里默氏杆菌属。二、病原二、病原第八页，讲稿共三十七页哦形态形态 革兰氏阴性小杆菌革兰氏阴性小杆菌,大小为大小为0.2-0.4um,常单个或者常单个或者成对存在成对存在,有时也成长丝状有时也成长丝状,无鞭毛。瑞氏染色呈两极无鞭毛。瑞氏染色呈两极浓染；印度墨汁染色可见有荚膜。浓染；印度墨汁染色可见有荚膜。图图7.7.印度墨汁染色印度

5、墨汁染色第九页，讲稿共三十七页哦 在电镜下观察到鸭疫里默氏杆菌有特殊形态结构,即在细菌的顶端或者侧面有1-2个与菌体相连的芽状赘生物,其大小差异悬殊,直径从30-200nm不等。图8.顶端与侧面的芽状赘生物 图9.即将脱落的芽状赘生物第十页，讲稿共三十七页哦培养特性培养特性 鸭疫里默氏杆菌在巧克力培养基上生长旺盛，菌落不溶血，呈鸭疫里默氏杆菌在巧克力培养基上生长旺盛，菌落不溶血，呈奶油色半透明状圆形微突起。在普通琼脂和麦康凯培养基上不能生奶油色半透明状圆形微突起。在普通琼脂和麦康凯培养基上不能生长。从病料中分离培养鸭疫里默氏杆菌时在含长。从病料中分离培养鸭疫里默氏杆菌时在含COCO2 2环境中

6、生长更好。环境中生长更好。图图10.RA10.RA在巧克力平板上的菌落在巧克力平板上的菌落 图图11.RA11.RA在鲜血平板上的菌落在鲜血平板上的菌落第十一页，讲稿共三十七页哦三、血清型三、血清型 依据鸭疫里默氏杆菌表面多糖抗原成分依据鸭疫里默氏杆菌表面多糖抗原成分,可以用可以用凝集试验凝集试验和和沉淀沉淀试验试验进行血清型分析进行血清型分析。图图12.12.凝集试验凝集试验 图图13.13.沉淀试验沉淀试验第十二页，讲稿共三十七页哦Harry用平板凝集试验分为16个血清型,即血清A-P型；Brogden用沉淀试验分为7个血清型,即血清1-7型；Bisgarrd建议以阿拉伯数字表示,己有菌株

7、血清型分别命名为血清1-13型；Sandhu等将血清型扩增到17种,即血清1-17型；现被公认的鸭疫里默氏杆菌有21个血清型,即1-21型。第十三页，讲稿共三十七页哦 程安春（程安春（2003）提出）提出4个新的血清型存在个新的血清型存在,命名命名为为22-25型；张大丙（型；张大丙（2005）提出血清）提出血清10型还存在型还存在5个个亚型，并鉴定出亚型，并鉴定出1个变异株、个变异株、2个可能的新型菌株个可能的新型菌株 Sandhu（1979）认为）认为RA各血清型之间不发生交各血清型之间不发生交叉反应，但张大丙叉反应，但张大丙(2002)发现发现2型与型与17型之间，型之间，6型、型、12

8、与与16型之间存在交叉反应。型之间存在交叉反应。第十四页，讲稿共三十七页哦四、致病因子四、致病因子 Cam基因基因 Crasta(2002)从从RA基因文库中成功筛选出潜在致病因基因文库中成功筛选出潜在致病因子子cam基因，它表达基因，它表达CAMP（协同溶血素蛋白）。（协同溶血素蛋白）。CAMP的分子量为的分子量为37kD,与唾液酸蛋白酶有很高的同与唾液酸蛋白酶有很高的同源性，能协同其它细菌产生溶血作用源性，能协同其它细菌产生溶血作用,可能与致病性有关可能与致病性有关第十五页，讲稿共三十七页哦 明胶酶明胶酶 李继样（李继样（2008）发现所测）发现所测RA菌株中菌株中90%菌株能改变鸭菌株能

9、改变鸭胚成纤维细胞形态，具有较强致病作用，分析发现这些菌胚成纤维细胞形态，具有较强致病作用，分析发现这些菌株具有水解明胶的活性，分离获得株具有水解明胶的活性，分离获得55 ku的活性蛋白质，的活性蛋白质，证实其具有水解明胶、改变细胞形态的性质，是降解明胶证实其具有水解明胶、改变细胞形态的性质，是降解明胶的蛋白水解酶，可能是的蛋白水解酶，可能是RA的致病因子之一。的致病因子之一。第十六页，讲稿共三十七页哦 明胶酶是明胶酶是分解细胞外基质蛋白的基质金属蛋白分解细胞外基质蛋白的基质金属蛋白酶酶(MMPS)的一种，属于基质金属蛋白酶的一种，属于基质金属蛋白酶n型，含型，含72kDa(A型型,MMP-2

10、)和和92kDa(B型型,MMP-9)两种。两种。研究表明研究表明,明胶酶的表达和胃癌、结肠癌和乳癌等癌明胶酶的表达和胃癌、结肠癌和乳癌等癌症的发展有关。症的发展有关。第十七页，讲稿共三十七页哦 细菌液化明胶的能力可因细菌种类不同而有显著差细菌液化明胶的能力可因细菌种类不同而有显著差异异,因此明胶液化试验很早以来就被用来作为鉴定细因此明胶液化试验很早以来就被用来作为鉴定细菌的重要生化指标之一。菌的重要生化指标之一。第十八页，讲稿共三十七页哦利用明胶利用明胶-营养琼脂平板对分离鉴定的营养琼脂平板对分离鉴定的RARA进行明胶液化特性测进行明胶液化特性测定。有毒力的菌株能液化明胶定。有毒力的菌株能液

11、化明胶,无毒力的菌株不液化明胶。无毒力的菌株不液化明胶。图图14.RA14.RA不同菌株的明胶液化特性不同菌株的明胶液化特性第十九页，讲稿共三十七页哦 明胶酶对明胶酶对RA侵袭力的影响侵袭力的影响 10日龄试验鸭颈部皮下接种后，对日龄试验鸭颈部皮下接种后，对16h静脉血中细菌进静脉血中细菌进 行计数。行计数。图图15明胶酶对细菌侵袭力的影响明胶酶对细菌侵袭力的影响第二十页，讲稿共三十七页哦表表1.1.明胶酶对细菌侵袭力的影响明胶酶对细菌侵袭力的影响第二十一页，讲稿共三十七页哦明胶酶对动物致死率的影响明胶酶对动物致死率的影响 表表2.2.动物死亡数统计动物死亡数统计第二十二页，讲稿共三十七页哦

12、外膜蛋白外膜蛋白 外膜蛋白是致病菌细胞外膜中的一个主要组成成外膜蛋白是致病菌细胞外膜中的一个主要组成成分，参与细菌黏附与侵袭体细胞。分，参与细菌黏附与侵袭体细胞。图图16.16.大肠杆菌外围结构示意图大肠杆菌外围结构示意图第二十三页，讲稿共三十七页哦 Hu(2011)通过对含外膜蛋白（通过对含外膜蛋白（OmpA）菌株与不含）菌株与不含外膜蛋白的菌株特性研究证实外膜蛋白的菌株特性研究证实RA外膜蛋白是其一个外膜蛋白是其一个重要的致病相关因子。重要的致病相关因子。第二十四页，讲稿共三十七页哦第二十五页，讲稿共三十七页哦 图图17.17.RA ompA缺失株的构建技术原理缺失株的构建技术原理第二十六

13、页，讲稿共三十七页哦获得获得opmAopmA缺失株缺失株Th4ompATh4ompA用用BamHIBamHI、MscIMscI、XhoIXhoI、SphI SphI 处理处理RARA的的ompAompA基因基因用用MscIMscI、XhoIXhoI将将SpecSpecR R 从质粒从质粒pFW5pFW5切下切下将将片段连接在片段连接在BamHI-BamHI-和和SphI-SphI-处理过的载体处理过的载体pMEG375pMEG375上上合成载体合成载体pMEG375-LSR(SpecpMEG375-LSR(SpecR R)载体载体pMEG375-LSRpMEG375-LSR转化至转化至E.co

14、li DH5a PirE.coli DH5a Pir第二十七页，讲稿共三十七页哦细菌黏附与侵袭试验细菌黏附与侵袭试验 图图18.18.Th4ompA缺失株及其亲本株的黏附与侵袭试验结果缺失株及其亲本株的黏附与侵袭试验结果第二十八页，讲稿共三十七页哦 外膜蛋白的致病外膜蛋白的致病外膜蛋白的致病外膜蛋白的致病作用作用作用作用外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于细菌对宿主细胞细菌对宿主细胞细菌对宿主细胞细菌对宿主细胞的吸附的吸附的吸附的吸附外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于细菌通过防御屏细菌通过防御屏细菌通过防御屏细菌通过防御屏障障障障外膜蛋白有助于外膜蛋白

15、有助于外膜蛋白有助于外膜蛋白有助于细菌逃避免疫防细菌逃避免疫防细菌逃避免疫防细菌逃避免疫防御御御御外膜蛋白的致病机理外膜蛋白的致病机理第二十九页，讲稿共三十七页哦其他的致病因子其他的致病因子荚膜多糖：病原菌的荚膜多糖对宿主来说都是致病荚膜多糖：病原菌的荚膜多糖对宿主来说都是致病因子因子,可使菌体免受吞噬细胞与抗体的攻击可使菌体免受吞噬细胞与抗体的攻击,在细菌在细菌毒力中起着极其重要的作用。荚膜多糖亦是鸭疫里毒力中起着极其重要的作用。荚膜多糖亦是鸭疫里默氏杆菌的一种主要抗原默氏杆菌的一种主要抗原,对其研究对生产实践有着对其研究对生产实践有着重要的意义。重要的意义。第三十页，讲稿共三十七页哦五、疫

16、苗五、疫苗含菌体成分苗含菌体成分苗含菌体成分苗含菌体成分苗灭活苗灭活苗灭活苗灭活苗活苗活苗活苗活苗现现现现阶阶阶阶段段段段的的的的疫疫疫疫苗苗苗苗第三十一页，讲稿共三十七页哦 活苗活苗 Sandhu等等(1991)用用1、2、5型鸭疫里默氏杆菌自然型鸭疫里默氏杆菌自然弱毒菌株制备了三价活疫苗，经口服和气雾免疫弱毒菌株制备了三价活疫苗，经口服和气雾免疫1日日龄北京雏鸭后不引起任何明显的副作用，对同血清龄北京雏鸭后不引起任何明显的副作用，对同血清型强毒的攻击保护期长达型强毒的攻击保护期长达42天。天。据了解该疫苗已在美国等国家上市销售使用。据了解该疫苗已在美国等国家上市销售使用。第三十二页，讲稿共

17、三十七页哦 灭活苗灭活苗 Sandhu等等(l979)将鸭疫里默氏杆菌将鸭疫里默氏杆菌1、2、5型培养后用福尔马林灭活型培养后用福尔马林灭活制成三价灭活菌苗；在三价灭活苗的基础上，将大肠杆菌制成三价灭活菌苗；在三价灭活苗的基础上，将大肠杆菌O78与鸭疫与鸭疫里默氏杆菌里默氏杆菌(1、2、5型型)的福尔马林灭活液混合制备二联疫苗，该种的福尔马林灭活液混合制备二联疫苗，该种联苗对鸭疫里默氏杆菌的保护效果优于鸭疫里默氏杆菌单苗。联苗对鸭疫里默氏杆菌的保护效果优于鸭疫里默氏杆菌单苗。胡海清等胡海清等(2002)用鸭疫里默氏杆菌制成三价油乳剂灭活苗。用鸭疫里默氏杆菌制成三价油乳剂灭活苗。程安春等程安春等

18、(2004)将鸭疫里默氏杆菌将鸭疫里默氏杆菌1、2、4、5血清型制成铝胶复合佐血清型制成铝胶复合佐剂四价灭活疫苗。剂四价灭活疫苗。黄承锋等黄承锋等(2006)将鸭疫里默氏杆和大肠杆菌制成双联灭活蜂胶苗。将鸭疫里默氏杆和大肠杆菌制成双联灭活蜂胶苗。第三十三页，讲稿共三十七页哦含菌体成分苗含菌体成分苗包括亚单位疫苗和基因工程苗。包括亚单位疫苗和基因工程苗。目前关于目前关于 RA 的此类疫苗还处在研究阶段，的此类疫苗还处在研究阶段，其重点其重点集中在集中在 RA 外膜蛋白（外膜蛋白（OmpA）和荚膜相关成分。）和荚膜相关成分。第三十四页，讲稿共三十七页哦表表3.3.不同类型不同类型RARA疫苗的比较疫苗的比较第三十五页，讲稿共三十七页哦六、防治六、防治加强饲养管理加强饲养管理采用全进全出的饲养管理模式采用全进全出的饲养管理模式搞好环境卫生，加强环境消毒搞好环境卫生，加强环境消毒切实做好免疫接种工作切实做好免疫接种工作第三十六页，讲稿共三十七页哦感感谢谢大大家家观观看看第三十七页，讲稿共三十七页哦