液相色谱分析法.pptx
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1、2023/3/25液相色谱仪(1)第1页/共21页2023/3/25液相色谱仪(2)第2页/共21页2023/3/25液相色谱仪(3)第3页/共21页2023/3/25液相色谱仪(4)第4页/共21页2023/3/25一、高效液相色谱法的特点 特点:高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第5页/共21页2023/3/25二、流程及主要部件1.流程第6页/共21页2023/3/252.主要部件主要部件(1)高压输液泵主要部件之一,压力:150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(10m),液体的流动相高速通过时,将产生很高的压力,因此高压、高速是
2、高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性第7页/共21页2023/3/25(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。内梯度:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。第8页/共21页2023/3/25(3)进样装置 流路中为高压力工作状态,通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示:第9页/共21页2023/3/25(4)高效分离柱 柱体为直型不锈钢管,内径16 mm,柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。第10页/共21页2
3、023/3/25(5)高效液相色谱检测器 紫外光度检测器(UV):最小检测量10-9gmL-1,对流量和温度的波动不敏感,可用于梯度洗脱。最常用的检测器。第11页/共21页2023/3/25光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器:1024个二极管阵列,各检测特定波长,计算机快速处理,三维立体谱图,如图所示。第12页/共21页2023/3/25三、影响分离的因素 在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/U较小,可以忽略不计,而只有两项,即:H=A+C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同,如图所示:影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。第13页/共21页2023/3/25
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