色谱定性和定量PPT课件.ppt
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1、关于色谱的定性与定关于色谱的定性与定量量第一张,PPT共五十一页,创作于2022年6月一、色谱的定性分析1 1、利用保留值定性、利用保留值定性 鉴别每个色谱峰鉴别每个色谱峰通过比较保留值通过比较保留值(通常是保留时间通常是保留时间)的方法,找的方法,找到各色谱峰所对应的组份到各色谱峰所对应的组份大多数情况下用比较保留时间来定性大多数情况下用比较保留时间来定性即所谓:即所谓:保留时间相同,可能是同样的组份保留时间相同,可能是同样的组份保留时间不同,肯定不是同样的组份保留时间不同,肯定不是同样的组份第二张,PPT共五十一页,创作于2022年6月(1 1)气相色谱中用保留值定性的方法)气相色谱中用保
2、留值定性的方法 利用已知物直接对照进行定性分析利用已知物直接对照进行定性分析 通常做法:把未知物和已知标准物在同一根色通常做法:把未知物和已知标准物在同一根色谱柱上,用相同的色谱操作条件进行分析,记录谱柱上,用相同的色谱操作条件进行分析,记录色谱图后利用保留时间进行比对色谱图后利用保留时间进行比对 为避免载气流速和温度变化引起保留时间的变为避免载气流速和温度变化引起保留时间的变化,可用化,可用相对保留值定性相对保留值定性或用或用已知物增加峰高已知物增加峰高法定法定性性第三张,PPT共五十一页,创作于2022年6月 已知物增加峰高法定性原理:已知物增加峰高法定性原理:已知物增加峰高法定性原理:已
3、知物增加峰高法定性原理:在得到未知样品的在得到未知样品的色谱图后,往未知样品中加入一定量的已知物质,色谱图后,往未知样品中加入一定量的已知物质,在同样色谱条件下的两色谱图对比图谱比较峰高。在同样色谱条件下的两色谱图对比图谱比较峰高。第四张,PPT共五十一页,创作于2022年6月利用相对保留值定性利用相对保留值定性 定义:相对保留值是组分定义:相对保留值是组分i i与基准物与基准物S S的调整保留值之比:的调整保留值之比:优点:优点:可以消除某些操作条件的影响,只要柱温、固定相不可以消除某些操作条件的影响,只要柱温、固定相不变,即使柱径、柱长、填充情况及流动相的流速有所变化,变,即使柱径、柱长、
4、填充情况及流动相的流速有所变化,相对保留值相对保留值仍然不变,它是色谱定性分析的重要参数仍然不变,它是色谱定性分析的重要参数第五张,PPT共五十一页,创作于2022年6月利用保留指数定性利用保留指数定性 表示物质在固定液上的保留行为,是目前使用最广泛表示物质在固定液上的保留行为,是目前使用最广泛并被国际上所公认的定性参数,它具有定性可靠,重现并被国际上所公认的定性参数,它具有定性可靠,重现性好,标准统一等优点。性好,标准统一等优点。可将储存在计算机中的标准保留指数转换成用户色谱可将储存在计算机中的标准保留指数转换成用户色谱条件下的保留指数和保留时间(条件下的保留指数和保留时间(tRtR)第六张
5、,PPT共五十一页,创作于2022年6月(A A)定义)定义(B B)保留指数的测定)保留指数的测定 保留指数的准确度和重现性都很好,用同一色谱保留指数的准确度和重现性都很好,用同一色谱柱测定误差小于柱测定误差小于1%1%,因此只要柱温和固定液相同,就可,因此只要柱温和固定液相同,就可以用文献上发表的保留指数定性。以用文献上发表的保留指数定性。第七张,PPT共五十一页,创作于2022年6月(2 2)液相色谱中用保留值定性的方法)液相色谱中用保留值定性的方法 保留值定性的主要方法保留值定性的主要方法 直接与已知标准物对照直接与已知标准物对照 某一未知峰和已知标准物的保留值完全相某一未知峰和已知标
6、准物的保留值完全相 同同可能是可能是 改变色谱柱或流动相,保留时间仍完全相同改变色谱柱或流动相,保留时间仍完全相同基本是基本是第八张,PPT共五十一页,创作于2022年6月利用文献的数据进行对比和定性分析利用文献的数据进行对比和定性分析 注意注意HPLCHPLC的柱填充技术的复杂性,定性受到限的柱填充技术的复杂性,定性受到限制制第九张,PPT共五十一页,创作于2022年6月 最简单的方法:最简单的方法:标标准添加法准添加法 前提:前提:要有标准物要有标准物 判断的标准:判断的标准:加入加入标准样后,使未知标准样后,使未知样色谱峰增高,改样色谱峰增高,改变色谱条件,未知变色谱条件,未知峰仍能增高
7、峰仍能增高第十张,PPT共五十一页,创作于2022年6月同时用其他方法同时用其他方法其他色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱)其他色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱)其他检测器其他检测器PDA,光谱图比较、谱库检索,光谱图比较、谱库检索 确认色谱峰的纯度确认色谱峰的纯度 -保证每个色谱峰下只有一个被测的组份保证每个色谱峰下只有一个被测的组份 -检查是否有共流出的物质(杂质)干扰检查是否有共流出的物质(杂质)干扰 色谱峰纯度确认的方法色谱峰纯度确认的方法 -用光电二极管矩阵检测器比较光谱图用光电二极管矩阵检测器比较光谱图 -峰纯度鉴定,四波长比例峰纯度鉴定,四波长比例MS,质谱图解析、谱库
8、检索,质谱图解析、谱库检索其他仪器方法其他仪器方法第十一张,PPT共五十一页,创作于2022年6月(3 3)平面色谱中用保留值定性的方法)平面色谱中用保留值定性的方法 定性方法:定性方法:比较未知组分和已知标准物质的比移值比较未知组分和已知标准物质的比移值影响比移值的因素:影响比移值的因素:固定相的性质、展开剂的性质、被分离固定相的性质、展开剂的性质、被分离组分的性质、展开时的温度等组分的性质、展开时的温度等注意事项注意事项 展开槽应密闭展开槽应密闭 沿分离轨迹固定相与流动相无梯度变化沿分离轨迹固定相与流动相无梯度变化 展开剂的前沿位置能正确测定展开剂的前沿位置能正确测定第十二张,PPT共五十
9、一页,创作于2022年6月2.2.联机定性联机定性 联机定性是指把色谱和质谱、红外、紫外联机定性是指把色谱和质谱、红外、紫外和核磁共振法联合使用和核磁共振法联合使用联用方式:联用方式:第一种:先第一种:先收集色谱分离后的组分,再用收集色谱分离后的组分,再用“四四大谱大谱”的方法进行定性分析的方法进行定性分析第二种:通过第二种:通过“接口接口”技术直接把色谱和技术直接把色谱和“四四大谱大谱”仪器连接起来,对每一被分离的组分仪器连接起来,对每一被分离的组分进行定性分析进行定性分析第十三张,PPT共五十一页,创作于2022年6月二、色谱定量分析二、色谱定量分析定量分析的具体内容定量分析的具体内容确定
10、样品的类型,主要成分确定样品的类型,主要成分/痕量成分痕量成分使分析条件的分离度(使分析条件的分离度(R)大于:)大于:1.5色谱峰的定性,峰一致性测定色谱峰的定性,峰一致性测定检测限及定量限:确定灵敏度及线性范围检测限及定量限:确定灵敏度及线性范围用标样建立标准曲线用标样建立标准曲线检查方法的准确度及精确度检查方法的准确度及精确度用标样定期检查方法用标样定期检查方法第十四张,PPT共五十一页,创作于2022年6月(一)定量分析基础(一)定量分析基础1.1.定量分析的基本公式定量分析的基本公式 定量分析的目的:定量分析的目的:要确定样品中某一组分的准确含量,是一种要确定样品中某一组分的准确含量
11、,是一种相对的定量方法相对的定量方法 定量分析的方法:定量分析的方法:在某些限定条件下,检测器响应值(色谱峰在某些限定条件下,检测器响应值(色谱峰的峰面积或峰高)的峰面积或峰高)-所测组分的数量或浓度成正所测组分的数量或浓度成正比比,第十五张,PPT共五十一页,创作于2022年6月即:即:式中:式中:组分组分i i的质量的质量 组分组分i i的浓度的浓度 组分的校正因子(与检测器的性质和被测组分组分的校正因子(与检测器的性质和被测组分的性质有关)的性质有关)组分组分i i的峰面积,的峰面积,组分组分i i的峰高的峰高第十六张,PPT共五十一页,创作于2022年6月2.2.2.2.峰面积的准确测
12、定峰面积的准确测定峰面积的准确测定峰面积的准确测定1 1)对称峰的峰高和峰面积)对称峰的峰高和峰面积的测定的测定第一法:峰高第一法:峰高半高半高 峰宽峰宽式中:式中:hh从峰顶到峰底线从峰顶到峰底线的垂直距离的垂直距离 W W h/2 h/2峰高峰高1/21/2处的处的峰宽峰宽第十七张,PPT共五十一页,创作于2022年6月第二法:三角形法第二法:三角形法式中:式中:BMBM三角形的高三角形的高 WiWi三角形三角形KMLKML的的半高宽,近似等于色半高宽,近似等于色谱峰高谱峰高0.6070.607处的峰宽处的峰宽第十八张,PPT共五十一页,创作于2022年6月2)2)不对称峰峰高和峰面积的测
13、不对称峰峰高和峰面积的测量量第一法:峰高第一法:峰高峰宽的平均值峰宽的平均值式中:式中:hh峰顶到峰底线的垂峰顶到峰底线的垂直距离直距离 (b b0 0.1515+b+b0.850.85)峰高峰高0.150.15处和峰高处和峰高0.850.85处的峰宽平均处的峰宽平均值值第十九张,PPT共五十一页,创作于2022年6月第二法:峰分割计算后加和法第二法:峰分割计算后加和法 A=A1+A2A=A1+A2 =h1b1+h2b2 =h1b1+h2b2第三法:大峰上的小峰峰面积的测量第三法:大峰上的小峰峰面积的测量第四法:基线漂移时色谱峰峰面积的测量第四法:基线漂移时色谱峰峰面积的测量第五法:重叠峰峰面
14、积的测量第五法:重叠峰峰面积的测量第二十张,PPT共五十一页,创作于2022年6月3.3.3.3.定量校正因子的测定定量校正因子的测定定量校正因子的测定定量校正因子的测定(1 1)绝对校正因子()绝对校正因子(f fi i)fifi的物理意义的物理意义:单位峰面积所代表的单位峰面积所代表的I I组分的量组分的量,是一个是一个与与i i组分的物理化学性质和检测器的性质有关的常组分的物理化学性质和检测器的性质有关的常数数定量校正定量校正 因子的计算公式为:因子的计算公式为:注意注意:峰高定量校正因子峰高定量校正因子f fi(h)i(h)受操作条件影响受操作条件影响较较大大 第二十一张,PPT共五十
15、一页,创作于2022年6月 绝绝对对校校正正因因子子fifi的的大大小小主主要要由由操操作作条条件件和和仪仪器器的的灵灵敏敏度度所所决决定定,既既不不容容易易准准确确测测量量,也也无无统统一一标标准准;当当操操作作条条件件波波动动时时,fifi也也发发生生变变化化。故故fifi无无法法直直接接应应用用,定定量量分分析析时时,一一般般采采用用相相对对校校正正因子。因子。第二十二张,PPT共五十一页,创作于2022年6月(2 2)相对校正因子(校正因子):)相对校正因子(校正因子):式中:式中:f-f-相对校正因子相对校正因子 ,简称为校正因子,简称为校正因子,无因次量无因次量 f fi i,f,
16、fs si i 物质、基准物质(物质、基准物质(s s)的质量)的质量(或浓度(或浓度)A Ai i(h(hi i),A),As s(h(hs s)-)-物质、基准物质的峰面积物质、基准物质的峰面积(或峰高)(或峰高)第二十三张,PPT共五十一页,创作于2022年6月 根据物质量的不同表示方法,校正因子分为根据物质量的不同表示方法,校正因子分为根据物质量的不同表示方法,校正因子分为根据物质量的不同表示方法,校正因子分为:质量校正因子质量校正因子(fm)(fm)定义:当物质量用质量来表示时的校正因子称为质定义:当物质量用质量来表示时的校正因子称为质量校正因子量校正因子 (fm),(fm),表示单
17、位峰面积所代表的组分质量,质表示单位峰面积所代表的组分质量,质量一般用量一般用 g g 或或 mg mg 表示表示.式中:式中:m mi i,m,ms s-被测物质、基准物质的质量被测物质、基准物质的质量 A Ai i,As-,As-被测物质、基准物质的峰面积被测物质、基准物质的峰面积 第二十四张,PPT共五十一页,创作于2022年6月摩尔校正因子摩尔校正因子(f(fM M)定义:物质的量用摩尔数表示,表示单位峰面积所定义:物质的量用摩尔数表示,表示单位峰面积所代表的组分摩尔数代表的组分摩尔数 式中:式中:M Mi i,M,Ms s-被测物质、基准物质的摩尔质量被测物质、基准物质的摩尔质量第二
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