药物定量分析和分析方法验证.pptx

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1、基本要求基本要求 一、掌握定量分析方法验证的效能指标。二、熟悉定量分析样品的前处理方法。三、了解定量分析样品的前处理方法的进展 及在药物分中的应用。返 回第1页/共43页 第一节 定量分析样品的前处理方法 一、概述 1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？含卤素有机药物 R-X（F，Cl,Br,I）金属有机药物 R-O-Me（有机酸或酚的 含金属有机药物 金属盐；结合不牢固）有机金属药物 R-Me（结合牢固）2.常用的处理方法 不经有机破坏的分析方法 药物分析中常用的分析方法 经有机破坏的分析方法第2页/共43页二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法（一）直接测定

2、法 例如：富马酸亚铁例如：富马酸亚铁 溶于热稀矿酸，采用铈量法溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂，邻二氮菲作指示剂 第3页/共43页（二）经水解后测定法 1.直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定 CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH (CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2O NaCl +AgNO3 AgCl +NaNO3 AgNO3 +NH4SCN AgSCN +NH4NO3 2.用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定 Mg(C17H35COO)2 +H2SO4 MgSO4 +2C17H35COOH H2SO4 +2NaOH Na2SO4 +2H2O 第

3、4页/共43页（三）经氧化还原后测定法 1.碱性还原后测定 例如：泛影酸的含量测定 2.酸性还原后测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原 后银量法 第5页/共43页 3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量 （1）含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定 Sb5+2KI Sb3+2K+I2 I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6 （2）含铁药物 2Fe3+2KI 2Fe2+2K+I2 I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6H+第6页/共43页 三、经有机破坏的分析方法 湿法破坏 药物分析中常用的有机破坏的方法有 干法破坏 HNO3-HClO4法 氧瓶燃烧法(一)湿

4、法破坏 HNO3-H2SO4法 H2SO4-硫酸盐法 HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4(二)干法破坏 加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420 第7页/共43页 (三)氧燃瓶燃烧法(oxygen flask combustion method)1.仪器装置 500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶 2.称样 固体样；液体样要求详见P84 3.燃烧分解操作法 4.吸收液的选择 用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时 多数是H2O或H2O-NaOH；少数为H2O-NaOH-H2O2.第8页/共43页第二节第二节 定量分

5、析方法特点定量分析方法特点 一、容量分析法 （一）容量分析法的特点 操作简单、快速；比较准确（RSD0.2%）；仪器普通易得。第9页/共43页（二）容量分析法的计算问题 1.滴定度（T）的概念 每1mlmol溶液相当于被测物质的量(mg)2.滴定度的计算 aA+bB cC+dD T=Mb/aB 3.百分含量的计算 （1）直接滴定法 D%=V F T/W 100%F=实际标定的浓度/规定的浓度 （2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）D%=（VO VB)F T/W 100%第10页/共43页 二、光谱分析法（一）紫外-可见分光光度法（200nm760nm)灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7

6、g/ml 1.特点 准确度高，SRD（%）为2%5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用 范围广。2.朗伯-比耳定律 A=ECL E1%1cm=10/M第11页/共43页 3.对溶剂的要求:220240nm 241250nm 251300nm 300nm以上 溶剂+吸收池A 0.41 0.20 0.10 0.05 4.测定方法 要求供试品溶液的A应在0.3 0.7 对照品比较法：Cx=(Ax/Ar)Cr;含量%=CxD/W100%常用方法 吸收系数法：含量%=(E1%1cm)x/(E1%1cm)r 100%计算分光光度法：VA的三点校正法第12页/共43页 （二）荧光分光光度法 灵敏度高，可达

7、10-10g/ml 10-12g/ml 在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用 1.特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但干扰因素多。制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。第13页/共43页2.荧光分析仪 有二个单色光器激发单色光器与发射单色光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角。3.含量测定 常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)Cr Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。第14页/共43页 三、色谱分析法 按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 方法分类 按分离

8、方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC。（一）HPLC法 1.对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性试验 分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);要大于1.5 拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在0.9 1.05 第15页/共43页 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法 标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法 应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法 如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法第16页/共43页 （二）GC法 1.对GC仪器一

9、般要求 载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱 色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性试验 分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);要大于1.5 拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在0.9 1.05 第17页/共43页 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 3.测定方法 标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法 应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注 射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正 因子测定含量。返 回第18页/共43页 第三节 药品质量标准分析方法验证 一、准确度 是指用该方法测定结果与真实值接近的程

10、度，用回收率表示（一）含量测定方法的准确度 1.原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。2.制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共9个数据来评价 回收率的RSD2%；用UV和HPLC法时，一般回 收率可达98%102%；容量法可达99.7%100.3%第19页/共43页（二）数据要求 回收率%=（测定平均值 空白值）/加入量100%要求制备高、中、低三浓度的样品，各测定3次。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。第

11、20页/共43页 二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的接近程度。（一）精密度表示方法 1.偏差(deviation,d)d=测得值-平均值=Xi-X 2.标准偏差（standard deviation,SD或S）S=(Xi X)2/(n-1)1/2 3.相对标准差(relative standard deviation,RSD)也称变异系数 (coefficient of variation,CV)RSD=标准偏差/平均值100%=S/X 100%第21页/共43页（二）重复性、中间精密度及重现性 1.重复性 在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密

12、度.2.中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。3.重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。第22页/共43页（三）数据要求 应报告S或SD、RSD和置信区间。用统计学的可信性分析(t或f）。第23页/共43页 三、专属性 是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检 查、含量测定方法，均应考察其专属性。第24页/共43页 四、检测限（limit of detection,LOD)是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度

13、或量即可。（一）常用的方法 1.非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。2.仪器分析方法 UV法：LOD=f.3S空=C样/A样 3S空 Flu法：LOD=f.3S空=C样/(F样-F空)3S空 GC和HPLC法：LOD=S/N=2或3 第25页/共43页（二）数据要求 应附测试图，说明测试过程和检测限结果。第26页/共43页 五、定量限（limit of quantitation,LOQ)是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应 具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求 LOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10时相应的浓

14、度进行 测定。第27页/共43页 六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度。UV法：首先制备一个标准系列，浓度点n=5;A=0.3.0.7 建立回归方程C=aA+b;r 0.9999。HPLC法：制备一个标准系列，浓度点n=5 7;以C对h或A或与 内标物的峰面积之比，建立回归方程r 0.9999。第28页/共43页七、范围 是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间。原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的80%-120%。制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70%-130%。溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的20%。

15、第29页/共43页 八、耐用性 是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的承受 程度。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时 间等。HPLC法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱温，流速等。GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检 测器温度等。第30页/共43页 分析方法效能指标的具体应用：1.用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。2.用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。3.原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其余均要

16、求。返 回第31页/共43页 第四节 生物样品分析方法的基本要求 一、常用样品的种类、采集和贮张 二、生物样品分析前处理技术 三、定量分析方法验证 返 回第32页/共43页练习与思考练习与思考A型题 1 药品的鉴别是证明 A未知药物的真伪 B已知药物的真伪 C已知药物的疗效 D药物的纯度 E药物的稳定性2相对标准差表示的应是A准确度 B回收率 C精密度 D纯净度 E限度第33页/共43页3用移液管量取的25ml溶液，应记成A25ml B25.0ml C25.00ml D25.000ml E251ml4以下三个数字0.5362、0.0014、0.25之和应为A0.79 B0.788 C0.787

17、 D0.7876 E0.8第34页/共43页5表示两变量指标A与C之间线性相关程度常用A相关规律 B比例常数 C相关常数 D相关系数 E精密度6减小偶然误差的方法是A做空白试验 B做对照实验 C做回收试验 D增加平行测定次数 E选用多种测定方法第35页/共43页B型题 14A1.23 B1.22 C2.54 D2.53 E2.5111.225222.535132.534842.5068ACDE第36页/共43页 58A空白试验 B对照试验 C回收试验 D鉴别试验 E检测试验5以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验6在供试液中加入已知量的标准物或已知量的被测物后，同法进行测定试验7用已知量的纯物

18、质作为试样，同法进行测定试验8取少许水杨酸，加水溶解，加三氯化铁试液，显紫堇色ACDB第37页/共43页 X X型题型题 1药物分析方法的效能指标有 A检测限 B耐用性 C准确度 D专属性 E代表性2对药物中杂质进行检查时，要求所用的检查方法应具有 A耐用性 B专属性 C检测限 D准确度 E线性与范围第38页/共43页3 3用碘量法测定维生素用碘量法测定维生素C C原料药时，要求原料药时，要求碘量法应具备碘量法应具备 A A专属性专属性 B B定量限定量限 C C精密度精密度 D D粗放度粗放度 E E线性线性4 4系统误差来源于系统误差来源于 A A分析方法分析方法 B B所用试剂所用试剂

19、C C操作者操作者 D D所用仪器所用仪器 E E工作环境工作环境第39页/共43页5消除系统误差的方法为 A校正所用的仪器 B作对照实验 C做空白试验 D做预试验 E做回收试验6以下所列仪器哪些使用前需进行校正 A滴定管 B量瓶 C量杯 D移液管 E碘量瓶第40页/共43页7中国药典（2005年版）在正文部分的检查项下应包括 A药物的真伪 B有效性 C均一性 D纯度要求 E安全性8进行药品检验时，要从大量样品中取出少量样品应考虑取样的 A多样性 B真实性 C代表性 D科学性 E可靠性第41页/共43页9 9用信噪比表示检测限时，信噪比一般应用信噪比表示检测限时，信噪比一般应为为 A A11 B11 B21 C21 C31 31 D D41 E41 E51511010检验报告应有以下内容检验报告应有以下内容 A A供试品名称供试品名称 B B外观性状外观性状 C C检验结果、结论检验结果、结论 D D送检人盖章送检人盖章 E E报告的日期报告的日期返 回第42页/共43页感谢您的观看！第43页/共43页