微生物实验讲稿幻灯片.ppt

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1、微生物实验讲稿第1页，共58页，编辑于2022年，星期六实验一、实验一、培养基的制备技术培养基的制备技术 第2页，共58页，编辑于2022年，星期六实验目的实验目的 1.掌握培养基制备的基本过程。掌握培养基制备的基本过程。2.熟悉常用培养基的种类及用途。熟悉常用培养基的种类及用途。第3页，共58页，编辑于2022年，星期六器材和试剂器材和试剂1.试剂试剂 营养琼脂干粉、半固体培养基干粉营养琼脂干粉、半固体培养基干粉营养肉汤干粉营养肉汤干粉1mol/L1mol/L氢氧化钠、氢氧化钠、1mol/L1mol/L盐酸。盐酸。2.器材器材 三角烧瓶、量筒、吸管、蒸馏水、三角烧瓶、量筒、吸管、蒸馏水、精密

2、精密PHPH试纸、试管（带塞）、天平试纸、试管（带塞）、天平高压灭菌器、酒精灯、无菌平皿等。高压灭菌器、酒精灯、无菌平皿等。第4页，共58页，编辑于2022年，星期六步骤和方法步骤和方法1.1.培养基制备的基本过程培养基制备的基本过程：1).1).调配成分：调配成分：根据配制培养基的量，量取一定量的蒸馏水，先倒部分根据配制培养基的量，量取一定量的蒸馏水，先倒部分水于烧杯或三角烧瓶中水于烧杯或三角烧瓶中,再按培养基说明称取各成分置于容器再按培养基说明称取各成分置于容器内，充分混匀，最后补足水分内，充分混匀，最后补足水分2).2).溶解溶解电炉加热电炉加热3).3).校正校正PHPH：7.27.6

3、7.27.64).4).4).4).澄清过滤澄清过滤澄清过滤澄清过滤5).5).分装分装 斜面和半固体：斜面和半固体：1/41/41/31/3试管量试管量 高层：高层：2/32/3试管量试管量 琼脂平板：琼脂平板：3mm3mm4mm4mm厚度厚度第5页，共58页，编辑于2022年，星期六6).6).灭菌灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌耐热，耐热，121121,20,20分钟分钟 流通蒸汽灭菌流通蒸汽灭菌不耐热不耐热 血清凝固器灭菌血清凝固器灭菌富含蛋白质富含蛋白质 过滤除菌过滤除菌不耐热的营养丰富的液体不耐热的营养丰富的液体 7).7).质量检验：质量检验：无菌试验和效果试验无菌试验和效果试验8

4、).8).保存：保存：普通冰箱冷藏普通冰箱冷藏第6页，共58页，编辑于2022年，星期六2.2.常用培养基常用培养基 1 1）营养肉汤：）营养肉汤：适用于营养要求一般的细菌。适用于营养要求一般的细菌。2 2）营养琼脂（普通琼脂）：可制作）营养琼脂（普通琼脂）：可制作平板平板和和斜面斜面。用途：作无糖基础用。适用于营养要求一般的用途：作无糖基础用。适用于营养要求一般的 细菌。细菌。3 3）半固体培养基：用途：观察动力和保存菌种。）半固体培养基：用途：观察动力和保存菌种。4 4）血琼脂培养基：营养琼脂中加入无菌脱纤维）血琼脂培养基：营养琼脂中加入无菌脱纤维 血液血液5%5%8%8%，制成平板或斜面

5、。，制成平板或斜面。用途：用于营养要求较高的细菌培养。用途：用于营养要求较高的细菌培养。5)5)巧克力琼脂平板：巧克力琼脂平板：用途：主要用于苛养菌培养。用途：主要用于苛养菌培养。6 6）麦康凯琼脂平板）麦康凯琼脂平板第7页，共58页，编辑于2022年，星期六 酒精灯火焰第8页，共58页，编辑于2022年，星期六 平板倾注方法第9页，共58页，编辑于2022年，星期六3.3.注意事项注意事项 1)1)培养基的调配与溶解培养基的调配与溶解 2)2)水的加入过程水的加入过程 3)3)容器的选择容器的选择 4)4)培养基的浇注培养基的浇注 平皿的打开程度平皿的打开程度 培养基的浇注温度及环境培养基的

6、浇注温度及环境第10页，共58页，编辑于2022年，星期六 实验内容实验内容 1.1.培养基制备的基本过程培养基制备的基本过程：1).1).调配成分：调配成分：根据需配制培养基的量，量取一定量的蒸馏水，先倒部分水根据需配制培养基的量，量取一定量的蒸馏水，先倒部分水于烧杯或三角烧瓶中，再按培养基处方量称取各成分置于容器内，于烧杯或三角烧瓶中，再按培养基处方量称取各成分置于容器内，充分混匀，最后补足水分。充分混匀，最后补足水分。2).2).溶解溶解 电炉加热电炉加热 3).3).校正校正PHPH：7.27.67.27.64 4 4 4）分装分装营养肉汤：每管营养肉汤：每管3ml 3ml 分装后高压

7、灭菌分装后高压灭菌半固体：试管高度的半固体：试管高度的1/41/41/31/3分装后高压灭菌取出直立分装后高压灭菌取出直立斜面：斜面：试管高度的试管高度的1/41/41/31/3分装后高压灭菌，取出后摆分装后高压灭菌，取出后摆 成斜面成斜面琼脂平板：厚琼脂平板：厚3mm3mm4mm4mm高压灭菌后冷至高压灭菌后冷至5050倾注平板倾注平板5).5).灭菌灭菌：高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌1212012120分钟。分钟。2.2.配制说明：配制说明：培养基以一个大组为单位进行配制，每人保证一份，两种固体培培养基以一个大组为单位进行配制，每人保证一份，两种固体培养基一块配制，先分装斜面，剩余高压灭菌养基

8、一块配制，先分装斜面，剩余高压灭菌后倾注平板。后倾注平板。第11页，共58页，编辑于2022年，星期六实验二、实验二、细菌培养与接种技术细菌培养与接种技术 第12页，共58页，编辑于2022年，星期六 实验目的实验目的1.1.掌握常用培养基的接种方法。掌握常用培养基的接种方法。2.2.掌握无菌操作的要领。掌握无菌操作的要领。3.3.熟悉接种工具的用途、使用方熟悉接种工具的用途、使用方 法和对接种环境的要求。法和对接种环境的要求。第13页，共58页，编辑于2022年，星期六 器材和试剂器材和试剂1.1.菌种：菌种：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌 大肠埃希菌大肠埃希菌 铜绿

9、假单胞菌铜绿假单胞菌 乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌2.2.培养基：培养基：营养肉汤、半固体培养基、琼脂平板、琼脂斜面营养肉汤、半固体培养基、琼脂平板、琼脂斜面 血琼脂平板、麦康凯琼脂平板。血琼脂平板、麦康凯琼脂平板。3.3.其它：其它：接种环、接种针、酒精灯等接种环、接种针、酒精灯等。第14页，共58页，编辑于2022年，星期六 步骤和方法步骤和方法1.1.接种工具接种工具2.2.接种环境接种环境3.3.接种方法接种方法接种前首先检查培养基的外观，其次接种前首先检查培养基的外观，其次 在培养基上进行在培养基上进行标识标识。倾注法倾注法倾注法倾注法 液体接种法液体接

10、种法液体接种法液体接种法 半固体接种法半固体接种法半固体接种法半固体接种法 斜面接种法斜面接种法斜面接种法斜面接种法 平板接种法平板接种法平板接种法平板接种法 a a 连续划线法连续划线法 b b 分区划线法分区划线法 c c 棋盘格划线法棋盘格划线法 d d 涂抹法涂抹法 e e 自动接种仪接种法自动接种仪接种法 第15页，共58页，编辑于2022年，星期六4.4.细菌培养的方法细菌培养的方法 需氧培养法需氧培养法 厌氧培养法厌氧培养法 二氧化碳培养法二氧化碳培养法 微需氧培养法微需氧培养法5.5.培养：将接种好的培养基置于培养：将接种好的培养基置于3535培养箱中孵培养箱中孵 育育1818

11、24h24h，取出观察并进一步检验。，取出观察并进一步检验。第16页，共58页，编辑于2022年，星期六接种环图片 接种环（针）示意图接种环（针）示意图铂丝铂丝镍丝镍丝第17页，共58页，编辑于2022年，星期六 酒精灯使用方法酒精灯使用方法第18页，共58页，编辑于2022年，星期六 电子灭菌器电子灭菌器第19页，共58页，编辑于2022年，星期六分区划线分离法及培养后菌落分布示意图分区划线分离法及培养后菌落分布示意图第20页，共58页，编辑于2022年，星期六 穿刺接种方法 第21页，共58页，编辑于2022年，星期六 斜面接种方法第22页，共58页，编辑于2022年，星期六 液体培养基接

12、种方法第23页，共58页，编辑于2022年，星期六第24页，共58页，编辑于2022年，星期六第25页，共58页，编辑于2022年，星期六 实验内容实验内容1.1.菌种：菌种：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌 大肠埃希菌大肠埃希菌 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 乙型溶血性链球菌（乙型溶血性链球菌（A A群链球菌）群链球菌）枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌2.2.接种方法接种方法 血平板血平板三分区划线，接种三分区划线，接种金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 和和大肠埃希菌。大肠埃希菌。营养琼脂平板营养琼脂平板三分区划线，接种三分区划线，接种金葡金葡和和铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌。麦康凯平板

13、麦康凯平板三分区划线，接种三分区划线，接种大肠、铜绿、金葡和大肠、铜绿、金葡和A链。链。斜面斜面连续划线（密而不重），接种连续划线（密而不重），接种铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌。半固体半固体穿刺（需一次进行），接种穿刺（需一次进行），接种大肠埃希菌和肺克。大肠埃希菌和肺克。液体培养基液体培养基接种接种金葡金葡、A A群链球菌群链球菌和和枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌。3.3.培养方法：需氧培养培养方法：需氧培养4.4.达到目的：掌握各种接种方法及无菌操作要领，达到目的：掌握各种接种方法及无菌操作要领，树立和牢记无菌操作的意识树立和牢记无菌操作的意识。第26页，共58页，编辑于2022年，星期六实验三

14、、细菌生长现象观察与实验三、细菌生长现象观察与 革兰染色革兰染色 第27页，共58页，编辑于2022年，星期六 实验目的实验目的1 1、掌握观察及描述细菌菌落的方法。、掌握观察及描述细菌菌落的方法。2 2、掌握细菌涂片的制作过程及革兰染色的原理、掌握细菌涂片的制作过程及革兰染色的原理 方法和细菌形态观察。方法和细菌形态观察。3 3、熟悉细菌在各种培养基上的生长现象及意义。、熟悉细菌在各种培养基上的生长现象及意义。第28页，共58页，编辑于2022年，星期六 器材和试剂器材和试剂1.1.菌种：菌种：同实验二同实验二 2.2.培养基培养基：同实验二同实验二 2.2.试剂：试剂：革兰染液、无菌生理盐

15、水。革兰染液、无菌生理盐水。4.4.其它：其它：载玻片、显微镜、酒精灯等载玻片、显微镜、酒精灯等第29页，共58页，编辑于2022年，星期六 步骤和方法步骤和方法1 1、细菌生长现象的观察、细菌生长现象的观察 1 1）固体培养基）固体培养基 a a 平板培养基：平板培养基：菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度 溶血现象、色素、特殊气味等。溶血现象、色素、特殊气味等。b b 斜面培养基：观察菌苔特征。斜面培养基：观察菌苔特征。2)2)液体培养基：液体培养基：混浊生长、沉淀生长混浊生长、沉淀生长 和表面生长。和表面生长。3)3)半固体培养基：半固体培

16、养基：观察细菌是否有动力。观察细菌是否有动力。第30页，共58页，编辑于2022年，星期六2 2、细菌涂片的制作过程、细菌涂片的制作过程 涂片涂片干燥干燥固定固定3 3、革兰染色的原理、革兰染色的原理 1 1）细胞壁结构学说）细胞壁结构学说 2 2）细菌等电点学说）细菌等电点学说 3 3）化学学说）化学学说核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐4 4、革兰染色的方法、革兰染色的方法 初染初染媒染媒染脱色脱色复染复染 一紫二碘三酒精一紫二碘三酒精 第四复红皆水冲第四复红皆水冲 时间要看说明书时间要看说明书 阴性菌红阳性紫阴性菌红阳性紫5 5、染色结果的观察：要求绘图。、染色结果的观察：要求绘图。6 6、影响染

17、色结果的因素、影响染色结果的因素 1)1)操作因素操作因素 2)2)染液因素染液因素 3)3)细菌因素细菌因素第31页，共58页，编辑于2022年，星期六 菌落形态示意图第32页，共58页，编辑于2022年，星期六第33页，共58页，编辑于2022年，星期六第34页，共58页，编辑于2022年，星期六第35页，共58页，编辑于2022年，星期六第36页，共58页，编辑于2022年，星期六 沙雷菌色素第37页，共58页，编辑于2022年，星期六 麦康凯上发酵乳糖第38页，共58页，编辑于2022年，星期六 麦康凯上不发酵乳糖第39页，共58页，编辑于2022年，星期六第40页，共58页，编辑于2

18、022年，星期六第41页，共58页，编辑于2022年，星期六第42页，共58页，编辑于2022年，星期六第43页，共58页，编辑于2022年，星期六第44页，共58页，编辑于2022年，星期六第45页，共58页，编辑于2022年，星期六第46页，共58页，编辑于2022年，星期六第47页，共58页，编辑于2022年，星期六细细菌菌动动力力结结果果第48页，共58页，编辑于2022年，星期六细菌在液体培养基中的生长特征细菌在液体培养基中的生长特征第49页，共58页，编辑于2022年，星期六 革兰染色过程革兰染色过程第50页，共58页，编辑于2022年，星期六 金葡和大肠埃希菌金葡和大肠埃希菌第5

19、1页，共58页，编辑于2022年，星期六 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌第52页，共58页，编辑于2022年，星期六 链球菌链球菌第53页，共58页，编辑于2022年，星期六 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌第54页，共58页，编辑于2022年，星期六 革兰阳性杆菌革兰阳性杆菌第55页，共58页，编辑于2022年，星期六 革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌第56页，共58页，编辑于2022年，星期六 大肠埃希菌（溃疡性结肠炎）大肠埃希菌（溃疡性结肠炎）第57页，共58页，编辑于2022年，星期六 实验内容实验内容1 1、细菌生长现象的观察细菌生长现象的观察 1 1）固体培养基）固体培养基 a a 平板培养基：

20、对平板培养基：对血平板血平板和和营养琼脂平板和麦康凯平板营养琼脂平板和麦康凯平板上的上的 菌落分别描述。菌落分别描述。菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度、溶血现象、菌落描述：颜色、大小、表面、边缘、湿润程度、溶血现象、特殊气味、色素等。特殊气味、色素等。b b 斜面培养基：观察菌苔特征并描述，得出结论。斜面培养基：观察菌苔特征并描述，得出结论。2)2)液体培养基：液体培养基：分别写出哪种细菌是混浊生长分别写出哪种细菌是混浊生长 沉淀生长或表面生长。沉淀生长或表面生长。3)3)半固体培养基：半固体培养基：观察细菌的动力并描述，得出结论。观察细菌的动力并描述，得出结论。3 3、细菌涂片的制作过程、细菌涂片的制作过程 涂片涂片干燥干燥固定固定4 4、革兰染色的方法、革兰染色的方法 初染初染媒染媒染脱色脱色复染复染 一紫二碘三酒精一紫二碘三酒精 第四复红皆水冲第四复红皆水冲 时间要看说明书时间要看说明书 阴性菌红阳性紫阴性菌红阳性紫5 5、染色结果的观察：要求绘图。、染色结果的观察：要求绘图。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌第58页，共58页，编辑于2022年，星期六