白血病淋巴瘤免疫分型.pptx

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1、1流式细胞术的基本概念流式细胞术的基本概念=流式细胞术（Flow Cytometry,简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选=研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等=研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量第1页/共34页2散射光信号和荧光信号散射光信号和荧光信号=前向角散射光（FSC,Forward Scatter）入射激光的前向散射光信号细胞相对大小及其表面积=侧向角散射光（SSC,Side Scatter）入射激光90角的散射光信号细胞粒度及细胞内相对复杂性=荧光素与特异抗体结合，荧

2、光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。第2页/共34页3CD45/SS示意图示意图第3页/共34页4抗原分布表面,胞浆,核内是共同检测还是分别检测?表面表面胞浆胞浆核内核内CD3,CD4,CD8,tetramer cytokinesDNACD3,4,8,tetramer+CytokinesCD3,4,8,tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8,tetramer+Cytokines+DNA第4页/共34页5设门08-03307第5页/共34页6设门全部 细胞门内细胞08-03307第6页/共34页7第7页/共34页8血液肿瘤分类进程第8页/共34页9白血病免疫分

3、型的理论基础白血病免疫分型的理论基础 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。第9页/共34页10细胞类型鉴定Borowitz et al(1993)AJCP 100:534-40.Steltzer et al(1993)Ann NY Acad Sci 667:265-280第10页/共34页11

4、CD45/SS示意图示意图正常骨髓细胞 血液肿瘤细胞老化粒细胞、噬酸细胞 早幼成熟粒细胞 M3、CML单核细胞 M4、M5 LGL淋巴细胞 CLL、ALL、CLD正常前体细胞 M0、M1、M2、嗜碱性粒细胞 M4、M5、ALL成熟红细胞、血小板 M6、M7、MM细胞碎片 Pre-B-ALL 非血液来源细胞第11页/共34页12B淋巴细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Medicine第12页/共34页13T淋巴细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Medic

5、ine第13页/共34页14粒细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Medicine第14页/共34页15单核细胞分化与抗原表达关系图Wood and Borowitz(2006)Henrys Laboratory Medicine第15页/共34页16非肿瘤T淋巴细胞表型第16页/共34页17非肿瘤B淋巴细胞表型第17页/共34页18非肿瘤粒细胞、单核细胞表型第18页/共34页19非肿瘤粒细胞、单核细胞表型第19页/共34页20白血病免疫分型白血病免疫分型根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单

6、系、红系、巨核系等。根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B第20页/共34页21初治急白分型Acute Leukemia Blasts Present 20%Myeloid LineageCD13+and/orCD117+and/orCD33+CD7+and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid,no or minimal maturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-,CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-,CD1

7、4-CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic&Monocytic红系和巨核系的鉴定需要另外增加二线抗体。如:CD71、GPA、CD41、CD61第21页/共34页22AML-M3AML-M3第22页/共34页23AML-M4第23页/共34页24AML-M4AML-M4第24页/共34页25初治急淋分型Acute Leukemia Blasts Present 20%CD7+and/or CD2+CD19+T-LineageB-LineageCommonThymocyteMatureThymocyteCD2+CD5+Dual CD4+/CD8+sCD

8、3-CD2+CD5+CD4+or CD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8-TdT+CD10-clg-sig-Pre-BCD10+cig+TdT+sig-Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyteEarly B-Precursor第25页/共34页26B-ALL第26页/共34页27P Pr re e-B BA AL LL L第27页/共34页28 白血病免疫分型的价值n确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和 ALL的分化阶段。n鉴定AML的特征。n对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞

9、类型。n诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、M0等。第28页/共34页29多发性骨髓瘤（多发性骨髓瘤（MM）多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正常浆细胞为CD38+/CD45dim/-，使用 CD38/CD45双标记检测外周血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常使用CD38和CD45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤细胞进行分 析。另 外，正 常 浆 细 胞 的 表 面 标 记 为CD19+/CD56-，而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19-/CD56+。CD138目前认为是浆细胞最特异的指标。这样，使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性骨髓瘤的诊断

10、和治疗评估具有重要意义。第29页/共34页30MM第30页/共34页31流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势1、纤维化、硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析。2、细胞太多聚集或成团也可能没有足够的分析细胞。3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。4、组织结构关系、形态关系丢失。5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。第31页/共34页32流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势6、没有异常免疫表型的T细胞淋巴瘤也可能很难检测。7、异常的T细胞免疫表型不一定提示T细胞肿瘤，也可能是感染引起的单核细胞增多症、反应性皮肤病、炎症性疾病。8、取材不好或样品保存不当，可能导致假阴性的结果。9、HL的肿瘤细胞水平低，所以免疫表型检测或诊断HL不可靠。10、治疗或复发可能引起肿瘤细胞表面抗原改变。第32页/共34页33谢谢谢谢!第33页/共34页34感谢您的观看！第34页/共34页