黄酮类化合物 (2)课件.ppt

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1、关于黄酮类化合物(2)第1页，此课件共99页哦一、基本结构与分类一、基本结构与分类（一）黄酮类化合物的基本结构（一）黄酮类化合物的基本结构色原酮色原酮2-2-苯基色原酮苯基色原酮苯并-吡喃酮无色黄色黄色碱性碱性黄碱素黄碱素第2页，此课件共99页哦黄酮类化合物是泛指黄酮类化合物是泛指两个两个具有酚羟具有酚羟基的基的苯环苯环（A-与与B-环）通过环）通过中央三碳原中央三碳原子子相互连接而成的一系列化合物。相互连接而成的一系列化合物。定义定义:第3页，此课件共99页哦（二）黄酮类化合物的分类（二）黄酮类化合物的分类中央三碳链的氧化程中央三碳链的氧化程度度B-环联接位置（环联接位置（2-或或3-位）位

2、）三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状分为以下几种类型：分为以下几种类型：根据其根据其：第4页，此课件共99页哦 1黄酮类（黄酮类（flavones）以以2-苯基色原酮为基本母核，苯基色原酮为基本母核，C3无无含氧取代基含氧取代基。黄芩苷黄芩苷 用于调节体内血糖，增强肌体免疫力，促进生长，提高肌体抗氧化能力第5页，此课件共99页哦2 2黄酮醇类（黄酮醇类（flavonolflavonol）槲皮素槲皮素R=H 芦丁芦丁 R=芸香糖基芸香糖基 以以2-2-苯基色原酮为基本母核，苯基色原酮为基本母核，C C3有含有含氧取代基。氧取代基。具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用具有降低毛细血管的异常通

3、透性和脆性的作用。降低血压、增强降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉。国毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉。国内用于心脑血管药品制剂的主要成分，国外还大量用于食品添加剂内用于心脑血管药品制剂的主要成分，国外还大量用于食品添加剂和化妆品和化妆品槐米槐米第6页，此课件共99页哦3 3二氢黄酮类（二氢黄酮类（flavanonesflavanones）二氢黄酮二氢黄酮 橙皮苷橙皮苷 降低毛细管的脆性，保护毛细血管，防止微血管破裂出血的作用。用于高血压病的辅助治疗无色第7页，此课件共99页哦4 4二氢黄酮醇类（二氢黄酮醇类（flavanonolsfla

4、vanonols）二氢槲皮素二氢槲皮素二氢黄酮醇二氢黄酮醇第8页，此课件共99页哦水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。伤。第9页，此课件共99页哦5 5异黄酮类（异黄酮类（isoflavonesisoflavones）其其B环连接在环连接在C3位上。位上。大豆素大豆素R=H 大豆苷大豆苷R=glc 雌激素样作用、抗雌激素样作用、抗缺氧、抗癌缓解高缺氧、抗癌缓解高血压患者的头痛等血压患者的头痛等

5、症状症状微黄第10页，此课件共99页哦6 6查耳酮类（查耳酮类（chalconeschalcones）两苯环之间的两苯环之间的三碳链为开链结构三碳链为开链结构 红花苷红花苷活血通径、散瘀止痛、闭经、痛经无色无色第11页，此课件共99页哦红花所含的色素红花苷是第一个发现的查耳酮类植物成分。红花所含的色素红花苷是第一个发现的查耳酮类植物成分。红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深色；开花后期红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。第12页，此课件共99页哦7 7花色素类花色素类 又称花

6、青又称花青素，是一类素，是一类水溶性色素水溶性色素，多以多以苷苷的形式存在。的形式存在。矢车菊素矢车菊素花色素花色素oxonium第13页，此课件共99页哦8 8黄烷黄烷-3-3-醇类醇类 又称儿茶素类化合物又称儿茶素类化合物（）（）儿茶素儿茶素 黄烷醇黄烷醇 抗氧化、除臭、抗衰老第14页，此课件共99页哦9 9橙橙酮类酮类 橙橙酮酮硫磺菊素硫磺菊素护肝作用第15页，此课件共99页哦常见取代基常见取代基（1）-OHA环：5,7-OH，形成间三酚结构B环：3，4-OH形成邻苯二酚结构C环：C3-OH（2）异戊二烯基：主要在羟基邻位取代A环：6,8B环：2,5有的还具有次甲二氧基,萜类侧链,呋喃骈

7、环,吡喃骈环等结构,这样组成了上千个不同结构的化合物。第16页，此课件共99页哦（三（三)组成黄酮苷的糖类组成黄酮苷的糖类 单糖类：单糖类：D-葡萄糖、葡萄糖、D-半乳糖、半乳糖、D-木糖、木糖、L-鼠李糖、鼠李糖、L-L-阿拉伯糖、阿拉伯糖、D-D-葡萄糖醛酸等。葡萄糖醛酸等。双糖类：双糖类：槐糖（槐糖（glc12glc）、芸香糖（芸香糖（rh16glc）、龙胆二糖（龙胆二糖（glc16glc）、）、新橙皮糖（新橙皮糖（rh12glc）、）、刺槐二糖（刺槐二糖（rh16glc）等。）等。植物界黄酮类化合物大多以苷的形式存在第17页，此课件共99页哦酰化糖类：酰化糖类：2-乙酰葡萄糖等。乙酰葡

8、萄糖等。三糖类：三糖类：龙胆三糖（龙胆三糖（glc16glc12fru）槐三糖（槐三糖（glc12glc12glc）等。）等。糖的连接位置：糖的连接位置：7位位80%,其次是其次是5位和位和4位位黄酮醇苷黄酮醇苷3位位70%,7位位20%,4位约占位约占5%多在多在3位上连接一个糖位上连接一个糖双糖苷双糖苷3,7位较多见位较多见,3,4位较少见。双糖苷可以是同位较少见。双糖苷可以是同一种糖一种糖,也可以是不同的糖。如：槲皮素也可以是不同的糖。如：槲皮素3,7二葡萄二葡萄糖苷糖苷第18页，此课件共99页哦苷的结构苷的结构糖与苷元的连接形式常见的为糖与苷元的连接形式常见的为-O-糖苷糖苷;在天然黄

9、在天然黄酮类化合物中也有以酮类化合物中也有以-C-糖苷的形式存在。如牡糖苷的形式存在。如牡荆素（荆素（vitexin）,葛根素葛根素(puerarin)等。等。心脑血管抗癌提高免疫，增强心肌收缩力，保护心肌细胞，降低血压，抗血小板聚集第19页，此课件共99页哦二、黄酮类化合物的生物活性（自学）二、黄酮类化合物的生物活性（自学）（一）对心血管系统的作用（一）对心血管系统的作用（二）抗肝脏毒作用（二）抗肝脏毒作用（三）抗炎作用（三）抗炎作用（四）雌性激素样作用（四）雌性激素样作用（五）抗菌及抗病毒作用（五）抗菌及抗病毒作用（六）泻下作用（六）泻下作用（七）解痉作用（七）解痉作用第20页，此课件共9

10、9页哦第二节第二节 黄酮类的理化性质及显色反应黄酮类的理化性质及显色反应 一、性一、性状状多为结晶性固体，多为结晶性固体，少数苷（含糖分子多时）为少数苷（含糖分子多时）为无定形粉末。无定形粉末。2旋光性旋光性 游离的苷元游离的苷元中中二氢黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）、黄烷黄烷(醇醇)，其余则无光学活性。其余则无光学活性。1晶形晶形 黄酮苷类多具有旋光性，且多为黄酮苷类多具有旋光性，且多为左旋左旋第21页，此课件共99页哦3颜色颜色 是否存在交叉共轭体系及助色团（是否存在交叉共轭体系及助色团（-OH,-OCH3）的）的种类、数目及取代位置有关种类、数目及取代位置有关色原酮色原酮结构式：结构式：无色

11、无色黄酮（醇）、查耳酮、橙酮黄酮（醇）、查耳酮、橙酮：色原酮：色原酮2-位上引入苯环后，位上引入苯环后，形成交叉共轭体系，电子重排、转移，使共轭链延形成交叉共轭体系，电子重排、转移，使共轭链延长，长，显色显色。异黄酮异黄酮：共轭链短，显：共轭链短，显微黄色微黄色二氢黄酮二氢黄酮：无交叉共轭体系，不显色：无交叉共轭体系，不显色第22页，此课件共99页哦综上原因，各种黄酮类化合物颜色深浅排列顺序如综上原因，各种黄酮类化合物颜色深浅排列顺序如下下花青素橙酮查耳酮黄酮（醇）异黄酮二氢黄酮花青素橙酮查耳酮黄酮（醇）异黄酮二氢黄酮（深）（深）（浅）（浅）第23页，此课件共99页哦 黄酮（醇）分子中，尤其在

12、黄酮（醇）分子中，尤其在 7-位及位及 4-位引入位引入-OH及及-OCH3等助色团后，而使化等助色团后，而使化合物的合物的颜色加深。颜色加深。花色素及其苷元的颜色随花色素及其苷元的颜色随pH不同而改变不同而改变 一般显一般显红红（pH 7）紫紫（pH8.5）蓝蓝（pH8.5）等颜色）等颜色插烯酸结构，促进电子重排、移位插烯酸结构，促进电子重排、移位第24页，此课件共99页哦第25页，此课件共99页哦 二、溶二、溶解解性性1苷与苷元苷与苷元 游离苷元：游离苷元：苷类：苷类：2苷元苷元黄酮、黄酮醇、查耳酮等黄酮、黄酮醇、查耳酮等更难溶于水更难溶于水平面性强的分子，因分子与分子间平面性强的分子，因

13、分子与分子间堆积堆积紧密紧密，分子间氢键相互缔合，分子间，分子间氢键相互缔合，分子间引力较引力较大，故难溶于水。大，故难溶于水。一般难溶于水一般难溶于水,易溶于有机溶剂（如易溶于有机溶剂（如MeOH,EtOH,EtOAC,Et2O等）等）第26页，此课件共99页哦二氢黄酮及二氢黄酮醇等二氢黄酮及二氢黄酮醇等溶解度稍大溶解度稍大半椅式结构、半椅式结构、非平面性非平面性分子，故分子与分子，故分子与分子间分子间排列不紧密排列不紧密，分子间引力降低，有，分子间引力降低，有利于水分子进入，利于水分子进入，溶解度稍大。溶解度稍大。R=H，二氢黄酮，二氢黄酮R=OH，二氢黄酮醇，二氢黄酮醇第27页，此课件共

14、99页哦花色苷元（花青素）类花色苷元（花青素）类水溶度较大水溶度较大虽也为平面性结构，但因以虽也为平面性结构，但因以离子形式离子形式存在，具有存在，具有盐的通性盐的通性，故亲水性较强。，故亲水性较强。花青素花青素第28页，此课件共99页哦 3 3苷类苷类苷元相同时，羟基糖越多，糖分子越苷元相同时，羟基糖越多，糖分子越多，水溶度越大。多，水溶度越大。同一苷元，同一苷元，3-O-葡萄糖苷葡萄糖苷的水溶度的水溶度7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷第29页，此课件共99页哦类别类别性质性质黄酮、黄酮黄酮、黄酮醇及其醇及其苷苷二氢黄酮、二氢黄酮、二氢黄二氢黄酮醇及酮醇及其苷其苷异黄酮异黄酮 查耳酮查耳酮花色素花色

15、素颜色颜色灰黄黄灰黄黄无色无色微黄微黄黄橙黄黄橙黄随随PHPH不同不同而改变而改变旋光性旋光性苷元：无苷元：无苷：有苷：有苷元及苷均苷元及苷均有有苷元：无苷元：无苷：有苷：有苷元：无苷元：无苷：有苷：有苷元：无苷元：无苷：有苷：有水溶性水溶性平面型分子，平面型分子，分子间分子间引力大，引力大，溶解性溶解性差差非平面分子，非平面分子，溶解性溶解性较黄酮较黄酮类好类好溶解性一溶解性一般较般较差差溶解性较溶解性较异黄酮异黄酮好好水溶性水溶性荧光荧光有荧光，多为黄色橙色有荧光，多为黄色橙色第30页，此课件共99页哦 三、酸性与碱性三、酸性与碱性（一）酸性（一）酸性黄酮黄酮酚羟基酸性强弱顺序依次为：酚羟

16、基酸性强弱顺序依次为：7,47,4-二二OHOH7-7-或或4 4-OH-OH一般酚羟基一般酚羟基5-OH5-OH应用应用:用于提取、分离及鉴定工作用于提取、分离及鉴定工作 插烯酸插烯酸第31页，此课件共99页哦羟基位置羟基位置酸性酸性 溶解性溶解性7 7，4 4-二二羟基羟基7 7或或4 4-羟羟基基一般酚羟基一般酚羟基5-5-羟基羟基强强弱弱溶于溶于5%NaHCO35%NaHCO3溶溶液液溶于溶于5%Na2CO35%Na2CO3溶溶液液溶于溶于0.2%NaOH0.2%NaOH溶溶液液溶于溶于4%NaOH4%NaOH溶液溶液第32页，此课件共99页哦（二）碱性（二）碱性强酸下形成钅羊盐强酸下

17、形成钅羊盐 -吡喃环上的吡喃环上的1-氧原子氧原子，因有未共用，因有未共用的电子对，故表现的电子对，故表现微弱的碱性微弱的碱性，可与强无，可与强无机酸生成盐，但生成的盐极不稳定，加水机酸生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后后即即可可分分解解。钅钅羊羊盐盐常常常常表表现现出出特特殊殊的的颜颜色色，可用于鉴别。可用于鉴别。第33页，此课件共99页哦 四、呈色反应四、呈色反应（一）还原试验（一）还原试验鉴别鉴别1盐酸盐酸-镁粉（或锌粉）反应镁粉（或锌粉）反应 黄酮（醇）黄酮（醇）橙红橙红紫红色紫红色二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）查耳酮、橙酮、儿茶素查耳酮、橙酮、儿茶素（-）异黄酮类除少数例外，也不显色异

18、黄酮类除少数例外，也不显色操作：操作：样品样品/乙醇中加入少许镁粉振摇，滴加乙醇中加入少许镁粉振摇，滴加 几滴浓几滴浓HClHCl，即可显色。，即可显色。第34页，此课件共99页哦排除干扰排除干扰：先作空白对照实验先作空白对照实验Mg粉粉上述四种黄酮上述四种黄酮HCl无色无色红色红色注意注意:花色素、部分橙酮、查耳酮类在浓花色素、部分橙酮、查耳酮类在浓HCl中产生颜中产生颜色。必要时色。必要时,可不加镁粉作一空白对照。可不加镁粉作一空白对照。第35页，此课件共99页哦2 2四氢硼钠反应四氢硼钠反应区别区别二氢黄酮二氢黄酮类类二氢黄酮类二氢黄酮类/EtOH2NaBH4/MeOH浓浓HCl 红红紫

19、色紫色第36页，此课件共99页哦（二）金属盐类试剂的络合反应（二）金属盐类试剂的络合反应C3-OH，C5-OH，邻二，邻二OH（+）络合应具备的条件络合应具备的条件 结果：结果：颜色，沉淀颜色，沉淀用途：用途：鉴定，结构测定，提取分离鉴定，结构测定，提取分离第37页，此课件共99页哦1.铝盐铝盐 1AlCl3溶液，络合物多为溶液，络合物多为黄色，黄色，为为显色剂和比色测定。显色剂和比色测定。2.铅盐铅盐 常用常用1醋酸铅醋酸铅及及碱式醋酸铅碱式醋酸铅水溶液水溶液，可生成可生成沉沉淀淀。中性醋酸铅只能与分子中具有邻二酚羟基或兼有3-OH,4-酮基或5-OH,4-酮基的化合物产生沉淀。应用：应用：

20、鉴定、提取及分离工作。鉴定、提取及分离工作。第38页，此课件共99页哦3ZrOCl2（锆盐）（锆盐）5-OH黄酮类黄酮类3-OH2%枸橼酸枸橼酸 黄黄（3-OH3-OH黄酮黄酮）褪色（褪色（5-OH5-OH黄酮）黄酮）2%ZrOCl2黄黄甲醇甲醇第39页，此课件共99页哦3-OH3-OH，4-4-酮基酮基络合物稳定性络合物稳定性5 5OHOH，4-4-酮基酮基络合物络合物原因：原因：第40页，此课件共99页哦4镁盐镁盐 鉴别两类二氢黄酮鉴别两类二氢黄酮 二氢黄酮二氢黄酮Mg(Ac)2二氢黄酮醇二氢黄酮醇天蓝色天蓝色荧光荧光喷洒喷洒黄酮、黄酮醇及异黄酮黄酮、黄酮醇及异黄酮 显显黄色黄色橙黄色橙黄

21、色褐色褐色 第41页，此课件共99页哦 5.氯化锶（氯化锶（SrCl2）鉴别鉴别邻二邻二OH具邻二酚邻二酚OHOH黄酮黄酮类/氨性甲醇氨性甲醇 绿色绿色棕色棕色乃至乃至黑色黑色6.三氯化铁反应三氯化铁反应鉴别鉴别Ar-OH第42页，此课件共99页哦（三）硼酸显色反应（三）硼酸显色反应具具5 5OHOH 的黄酮的黄酮 22OHOH查耳酮查耳酮硼酸硼酸（四）碱性试剂显色反应（四）碱性试剂显色反应黄酮类化合物的溶液滴在滤纸上黄酮类化合物的溶液滴在滤纸上黄酮类化合物的溶液滴在滤纸上黄酮类化合物的溶液滴在滤纸上,干燥后喷干燥后喷干燥后喷干燥后喷Na2CO3Na2CO3水溶液或水溶液或水溶液或水溶液或置氨

22、蒸气中薰置氨蒸气中薰置氨蒸气中薰置氨蒸气中薰,常能产生颜色变化常能产生颜色变化常能产生颜色变化常能产生颜色变化,尤其在尤其在尤其在尤其在UVUV光下光下光下光下,变化更为明变化更为明变化更为明变化更为明显。用氨蒸气处理后色泽显。用氨蒸气处理后色泽显。用氨蒸气处理后色泽显。用氨蒸气处理后色泽,当露置空气中随即退去当露置空气中随即退去当露置空气中随即退去当露置空气中随即退去,喷以喷以喷以喷以Na2CO3的颜色不易退去。的颜色不易退去。亮黄色亮黄色酸性液酸性液第43页，此课件共99页哦1.二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应异构体二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应异构体查耳酮类化合物，显橙查耳酮类

23、化合物，显橙-红色。红色。2.黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，据此可与黄酮类区别。色，据此可与黄酮类区别。3.黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或黄酮类化合物当分子中有邻二酚羟基取代或3,4-二羟基取代时，在碱液中不安定，很快氧化，由二羟基取代时，在碱液中不安定，很快氧化，由黄色黄色深红色深红色绿棕色沉淀。绿棕色沉淀。第44页，此课件共99页哦练习题芦丁（芦丁（rutin）lHCl-Mg反应lHCl-Zn反应lNaBH4反应l锆-枸橼酸反应lSrCl2反应l硼酸+草酸反应lMolish反应l（+）l（+）l（-）l黄色，加枸橼酸,褪色l

24、（+）l（+）黄色l（+）第45页，此课件共99页哦 第三节第三节 黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离 一、提一、提取取存在形式存在形式：花、叶、果等组织中花、叶、果等组织中苷苷木部坚硬组织中木部坚硬组织中游离苷元游离苷元选择溶剂：选择溶剂：黄酮苷黄酮苷，极性稍大的苷元极性稍大的苷元丙酮、丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水、醋酸乙酯、乙醇、水、甲醇甲醇-水（水（1：1）、甲醇）、甲醇第46页，此课件共99页哦花青素类花青素类可加少量酸（如可加少量酸（如 0.l盐酸）盐酸）黄酮苷元黄酮苷元宜用极性较小的溶剂宜用极性较小的溶剂（氯仿、乙醚、醋酸乙酯）等提取（氯仿、乙醚、醋酸乙酯）等提取多糖苷类

25、多糖苷类沸水提取沸水提取对对得得到到的的粗粗提提取取物物可可进进行行精精制制处处理理，常常用的方法有：用的方法有：第47页，此课件共99页哦（一）溶剂萃取法（一）溶剂萃取法1醇浸液、去脂杂醇浸液、去脂杂加加p.e水提取去水杂水提取去水杂加加多倍量高度多倍量高度醇醇第48页，此课件共99页哦药材药材甲醇或乙醇提取，回收醇甲醇或乙醇提取，回收醇浸膏浸膏加水溶解加水溶解水溶液水溶液分别以不同极性溶剂萃取分别以不同极性溶剂萃取（石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇）（石油醚，氯仿，乙酸乙酯，正丁醇）石油醚层石油醚层（小极性）（小极性）氯仿层氯仿层（苷元）（苷元）乙酸乙酯层乙酸乙酯层（大极性苷元（大极性苷元及

26、单糖苷）及单糖苷）正丁醇层正丁醇层（黄酮苷）（黄酮苷）水层水层（多糖等）（多糖等）第49页，此课件共99页哦（二）碱提取酸沉淀法（二）碱提取酸沉淀法适合酸性成分适合酸性成分具有具有Ar-OH的黄酮的黄酮药材药材碱水液碱水液 H+OH-沉淀沉淀（黄酮苷，苷元）（黄酮苷，苷元）水水（水杂，水杂，M+）第50页，此课件共99页哦l原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出。l碱：常用碱：常用Ca(OH)2，或，或CaO水溶液。水溶液。l优点：可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使优点：可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含含COOH的果胶、粘液质、蛋白质

27、等杂质形成沉淀的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形成沉淀而除去。而除去。l注意：碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；酸化时，酸注意：碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；酸化时，酸性不宜过强，性不宜过强，pH34即可，以免形成盐而溶解；邻二即可，以免形成盐而溶解；邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基容易被氧化，酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基容易被氧化，加硼砂保护加硼砂保护 第51页，此课件共99页哦第52页，此课件共99页哦（三）炭粉吸附法（三）炭粉吸附法适于适于苷苷类的精制类的精制（四）（四）树脂吸附提取法树脂吸附提取法适于适于苷苷类的精制类的精制第53页，此课件共99页哦 二、分二、分离离分离黄

28、酮的依据分离黄酮的依据：（1 1）极性大小不同）极性大小不同吸附吸附层析层析（2 2）分配比不同）分配比不同分配分配层析层析（3 3）酸性不同）酸性不同pH梯度萃取法梯度萃取法（4）MW大小不同大小不同葡聚糖凝胶分子筛葡聚糖凝胶分子筛 或膜技或膜技术术 （5 5）官能团）官能团络合，沉淀等络合，沉淀等 第54页，此课件共99页哦（一）柱色谱法（一）柱色谱法1硅胶柱色谱硅胶柱色谱 适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类 常用的分离方法有常用的分离方法有柱层析法柱层析法、萃取法萃取法、铅盐法铅盐法、H

29、PLCHPLC法、法、薄层层析法薄层层析法等。等。常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。第55页，此课件共99页哦（1）分离对象）分离对象：酚、醌、硝基化合物酚、醌、硝基化合物2 2聚酰胺柱色谱聚酰胺柱色谱（2 2）原）原 理：理：氢键吸附氢键吸附 第56页，此课件共99页哦（3）影响因素：）影响因素：黄酮类分子中黄酮类分子中羟基的数目羟基的数目与与位置位置 溶剂与黄酮类溶剂与黄酮类溶剂与聚酰胺溶剂与聚酰胺之间形成之间形成氢键缔合氢键缔合能力的大小能力的大小（4）洗脱规律）洗脱

30、规律（先（先后顺序）后顺序）叁糖苷叁糖苷双糖苷双糖苷单糖苷单糖苷苷元苷元 苷元相同：苷元相同：第57页，此课件共99页哦-OH位置位置：C=O 邻位邻位-OH黄酮黄酮C=O对位对位（或间位）间位）-OH黄酮黄酮 -OH多少多少：酚羟基少羟基多酚羟基少羟基多第58页，此课件共99页哦 黄酮类型：黄酮类型：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇第59页，此课件共99页哦 芳香程度：芳香程度：芳香程度高，共轭双键多吸附力芳香程度高，共轭双键多吸附力 芳香程度高，共轭双键少芳香程度高，共轭双键少 二氢黄酮查耳酮二氢黄酮查耳酮 溶剂影响：溶剂影响：第60页，此课件共99页哦聚酰胺的聚酰胺的

31、双重色谱性双重色谱性以以含水含水移动相（如甲醇一水）作洗脱剂，移动相（如甲醇一水）作洗脱剂，苷苷比比苷元苷元先洗下来。先洗下来。以有机溶剂有机溶剂作洗脱剂作洗脱剂（如氯仿一甲醇）（如氯仿一甲醇）苷元苷元比比苷苷先洗脱下来。先洗脱下来。第61页，此课件共99页哦极性移动相（极性移动相（含水含水 溶剂系统）洗脱时溶剂系统）洗脱时有有机机溶溶剂剂（如如氯氯仿仿一甲醇）洗脱时一甲醇）洗脱时聚酰胺聚酰胺非极性非极性固定相固定相极性极性固定相固定相色谱行为色谱行为类似类似反相分配色谱反相分配色谱正相分配色谱正相分配色谱苷极性苷元苷极性苷元苷元极性苷苷元极性苷苷苷先洗脱先洗脱苷元苷元易洗脱易洗脱第62页，此

32、课件共99页哦习题：下列黄酮化合物，习题：下列黄酮化合物，（1 1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2 2）用硅胶柱色谱分离，氯仿）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序顺序第63页，此课件共99页哦3 3葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱 分离黄酮类化合物的机理：分离黄酮类化合物的机理：双重性双重性分离黄酮苷元分离黄酮苷元靠吸附作用靠吸附作用羟基少，极性小，吸附力弱，先被洗脱。羟基少，极性小，吸附力弱，先被洗脱。分离黄酮苷时分离黄酮苷时分子筛性质起主导作用分子筛性质起主导作用糖数量多，分子量大，先洗脱下来。糖数量

33、多，分子量大，先洗脱下来。常用型号：常用型号：Sephadex-G，Sephadex-LH20第64页，此课件共99页哦（二）梯度（二）梯度pH萃取法萃取法酸性不同的酸性不同的黄酮苷元黄酮苷元的分离的分离酸性：酸性：7,4-OH7-或或 4-OH一般一般Ar-OH5-OH5%NaHCO3 35%Na2 2CO2 20.2%NaOH4%NaOH溶解溶解的碱水的碱水第65页，此课件共99页哦（三）根据分子中某些特定官能团进（三）根据分子中某些特定官能团进行分离行分离1.H3 3BO3 3络合反应（邻二酚羟基）络合反应（邻二酚羟基）2.Pb(Ac)2 2沉淀反应（邻二酚羟基）沉淀反应（邻二酚羟基）3

34、.碱性醋酸铅（不具邻二酚羟基黄酮）碱性醋酸铅（不具邻二酚羟基黄酮）注意脱铅注意脱铅第66页，此课件共99页哦A R1=R2=H B R1=H,R2=Rha C R1=Glc,R2=HD R1=Glc,R2=Rhal(1)试比较四种化合物的酸性，l(2)比较极性大小l(3)比较它们的Rf值大小顺序：l 硅胶TLC l 聚酰胺TLC习习题题：从从某某植植物物中中分分离离出出四四种种化化合合物物，其其结结构如下：构如下：第67页，此课件共99页哦第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定测定一般步骤：测定一般步骤：（1）化学反应化学反应（2）PC、TLC（3）UV光谱光谱

35、（4）1H-NMR（5）MS（6）13C-NMR第68页，此课件共99页哦一一 化学反应化学反应确定化合物的类别确定化合物的类别 二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用确定黄酮的种类与数量确定黄酮的种类与数量（一）纸色谱（一）纸色谱（PC）分离黄酮类化合物及其苷的混合物分离黄酮类化合物及其苷的混合物 1原理原理分配色谱分配色谱第69页，此课件共99页哦 2溶剂选择溶剂选择：黄酮苷元黄酮苷元酸性酸性醇醇溶剂溶剂花色苷元花色苷元酸性酸性水溶剂水溶剂 HCl或或HOAc苷类苷类双向双向展开展开第一向展开剂：采用第一向展开剂：采用醇性醇性溶剂溶剂第二向展开剂：采用水或水溶液第二向

36、展开剂：采用水或水溶液如：如：n-BuOH-HOAc-H2O(4:1:5上层）上层）如：如：2%6%HOAc等等第70页，此课件共99页哦 3在不同展开剂中，苷、苷元的在不同展开剂中，苷、苷元的Rf值不同值不同醇性醇性溶剂：溶剂：Rf 苷元苷元 单糖苷单糖苷 双糖苷双糖苷 水溶剂水溶剂：Rf 三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷苷元苷元 第71页，此课件共99页哦(二二)硅胶薄层色谱：硅胶薄层色谱：(不用不用Al2O3）分离与鉴定分离与鉴定弱极性弱极性黄酮类黄酮类（三）聚酰胺薄层色谱（三）聚酰胺薄层色谱分离含游离分离含游离酚羟基酚羟基的黄酮及其苷类的黄酮及其苷类第72页，此课件共99页哦三、紫外及可见光

37、谱在黄酮类鉴定中三、紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中的应用的应用紫外及可见光谱一般程序紫外及可见光谱一般程序：1测定样品在测定样品在甲醇甲醇中的中的UV光谱光谱2测定测定甲醇甲醇+诊断试剂后诊断试剂后的的UV光谱光谱3苷类苷类水解，或甲基化后水解，或甲基化后水解水解 测苷元或衍生物的测苷元或衍生物的UV光谱光谱 第73页，此课件共99页哦（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的的UV光谱特征光谱特征 1两个谱带两个谱带、与结构的关系与结构的关系 苯甲酰基苯甲酰基 峰带峰带（220280nm）桂皮酰基桂皮酰基 峰带峰带（300400nm）第74页，此课件共99页哦 2各种类型黄

38、酮的各种类型黄酮的UV光谱特点光谱特点（1）黄酮及黄酮醇类）黄酮及黄酮醇类 黄酮黄酮 黄酮黄酮 3-OR黄酮醇黄酮醇 带带(nm)(nm)带带(nm)(nm)220-280304-350328-357352-385第75页，此课件共99页哦木犀草素木犀草素(黄酮类黄酮类)槲皮素槲皮素(黄酮醇类黄酮醇类)（A）黄酮及黄酮醇类）黄酮及黄酮醇类UV光谱（甲醇）光谱（甲醇）第76页，此课件共99页哦(二)加入诊断试剂后引起的位移及其加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义在结构测定中的意义诊断试剂：诊断试剂：因黄酮中具有酚羟基、羰基，加入因黄酮中具有酚羟基、羰基，加入某些试剂，使其化学结构变化，

39、吸收峰某些试剂，使其化学结构变化，吸收峰位改变，这些试剂称为位改变，这些试剂称为诊断试剂诊断试剂。第77页，此课件共99页哦测定顺序测定顺序1样品样品/CH3OH测定黄酮类型测定黄酮类型2加诊断试剂加诊断试剂CH3OH+NaOCH3确定确定4-OH，3-OHCH3OH+NaOAC确定确定7-OHt t,对碱敏感的结构对碱敏感的结构 CH3OH+NaOAC+H3BO3邻二邻二OHAlCl3/HCl与与CH3OHC3-OH、C5-OHAlCl3-AlCl3/HCl邻二邻二OH3苷类苷类水解后测定苷元的水解后测定苷元的UV光谱，与苷比较光谱，与苷比较第78页，此课件共99页哦四、氢核磁共振在黄酮类结

40、构分析四、氢核磁共振在黄酮类结构分析中的应用中的应用（一）测试溶剂的选择及样品处理（一）测试溶剂的选择及样品处理1.氘代氯仿氘代氯仿 适合适合苷元、苷苷元、苷OCH32.氘代二甲基亚砜氘代二甲基亚砜（DMSO-d6）苷苷3.四氯化碳四氯化碳三甲基硅醚化的三甲基硅醚化的苷，苷元苷，苷元第79页，此课件共99页哦Ar-OH吡啶吡啶无水甲醇无水甲醇苷元中苷元中使苷，苷元使苷，苷元极性小极性小溶于溶于CCl4优点：优点：可溶于可溶于CCl4中，中，bp低低无干扰信号无干扰信号测试后用甲醇水解，回收样品等测试后用甲醇水解，回收样品等第80页，此课件共99页哦（二）影响黄酮类化合物氢质子化学（二）影响黄酮

41、类化合物氢质子化学 位移的因素位移的因素例：例：芹菜中的芹菜素芹菜中的芹菜素芹菜素芹菜素第81页，此课件共99页哦1.电效应电效应（1）诱导效应）诱导效应（C=O)A环环C5,C7 B环环 2,6,4+A环环C6,C8 B环环 3,5-B环环 H2,6 H3,5第82页，此课件共99页哦（2）共轭效应）共轭效应-OH的影响的影响B环 H2,6 H3,5A环环 H8 H6上述诱导效应与上述诱导效应与共轭效应结果使得：共轭效应结果使得：H2,6 H3,5H8 H6第83页，此课件共99页哦B环：苯丙酰系统，环：苯丙酰系统，诱导效应诱导效应 起主导作用起主导作用A环：苯甲酰系统，环：苯甲酰系统，共轭

42、效应共轭效应起主导作用起主导作用苯甲酰与苯丙酰共轭体系的比较苯甲酰与苯丙酰共轭体系的比较B环环HA环环H第84页，此课件共99页哦2.磁效应磁效应 C3H,C5H:受C=O的负屏蔽效应影响的负屏蔽效应影响C3H：磁效应与电效应不一致磁效应与电效应不一致C5H：磁效应与电效应一致磁效应与电效应一致 H5 H3第85页，此课件共99页哦（三）黄酮类化合物（三）黄酮类化合物H的的和和J值规律值规律1A环质子环质子（1）5，7-二羟基取代二羟基取代H-8 6.306.50（1H d J=2.5Hz）H-6 6.006.20（1H d J=2.5Hz）第86页，此课件共99页哦（2）7-羟基取代羟基取代

43、H-5 7.908.20 （1H d J=9.0Hz）H-6 6.707.10 （1H dd J=2.5Hz J=9.0Hz）H-8 6.707.00 （1H d J=2.5Hz）第87页，此课件共99页哦B环质子环质子（1）4-O O-R R取代取代H-2，H-6 7.708.10 （2H d J=8.5Hz）H-3，H-5 6.507.10 （2H d J=8.5Hz）第88页，此课件共99页哦（2）3，4-O-R-O-R取代取代H-5 6.707.10 （1 1H d J=8.5Hz）H-2 7.207.90 （1 1H d J=2.5Hz）H-6 7.207.90 （1 1H dd J

44、=2.5Hz J=8.5Hz）第89页，此课件共99页哦C环质子环质子黄酮类黄酮类 H-3 6.30（s）第90页，此课件共99页哦（四）糖上的质子（四）糖上的质子H-1 4.006.00（d）-D-glcH1H2 60o J H1H2=23Hz-D-glc-D-glc H1H2 180o J H1H2=8Hz第91页，此课件共99页哦5-OCH3上的质子上的质子 3.504.10 6-COCH3上的质子上的质子脂肪族脂肪族 l.652.10芳香族芳香族 2.302.50 H-2”H-6”4.006.00（m）第92页，此课件共99页哦四、质谱在黄酮类结构分析中的应用四、质谱在黄酮类结构分析中

45、的应用多数苷元：多数苷元：峰较强，为基峰，无须作成衍生物峰较强，为基峰，无须作成衍生物EI-MS中中多数苷：多数苷：极性强，难气化，多作成甲基化或极性强，难气化，多作成甲基化或三甲基硅三甲基硅醚化衍生物，而获得醚化衍生物，而获得 或不作成衍生物，也可用或不作成衍生物，也可用FD-MSFD-MS，FAB-MSFAB-MS等质谱技术，获得非常强的等质谱技术，获得非常强的第93页，此课件共99页哦黄酮类化合物苷元的黄酮类化合物苷元的EI-MS2个裂解途径：个裂解途径：途径途径-+222120102第94页，此课件共99页哦途径途径-222+105偶数质量，偶数质量，偶数电子偶数电子78第95页，此课件共99页哦1.黄酮类基本裂解途径黄酮类基本裂解途径分子离子峰分子离子峰很强很强M+M28+途径途径-（RDA裂解）中裂解）中A、B+较强较强第96页，此课件共99页哦黄黄酮酮类类基基本本裂裂解解途途径径第97页，此课件共99页哦第98页，此课件共99页哦感感谢谢大大家家观观看看第99页，此课件共99页哦