电子课件724凝胶色谱法.ppt

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2、法课程：仪器分析 尺寸排阻色谱又称凝胶(渗透)色谱，主要用于大分子的分子分离。它是基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的。凝胶色谱法 1.分离原理 固定相为化学惰性的多孔凝胶，它类似于分子筛，但孔径更大。凝胶内有一定大小的空穴，分子体积大的待测物不能渗入孔穴中而被排阻，较早地被淋洗出来，中等的部分渗透，小分子则完全渗透，最后流出色谱柱。即待测物分子按分子大小(分子量大小)先后从柱中流出。凝胶色谱法 2.固定相 排阻色谱的色谱柱的填料是凝胶，它是一种表面惰性，含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。凝胶的孔穴仅允许直径小于孔开度的组分分子进入，这些孔对于流动相分子来说是相当大的，以致流动相分子

3、可以自由地扩散出入。凝胶色谱法 大的组分分子在色谱柱中停留时间较短，很快被洗脱出来，它的洗脱体积很小，小的组分分子在色谱柱中停留时间较长，洗脱体积较大，直到所有孔内的最小分子到达柱出口，完成按分子大小而分离的洗脱过程。凝胶色谱法 3.流动相的要求 能溶解样品且与凝胶相似(润湿凝胶)、粘度小(增加扩散速度)。排阻色谱法也称空间排阻色谱或凝胶渗透色谱法，是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。凝胶色谱法 （1）软性凝胶 如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构，其微孔能吸入大量的溶剂，并能溶涨到它干体的许多倍。它们适用于水溶性作流动相，一般用于小分子质量物质的分析，不适宜在高效液相色谱中。凝胶色谱法 （2）半刚性凝胶 如高交联度的聚苯乙烯。常以有机溶剂作流动相。（3）刚性凝胶 如多孔硅胶、多孔玻璃等，它们既可用水溶性溶剂，又可用有机溶剂作流动相，可在较高压强和较高流速下操作。凝胶色谱法