紫外分光法B药学完整.pptx

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1、一、Lamber-Beer定律：描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系假设一束平行单色光通过一个吸光物体 第1页/共27页续前取物体中一极薄层第2页/共27页续前第3页/共27页讨论：1 1 1 1Lamber-BeerLamber-BeerLamber-BeerLamber-Beer定律的适用条件（前提）定律的适用条件（前提）定律的适用条件（前提）定律的适用条件（前提）入射光为单色光入射光为单色光入射光为单色光入射光为单色光 溶液是稀溶液溶液是稀溶液溶液是稀溶液溶液是稀溶液 2 2 2 2在同一波长下，各组分吸光度具有加和性在同一波长下，各组分吸光度具有加和性在同一波长下，各组

2、分吸光度具有加和性在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 应用：多组分测定应用：多组分测定应用：多组分测定应用：多组分测定第4页/共27页二、吸光系数和吸收光谱1吸光系数的物理意义：吸光物质在单位浓度、单位厚度的吸光度 讨论：1）E=f（组分性质，温度，溶剂，）当组分性质、温度和溶剂一定，E=f（）；2）不同物质在同一波长下E 不同；同一物质在不同波长下的E不同；3）E，物质对光吸收能力,定量测定灵敏度。第5页/共27页续前2吸光系数两种表示法：1）摩尔吸光系数摩尔吸光系数：在一定下，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度 2）百分含量吸光系数百分含量吸光系数/比吸光系数比吸光系数：在一定下，C

3、=1g/100ml，L=1cm时的吸光度 3）两者关系 第6页/共27页例如：氯霉素(M=323.15)的水溶液在278nm 处有吸收峰。设用纯品配制100mL含有2.00mg的溶液，以1.00cm厚的吸收池在278nm处测得透光率为24.3%,则E和为多少？第7页/共27页三、偏离Beer定律的因素（一）化学因素（二）光学因素第8页/共27页（一）化学因素Beer定律适用的另一个前提：稀溶液 溶液中的溶质因浓度改变而有离解、缔合、与溶剂间的作用等原因会使会使C C与与A A关系偏关系偏离定律。离定律。第9页/共27页（二）光学因素 1非单色光的影响：物质对不同波长的光具有不同的吸收能力 照射

4、物质的光经单色器分光后 并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 第10页/共27页续前第11页/共27页续前讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 结论：选择较纯单色光（，单色性）选max作为测定波长（E，S且成线性）（见图）第12页/共27页续前2杂散光的影响：杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度 范围内，与所选波长相距较远。杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度改变。3反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对T产生影响散射和反

5、射使T，A，吸收光谱变形。注：一般可用空白对比校正消除4非平行光的影响：使光程，A，吸收光谱变形。第13页/共27页四、透光率的测量误差T（来自仪器的噪（来自仪器的噪音）音）影响测定结果的相对误差两个因素：T 和T 第14页/共27页T影响因素：仪器噪音 第15页/共27页续前1）暗噪音与检测器和放大电路不确切性有关 与光讯号无关第16页/共27页续前2）讯号噪音与光讯号有关第17页/共27页第四节 紫外-可见分光光度计 一、主要部件1光源：2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 棱镜对不同波长的光折射率不同色散元件 分出光波长不等距 光栅衍射和干涉 分出光波长等距钨 灯 或 卤 钨 灯 可 见

6、 光 源 3501000nm氢灯或氘灯紫外光源 200360nm第18页/共27页第19页/共27页续前3吸收池：玻璃能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：将光信号转变为电信号的装置5记录装置：讯号处理和显示系统光电池光电管光电倍增管二极管阵列检测器第20页/共27页二、分光光度计类型和光学性能：（一）类型1单光束分光光度计：特点：特点：使用时来回拉动吸收池使用时来回拉动吸收池 移动误差移动误差对光源要求高对光源要求高比色池配对比色池配对类型：类型：721721型分光光度计型分光光度计722722型分光光度计型分

7、光光度计751751型分光光度计型分光光度计第21页/共27页续前2双光束分光光度计：特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差不受光源波动的影响；可以自动扫描吸收光谱 第22页/共27页消除光源波动的影响：第23页/共27页续前3双波长分光光度计 特点：利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差第24页/共27页（二）、光学性能：1、波长范围195nm-820nm2、波长准确度0.5nm3、波长重现性0.5nm4、透光率测量范围5、吸光度测量范围6、光度准确度（重铬酸钾法）7、光度重现性8、分辨率9、杂散光第25页/共27页（三）仪器校正1、波长的校正：稀土玻璃校正 汞灯校正 苯蒸气2、吸光度的校正：硫酸铜溶液 硫酸钴铵溶液 铬酸钾溶液3、吸收池的校正：第26页/共27页感谢您的观看！第27页/共27页