生殖毒性精选PPT.ppt

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1、关于生殖毒性第1页，讲稿共79张，创作于星期二1 1 雄性生殖毒性雄性生殖毒性v1.1 1.1 雄性生殖细胞的发生过程雄性生殖细胞的发生过程v1.2 1.2 化学物的雄性生殖毒性化学物的雄性生殖毒性v1.3 1.3 雄性生殖毒性的检测方法雄性生殖毒性的检测方法第2页，讲稿共79张，创作于星期二1.1 1.1 雄性生殖细胞的发生过程雄性生殖细胞的发生过程v1.1.11.1.1睾丸与附睾睾丸与附睾的解剖结构的解剖结构v1.1.2 1.1.2 人生精小管扫描电镜像人生精小管扫描电镜像 180180v1.1.3 1.1.3 精子的发生过程精子的发生过程v1.1.4 1.1.4 睾丸功能的内分泌调节睾丸

2、功能的内分泌调节 第3页，讲稿共79张，创作于星期二1.1.1 1.1.1 睾丸与附睾的解剖结构睾丸与附睾的解剖结构曲精小管曲精小管白膜白膜鞘膜脏层鞘膜脏层鞘膜腔输出小管输出小管直精小管直精小管附睾管附睾管睾丸网睾丸网输精管输精管第4页，讲稿共79张，创作于星期二1.1.2 1.1.2 人生精小管扫描电镜像人生精小管扫描电镜像 180180 血管血管间质细胞间质细胞 精原细胞精原细胞初级精母细胞初级精母细胞精子细胞精子细胞精子精子支持细胞支持细胞第5页，讲稿共79张，创作于星期二1.1.3 1.1.3 精子的发生过程精子的发生过程v精子的发生是精原细胞发育成为成熟精子的过程。精子的发生是精原细

3、胞发育成为成熟精子的过程。v精子的发生过程始于胎儿期的原始生殖细胞。出生后分化成曲细精子的发生过程始于胎儿期的原始生殖细胞。出生后分化成曲细精管内的精原细胞。精管内的精原细胞。v精原细胞在促性腺激素作用下依次进一步分裂成熟为初级精母细精原细胞在促性腺激素作用下依次进一步分裂成熟为初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子。胞、次级精母细胞、精细胞和精子。v精子由间质细胞包裹释放入直精细管，并移入附睾内进一步成熟，再经精子由间质细胞包裹释放入直精细管，并移入附睾内进一步成熟，再经输精管送入精囊贮存。输精管送入精囊贮存。v从精原细胞分化为成熟的精子，不同物种所需时间不同。人从精原细胞分化为成熟的精子

4、，不同物种所需时间不同。人6464天、小天、小鼠鼠3232天、家兔天、家兔4343天天WistarWistar大鼠大鼠53.253.2天、牛天、牛5454天。天。第6页，讲稿共79张，创作于星期二1.1.4 1.1.4 睾丸功能的内分泌调节睾丸功能的内分泌调节 v下丘脑的神经内分泌细胞分泌促性腺释放激素（下丘脑的神经内分泌细胞分泌促性腺释放激素（GnRHGnRH），可促进腺），可促进腺垂体远侧部的促性腺激素细胞分泌卵刺激素（垂体远侧部的促性腺激素细胞分泌卵刺激素（FSHFSH）和黄体生成）和黄体生成素（素（LHLH）。）。v雄性，雄性，FSHFSH促进支持细胞合成促进支持细胞合成ABPABP；

5、LHLH可刺激间质细胞合成和分泌雄可刺激间质细胞合成和分泌雄激素（睾丸酮）。激素（睾丸酮）。ABPABP可与雄激素结合，从而保持生精小管含有高可与雄激素结合，从而保持生精小管含有高浓度的雄激素，促进精子发生。浓度的雄激素，促进精子发生。v支持细胞分泌的抑制素和间质细胞分泌的雄激素，又可反馈抑支持细胞分泌的抑制素和间质细胞分泌的雄激素，又可反馈抑制下丘脑制下丘脑GnRHGnRH和腺垂体和腺垂体FSHFSH及及LHLH的分泌。的分泌。v正常情况下，各种激素的分泌量是相对恒定的，其中某一种激素分泌量正常情况下，各种激素的分泌量是相对恒定的，其中某一种激素分泌量升高或下降，或某一种激素的相应受体改变，

6、将影响精子发生，并致第升高或下降，或某一种激素的相应受体改变，将影响精子发生，并致第二性征改变及性功能障碍。二性征改变及性功能障碍。第7页，讲稿共79张，创作于星期二1.2 1.2 化学物的雄性生殖毒性化学物的雄性生殖毒性v睾丸的功能主要是生成精子和合成雄激素。并受神经内分睾丸的功能主要是生成精子和合成雄激素。并受神经内分泌调节。能影响睾丸、附睾、输精管、精囊腺的结构和功泌调节。能影响睾丸、附睾、输精管、精囊腺的结构和功能及内分泌调节功能的因素，均可致雄性生殖系统损害。能及内分泌调节功能的因素，均可致雄性生殖系统损害。v1.2.1 1.2.1 对睾丸生精细胞的影响对睾丸生精细胞的影响v1.2.

7、2 1.2.2 对内分泌功能的影响对内分泌功能的影响v1.2.3 1.2.3 对性功能和生殖功能的影响对性功能和生殖功能的影响第8页，讲稿共79张，创作于星期二1.2.1 1.2.1 对睾丸生精细胞的影响对睾丸生精细胞的影响v棉酚可损伤精子、精细胞和精母细胞；棉酚可损伤精子、精细胞和精母细胞；v二硫化碳可引起睾丸萎缩、精子产生障碍、生精细胞突变，二硫化碳可引起睾丸萎缩、精子产生障碍、生精细胞突变，睾丸萎缩、性欲下降；睾丸萎缩、性欲下降；v铅、镉、汞、过量锰可引起睾丸、附睾、精囊退行性变；铅、镉、汞、过量锰可引起睾丸、附睾、精囊退行性变；v许多农药也可引起精子生成减少、睾丸萎缩、精子畸形、性许多

8、农药也可引起精子生成减少、睾丸萎缩、精子畸形、性功能减退。功能减退。第9页，讲稿共79张，创作于星期二1.2.2 1.2.2 对内分泌功能的影响对内分泌功能的影响v铅可干扰下丘脑铅可干扰下丘脑-垂体垂体-睾丸轴的正常分泌功睾丸轴的正常分泌功能，使能，使FSHFSH、LHLH和睾酮分泌减少。和睾酮分泌减少。v二硫化碳可使睾酮分泌减少，而二硫化碳可使睾酮分泌减少，而FSHFSH和和LHLH分泌分泌增加。睾酮分泌减少与增加。睾酮分泌减少与FSHFSH和和LHLH分泌增加呈现分泌增加呈现相关性。相关性。第10页，讲稿共79张，创作于星期二1.2.3 1.2.3 对性功能和生殖功能的影响对性功能和生殖功

9、能的影响v雄性性功能包括性欲、阴茎勃起、性交、情欲高潮和射精几雄性性功能包括性欲、阴茎勃起、性交、情欲高潮和射精几个方面，并受内分泌功能和精神心理因素的调节。影响其任个方面，并受内分泌功能和精神心理因素的调节。影响其任何环节均可影响性功能。何环节均可影响性功能。v雄性生殖功能正常情况下除性功能外，还包括精子能正常雄性生殖功能正常情况下除性功能外，还包括精子能正常发生、成熟、输送和贮存。影响任何环节均可影响正常生发生、成熟、输送和贮存。影响任何环节均可影响正常生殖功能，影响精发生和成熟将直接影响生殖功能。殖功能，影响精发生和成熟将直接影响生殖功能。v上述重金属能影响性功能和生殖功能。上述重金属能

10、影响性功能和生殖功能。第11页，讲稿共79张，创作于星期二1.3 1.3 雄性生殖毒性的检测方法雄性生殖毒性的检测方法v1.3.1 1.3.1 精子生成分析精子生成分析v1.3.2 1.3.2 精子穿透试验精子穿透试验v1.3.3 1.3.3 睾丸中标志酶活性测定睾丸中标志酶活性测定v1.3.4 1.3.4 体外试验体外试验v1.3.5 1.3.5 雄性激素测定雄性激素测定v1.3.6 1.3.6 显性致死试验显性致死试验v1.3.7 1.3.7 雄性生殖细胞遗传毒性检测雄性生殖细胞遗传毒性检测v1.3.8 1.3.8 雄性生殖毒性病理检查雄性生殖毒性病理检查第12页，讲稿共79张，创作于星期

11、二1.3.1 1.3.1 精子生成分析精子生成分析v精子收集的方法可用交配后冲洗阴道法，但多采用处死精子收集的方法可用交配后冲洗阴道法，但多采用处死动物后收集附睾尾部和输精管中的精子。动物后收集附睾尾部和输精管中的精子。v判断精子生成情况可用下列三指标评定：判断精子生成情况可用下列三指标评定：v精子计数：精子计数：v精子形态观察：精子形态观察：v精子状态分析：精子状态分析：第13页，讲稿共79张，创作于星期二精子计数精子计数v其是雄性生殖功能的一项重要指标。可提供其是雄性生殖功能的一项重要指标。可提供有关精子发育与成熟方面的粗略信息。有关精子发育与成熟方面的粗略信息。v如果精子数目显著减少，则

12、可以认为受试物如果精子数目显著减少，则可以认为受试物对雄性生殖具有损害作用，但不能确定毒性对雄性生殖具有损害作用，但不能确定毒性作用发生在精子生成周期的哪个环节。作用发生在精子生成周期的哪个环节。第14页，讲稿共79张，创作于星期二精子形态观察精子形态观察v其通过伊红染色在显微镜下很容易观察。其通过伊红染色在显微镜下很容易观察。v精子头部和尾部的形态学改变可影响精子的精子头部和尾部的形态学改变可影响精子的运动和穿透卵细胞的能力。运动和穿透卵细胞的能力。v但该指标不够灵敏，应结合其它试验进行综但该指标不够灵敏，应结合其它试验进行综合分析。合分析。第15页，讲稿共79张，创作于星期二精子状态分析精

13、子状态分析v精子状态包括精液的精子状态包括精液的pHpH值、液化时间，精子值、液化时间，精子运动能力，蛋白质、脂质和微量元素的含量运动能力，蛋白质、脂质和微量元素的含量等。等。v通过该试验，可了解精子所处的微环境及精通过该试验，可了解精子所处的微环境及精子运动等情况是否与受试物有关。子运动等情况是否与受试物有关。v该试验需结合其它试验进行综合分析。该试验需结合其它试验进行综合分析。第16页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.2 1.3.2 精子穿透试验精子穿透试验v该试验是精子在体外的受精试验。它是检测精子在体该试验是精子在体外的受精试验。它是检测精子在体外能否成功穿透去透明带的金黄地鼠卵子而

14、受精的试外能否成功穿透去透明带的金黄地鼠卵子而受精的试验。其是常规试验所不能显示的，是常规分析的辅助验。其是常规试验所不能显示的，是常规分析的辅助试验。试验。v该试验的精子可以是大鼠、小鼠、家兔、猪、牛和人该试验的精子可以是大鼠、小鼠、家兔、猪、牛和人的精子。的精子。v该试验可用于不育症诊断和外源化学物生殖毒性方面的检测。该试验可用于不育症诊断和外源化学物生殖毒性方面的检测。第17页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.3 1.3.3 睾丸中标志酶活性测定睾丸中标志酶活性测定v睾丸中标志酶活性的变化能可靠地较早反映受试物对睾丸功能睾丸中标志酶活性的变化能可靠地较早反映受试物对睾丸功能的损害。的损

15、害。v在精母细胞和精细胞中首先出现的酶类，其含量和活性随精子的在精母细胞和精细胞中首先出现的酶类，其含量和活性随精子的形成和成熟而达到高峰。包括：透明质酸酶、形成和成熟而达到高峰。包括：透明质酸酶、山梨醇脱氢酶、乳酸山梨醇脱氢酶、乳酸脱氢酶脱氢酶-x-x、5-5-核苷酸酶、核苷酸酶、-磷酸甘油脱氢酶。磷酸甘油脱氢酶。v在睾丸足细胞、间质细胞或精原细胞内含量最高的酶类，其活在睾丸足细胞、间质细胞或精原细胞内含量最高的酶类，其活性和含量在性成熟前达到高峰，且随精母细胞、精细胞和精子性和含量在性成熟前达到高峰，且随精母细胞、精细胞和精子的形成和成熟而降低。包括：的形成和成熟而降低。包括：6-6-磷酸

16、葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、三磷酸甘油醛脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、三磷酸甘油醛脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、-谷氨酰转肽酶、尿苷二谷氨酰转肽酶、尿苷二磷酸酶、鸟苷酸脱羧酶等。磷酸酶、鸟苷酸脱羧酶等。第18页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.4 1.3.4 体外试验体外试验v体外试验较在体试验具有简便的优点。体外试验较在体试验具有简便的优点。v体外试验主要将哺乳动物的生殖细胞在体外条件下进行培养，体外试验主要将哺乳动物的生殖细胞在体外条件下进行培养，观察受试物是否引起生殖细胞改变。观察受试物是否引起生殖细胞改变。v也可通过分离培养睾丸支持细胞和间质细胞，测定支持细胞也可通

17、过分离培养睾丸支持细胞和间质细胞，测定支持细胞的乳酸含量和乳酸脱氢酶活性的变化以及测定间质细胞分泌的乳酸含量和乳酸脱氢酶活性的变化以及测定间质细胞分泌的雄激素含量来判断受试物是否对所培养细胞功能有影响。的雄激素含量来判断受试物是否对所培养细胞功能有影响。第19页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.5 1.3.5 雄性激素测定雄性激素测定v雄性激素是睾丸中产生的主要性激素，睾丸雄性激素是睾丸中产生的主要性激素，睾丸功能主要受功能主要受FSHFSH和和LHLH和雄激素维持和调节。和雄激素维持和调节。v检测该三种激素可判断受试物对雄性功能的检测该三种激素可判断受试物对雄性功能的影响。也有助于了解受试

18、物对雄性性功能和影响。也有助于了解受试物对雄性性功能和生殖功能影响的机制。生殖功能影响的机制。第20页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.6 1.3.6 显性致死试验显性致死试验v是观察指标为早期胚胎死亡的试验。是观察指标为早期胚胎死亡的试验。v其方法将接受受试物的雄性动物与雌性动物进行交配。若其方法将接受受试物的雄性动物与雌性动物进行交配。若雄性动物的精细胞受损，与雌性的生殖细胞不能正常结合雄性动物的精细胞受损，与雌性的生殖细胞不能正常结合成合子，这样卵细胞就不能受精或使受精卵在着床前就死成合子，这样卵细胞就不能受精或使受精卵在着床前就死亡，即观察子宫中活胎、死胎及吸收胎等数目。亡，即观察子

19、宫中活胎、死胎及吸收胎等数目。v本试验的特点是简便易行。但不够灵敏。本试验的特点是简便易行。但不够灵敏。第21页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.7 1.3.7 雄性生殖细胞遗传毒性检测雄性生殖细胞遗传毒性检测v本试验是检测雄性细胞本试验是检测雄性细胞DNADNA的损伤情况。具体的损伤情况。具体方法有：方法有：v单细胞凝胶电泳试验；单细胞凝胶电泳试验；v小鼠睾丸染色体畸变分析试验；小鼠睾丸染色体畸变分析试验；v小鼠精子畸变分析实验；小鼠精子畸变分析实验；v黑腹果蝇染色体隐性分析试验。黑腹果蝇染色体隐性分析试验。第22页，讲稿共79张，创作于星期二1.3.8 1.3.8 雄性生殖毒性病理检查雄

20、性生殖毒性病理检查v雄性生殖毒性病理检查是检查受试物对睾丸雄性生殖毒性病理检查是检查受试物对睾丸各种细胞，特别是各级生精细胞的形态变化。各种细胞，特别是各级生精细胞的形态变化。v检查时应注意在大体解剖的基础上，准确取检查时应注意在大体解剖的基础上，准确取材，选择合适的固定液保存病理检验材料，材，选择合适的固定液保存病理检验材料，以保证病检的正确性。以保证病检的正确性。第23页，讲稿共79张，创作于星期二2 2 雌性生殖毒性雌性生殖毒性v2.1 雌性生殖细胞的发生过程与胚胎发育雌性生殖细胞的发生过程与胚胎发育v2.2 2.2 雌性性与生殖功能的周期性调节雌性性与生殖功能的周期性调节v2.3 2.

21、3 外源化学物对雌性生殖毒性外源化学物对雌性生殖毒性v2.4 2.4 雌性生殖毒性的检测方法雌性生殖毒性的检测方法第24页，讲稿共79张，创作于星期二第一周胚胎发生第一周胚胎发生第25页，讲稿共79张，创作于星期二卵子的发生卵子的发生卵巢：内含大量卵巢：内含大量初级卵母细胞初级卵母细胞初级卵泡初级卵泡成熟卵泡成熟卵泡次级卵泡次级卵泡原始卵泡原始卵泡卵细胞卵细胞黄体黄体次级卵母细胞次级卵母细胞第26页，讲稿共79张，创作于星期二次级卵母细胞完成第二次成熟分裂次级卵母细胞完成第二次成熟分裂雌、雄原雌、雄原核形成核形成雌、雄原雌、雄原核融合核融合受精卵形受精卵形成成第27页，讲稿共79张，创作于星期

22、二二细胞期二细胞期 四细胞期四细胞期 八细胞期八细胞期桑椹胚桑椹胚 早期胚泡早期胚泡 晚期胚泡晚期胚泡第28页，讲稿共79张，创作于星期二第第7 7天时植入天时植入细胞滋养层内细胞滋养层内细胞群细胞群极端滋养层极端滋养层子宫内膜子宫内膜第29页，讲稿共79张，创作于星期二第八天两胚层分化第八天两胚层分化下胚层下胚层上胚层上胚层羊膜腔羊膜腔合体滋养层合体滋养层第30页，讲稿共79张，创作于星期二初级卵黄囊初级卵黄囊胚外中胚层胚外中胚层胚盘胚盘羊膜囊羊膜囊第第1010天人胚天人胚第31页，讲稿共79张，创作于星期二胚外体腔胚外体腔初级卵黄囊次初级卵黄囊次级卵黄囊级卵黄囊体蒂体蒂第第1313天人胚发

23、育天人胚发育第32页，讲稿共79张，创作于星期二第十四天人胚发育第十四天人胚发育第33页，讲稿共79张，创作于星期二卵黄囊卵黄囊第第1515天胚盘天胚盘羊膜羊膜体蒂体蒂原条原条脊索前板脊索前板第34页，讲稿共79张，创作于星期二第第1616天胚盘天胚盘原凹原凹脊索脊索原沟原沟第35页，讲稿共79张，创作于星期二第第1717天胚盘天胚盘神经板神经板原条原条泄殖腔膜泄殖腔膜第36页，讲稿共79张，创作于星期二三胚层胚盘横断三胚层胚盘横断外胚层外胚层胚内中胚层胚内中胚层内胚层内胚层第37页，讲稿共79张，创作于星期二受精后第受精后第受精后第受精后第20202020天：天：天：天：神经肠管神经肠管形成

24、形成形成形成第38页，讲稿共79张，创作于星期二神经板神经板神经沟神经沟神经褶神经褶第39页，讲稿共79张，创作于星期二口咽膜口咽膜神经板神经板泄殖腔膜泄殖腔膜第第2121天胚盘背面观天胚盘背面观第40页，讲稿共79张，创作于星期二口咽膜口咽膜 泄殖腔膜泄殖腔膜第41页，讲稿共79张，创作于星期二脊索脊索脊索脊索神经沟神经沟神经嵴神经嵴第42页，讲稿共79张，创作于星期二围心腔围心腔胚内体腔胚内体腔第43页，讲稿共79张，创作于星期二2020和和2323天天第44页，讲稿共79张，创作于星期二2626和和2828天天第45页，讲稿共79张，创作于星期二第46页，讲稿共79张，创作于星期二第47

25、页，讲稿共79张，创作于星期二2.2 2.2 雌性性与生殖功能的周期性调节雌性性与生殖功能的周期性调节v卵巢的周期性变化与动情周期密切相关。卵巢的周期性变化与动情周期密切相关。v卵巢内卵子的发生和成熟受垂体分泌的卵巢内卵子的发生和成熟受垂体分泌的FSHFSH和和LHLH周期性的正向调周期性的正向调节，节，FSHFSH和和LHLH又受下丘脑分泌的促性腺释放激素的正向调节。又受下丘脑分泌的促性腺释放激素的正向调节。vFSHFSH和和LHLH促进初级卵母细胞成熟并发育成次级卵母细胞。并在卵泡膜内促进初级卵母细胞成熟并发育成次级卵母细胞。并在卵泡膜内层细胞分泌的雌激素作用下，促进子宫内膜和生殖器的发育

26、。层细胞分泌的雌激素作用下，促进子宫内膜和生殖器的发育。FSHFSH、LHLH和雌激素达高峰时促进成熟卵泡排卵，并形成黄体。和雌激素达高峰时促进成熟卵泡排卵，并形成黄体。v卵细胞受精后，黄体在绒毛膜促性腺激素的作用下继续发育，卵细胞受精后，黄体在绒毛膜促性腺激素的作用下继续发育，并分泌孕激素和雌激素，以维持妊娠和副性器官的发育。否则并分泌孕激素和雌激素，以维持妊娠和副性器官的发育。否则黄体萎缩，孕激素水平下降，子宫内膜脱落。黄体萎缩，孕激素水平下降，子宫内膜脱落。v由于雌性生殖功能的复杂性，外源化学物对雌性生殖系统的影响远由于雌性生殖功能的复杂性，外源化学物对雌性生殖系统的影响远大于雄性。大于

27、雄性。第48页，讲稿共79张，创作于星期二2.3 2.3 外源化学物对雌性生殖毒性外源化学物对雌性生殖毒性v2.3.1 2.3.1 对卵细胞的影响对卵细胞的影响v2.3.2 2.3.2 对内分泌功能的影响对内分泌功能的影响v2.3.3 2.3.3 其它毒性作用其它毒性作用第49页，讲稿共79张，创作于星期二2.3.1 2.3.1 对卵细胞的影响对卵细胞的影响v排卵前的卵母细胞受化学物的影响最敏感。排卵前的卵母细胞受化学物的影响最敏感。v镉可直接损害卵母细胞的遗传物质；镉可直接损害卵母细胞的遗传物质；v二硫化碳可影响卵巢、受精卵和胚胎；二硫化碳可影响卵巢、受精卵和胚胎；v双环氧双环氧-4-4-乙

28、烯环已烯可使卵母细胞数减少；乙烯环已烯可使卵母细胞数减少；v环磷酰胺、胺草灵、克菌丹可致雌性生殖细环磷酰胺、胺草灵、克菌丹可致雌性生殖细胞染色体畸变；胞染色体畸变；v多氯联苯能降低子代卵子的受精能力和胚胎多氯联苯能降低子代卵子的受精能力和胚胎的着床率。的着床率。第50页，讲稿共79张，创作于星期二2.3.2 2.3.2 对内分泌功能的影响对内分泌功能的影响v对下丘脑对下丘脑-垂体垂体-性腺轴的任何环节的影响，均可引起性腺轴的任何环节的影响，均可引起雌性生殖功能的损害。雌性生殖功能的损害。v苯及其同系物，可能直接作用于丘脑、垂体和卵巢，使分苯及其同系物，可能直接作用于丘脑、垂体和卵巢，使分泌异常

29、而导致月经异常等生殖系统损害。泌异常而导致月经异常等生殖系统损害。v有机氯农药林丹、开蓬等可使血中有机氯农药林丹、开蓬等可使血中LHLH和催乳素降低和和催乳素降低和FSHFSH浓度升高，而使雌性动物阴道开启和排卵延迟或停止排浓度升高，而使雌性动物阴道开启和排卵延迟或停止排卵、死胎和自然流产。卵、死胎和自然流产。第51页，讲稿共79张，创作于星期二2.3.3 2.3.3 其它毒性作用其它毒性作用v化学物对雌性生殖系统的毒害也可表现在子化学物对雌性生殖系统的毒害也可表现在子代。代。v表现为畸形、死胎、胎儿功能发育不全等。表现为畸形、死胎、胎儿功能发育不全等。v由于雌性生殖的复杂性，化学物对各种生殖

30、由于雌性生殖的复杂性，化学物对各种生殖功能毒性作用在整个生命过程的不同阶段都功能毒性作用在整个生命过程的不同阶段都可出现。可出现。第52页，讲稿共79张，创作于星期二2.4 2.4 雌性生殖毒性的检测方法雌性生殖毒性的检测方法v2.4.1 2.4.1 体外试验体外试验v2.4.2 2.4.2 在体动物试验在体动物试验第53页，讲稿共79张，创作于星期二2.4.1 2.4.1 体外试验体外试验v体外试验可用以阐明毒对雌性动物生殖损害的作用部位和机制。体外试验可用以阐明毒对雌性动物生殖损害的作用部位和机制。全面试验方案见表全面试验方案见表7-27-2：v表表7-27-2成年雌性动物生殖毒性作用部位

31、与机制及其检测方法成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法1 1作用部位作用部位可能的改变的机制可能的改变的机制评价方法评价方法下丘脑下丘脑神经递质或信号的传递神经递质或信号的传递GnRHGnRH的合成与分泌的合成与分泌FSHFSH、LHLH及甾体的受体及甾体的受体暂无方法暂无方法激素测定激素测定受体分析受体分析第54页，讲稿共79张，创作于星期二表表7-27-2成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法2作用部位作用部位可能的改变的机制可能的改变的机制评价方法评价方法垂体前叶垂体前叶FSHFSH、LHLH及及PRLPRL的合成与分泌的合

32、成与分泌GnRHGnRH、FSHFSH、LHLH及甾体的受体及甾体的受体激素测定及激素测定及GnRHGnRH应答应答受体分析受体分析卵巢卵巢卵母细胞及闭锁细胞卵母细胞及闭锁细胞卵泡或颗粒细胞上卵泡或颗粒细胞上FSHFSH、LHLH受体受体E E3 3及及E E4 4的合成与分泌的合成与分泌对黄体生成的敏感性对黄体生成的敏感性记数及形态检查记数及形态检查受体分析受体分析激素检测激素检测体外试验体外试验第55页，讲稿共79张，创作于星期二表表7-27-2成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法3 3作用部位作用部位可能的改变的机制可能的改变的机制

33、评价方法评价方法卵子卵子表面蛋白与精子相互作用表面蛋白与精子相互作用透明带异常、代谢过程透明带异常、代谢过程雌雄核融合雌雄核融合植入植入生化测定生化测定精子穿透试验精子穿透试验形态学检查形态学检查植入与黄体激素植入与黄体激素输卵管输卵管边缘的运动、绒毛生成及其功能边缘的运动、绒毛生成及其功能E E2 2及及E E4 4受体数受体数精和卵子的运动精和卵子的运动液体环境液体环境形态学检查形态学检查受体分析受体分析回收和计数回收和计数生化测定生化测定第56页，讲稿共79张，创作于星期二表表7-27-2成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法4 4作

34、用部位作用部位可能的改变的机制可能的改变的机制评价方法评价方法子宫子宫E E2 2及及E E4 4受体数受体数PGEPGE和和PG EPG E2 2分泌分泌蛋白及腺蛋白分泌蛋白及腺蛋白分泌精存活与运输精存活与运输腔内液腔内液精子及胚胎分泌物接触精子及胚胎分泌物接触分娩分娩受体分析受体分析PGPG检测检测生化测定生化测定回收和计数回收和计数生化测定生化测定物质分析物质分析dystocia dystocia 指数指数第57页，讲稿共79张，创作于星期二表表7-27-2成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法成年雌性动物生殖毒性作用部位与机制及其检测方法5 5作用部位作用部位可能的改变的机制可

35、能的改变的机制评价方法评价方法子宫颈子宫颈精子屏障精子屏障体外试验体外试验阴道阴道精子接触分泌物精子接触分泌物物质分析物质分析乳腺乳腺乳汁中受试验物乳汁中受试验物乳汁成分的变化乳汁成分的变化乳汁生产量减少乳汁生产量减少物质分析物质分析物质分析物质分析乳汁计量乳汁计量第58页，讲稿共79张，创作于星期二2.4.2 2.4.2 在体动物试验在体动物试验v由于雌性生殖的复杂性，其毒理学评价较困难，下述两类在体动物试验由于雌性生殖的复杂性，其毒理学评价较困难，下述两类在体动物试验仍为主要评价方法：仍为主要评价方法：v一代繁殖试验或多代繁殖试验和致畸试验；一代繁殖试验或多代繁殖试验和致畸试验；v三阶段生

36、殖试验三阶段生殖试验：是分别在三个不同阶段给予受试物，以观察其对：是分别在三个不同阶段给予受试物，以观察其对生殖功能的影响。妊娠前期和初期（第一阶段）和器官形成期（第生殖功能的影响。妊娠前期和初期（第一阶段）和器官形成期（第二阶段），与繁殖试验和致畸试验类似；围产期（人类怀孕二阶段），与繁殖试验和致畸试验类似；围产期（人类怀孕2828周到周到产后一周产后一周 ）及授乳期（第三阶段），是观察受试物对胎儿和新生儿发）及授乳期（第三阶段），是观察受试物对胎儿和新生儿发育的影响。育的影响。第59页，讲稿共79张，创作于星期二3 3 致畸试验致畸试验v3.1 3.1 在体动物致畸试验在体动物致畸试验v3

37、.1.1 3.1.1 基本原理基本原理v3.1.2 3.1.2 基本方法基本方法v3.1.3 3.1.3 结果判断结果判断v3.2 3.2 离体致畸试验离体致畸试验第60页，讲稿共79张，创作于星期二3.1.1 3.1.1 基本原理基本原理v化学物在胚胎器官形成期（妊娠母体敏感期），可能使细化学物在胚胎器官形成期（妊娠母体敏感期），可能使细胞分化、器官形成和正常发育受到损害，以致出现胎仔器胞分化、器官形成和正常发育受到损害，以致出现胎仔器官的器质性缺陷而呈现畸形。官的器质性缺陷而呈现畸形。v故可通过在上述母体敏感期接触受试物后观察胚胎及胎仔的故可通过在上述母体敏感期接触受试物后观察胚胎及胎仔的

38、发育状况，来评价该受试物是否具有致畸作用。发育状况，来评价该受试物是否具有致畸作用。第61页，讲稿共79张，创作于星期二3.1.2 3.1.2 基本方法基本方法v动物选择动物选择v动物交配处理动物交配处理v剂量分组剂量分组v动物剖检动物剖检v胎仔检查胎仔检查第62页，讲稿共79张，创作于星期二动物选择动物选择v除参照一般毒性试验中选择动物的一般原则除参照一般毒性试验中选择动物的一般原则外，还应特别注意妊娠期较短而一致、产仔外，还应特别注意妊娠期较短而一致、产仔数多和胎盘结构与人类接近且自发性畸形发数多和胎盘结构与人类接近且自发性畸形发生率低等特点。同时还应考虑易于检查。生率低等特点。同时还应考

39、虑易于检查。v一般选用两种哺乳动物，首选大鼠，其次为一般选用两种哺乳动物，首选大鼠，其次为小鼠和家兔。小鼠和家兔。第63页，讲稿共79张，创作于星期二动物交配处理动物交配处理v选择健康性成熟的未曾孕产雌雄动物，雌雄按选择健康性成熟的未曾孕产雌雄动物，雌雄按1 1：1 1或或2 2：1 1同笼交配。同笼交配。v交配次日早晨阴道图片检查精子或检查阴栓，凡发现检交配次日早晨阴道图片检查精子或检查阴栓，凡发现检出精子或阴栓，即开始计数（第出精子或阴栓，即开始计数（第0 0天）孕期。天）孕期。v将怀孕动物随机分组，于妊娠第将怀孕动物随机分组，于妊娠第7-157-15天（敏感期）与人天（敏感期）与人实际接

40、触受试物情况一致的方式与途径将受试物给予动物。实际接触受试物情况一致的方式与途径将受试物给予动物。v试验期间每试验期间每2-32-3天称体重，以反映对妊娠的影响。天称体重，以反映对妊娠的影响。第64页，讲稿共79张，创作于星期二剂量分组剂量分组v原则上要求既要求出最大无作用量，以及引起致畸的阈剂量，又原则上要求既要求出最大无作用量，以及引起致畸的阈剂量，又要保证母体生育能力，不致母体大批流产和过多胚胎及母体死亡。要保证母体生育能力，不致母体大批流产和过多胚胎及母体死亡。v一般分三个剂量组和对照组，三个剂量为等比关系。高剂量组一般分三个剂量组和对照组，三个剂量为等比关系。高剂量组要求可引起母体轻

41、度中毒，低剂量组不应观察到任何中毒症状。要求可引起母体轻度中毒，低剂量组不应观察到任何中毒症状。v可选雌性动物可选雌性动物LD50LD50的的1/5-1/31/5-1/3为高剂量，为高剂量，LD50LD50的的1/50-1/301/50-1/30为低为低剂量；也可以亚慢毒试验中的最大无作用量作为高剂量组，以其剂量；也可以亚慢毒试验中的最大无作用量作为高剂量组，以其1/301/30为为低剂量组。低剂量组。第65页，讲稿共79张，创作于星期二动物剖检动物剖检v鼠类有残食畸形胎仔的习性，应在预产期前鼠类有残食畸形胎仔的习性，应在预产期前1-21-2天处死母鼠进行检查。一般大鼠在受孕后天处死母鼠进行检

42、查。一般大鼠在受孕后第第19-2019-20天，小鼠在第天，小鼠在第18-1918-19天。天。v剖检时先脱臼法处死动物，后从腹中线剖腹，剖检时先脱臼法处死动物，后从腹中线剖腹，暴露子宫和卵巢，为胎仔检查作准备。暴露子宫和卵巢，为胎仔检查作准备。第66页，讲稿共79张，创作于星期二胎仔检查胎仔检查v检查两侧子宫每窝胎仔中活胎数、晚期死胎数、早期检查两侧子宫每窝胎仔中活胎数、晚期死胎数、早期死胎数、吸收胎数及各种胎仔的特征。死胎数、吸收胎数及各种胎仔的特征。v对活胎测量其体重、体长、尾长和性别。对较大的动物应对活胎测量其体重、体长、尾长和性别。对较大的动物应取出卵巢，检查黄体数。最后检查胎仔外观

43、畸形检查、内取出卵巢，检查黄体数。最后检查胎仔外观畸形检查、内脏及软组织畸形检查和骨骼畸形检查（脏及软组织畸形检查和骨骼畸形检查（P130-131P130-131表表7-37-3、7-47-4、7-57-5）第67页，讲稿共79张，创作于星期二3.1.3 3.1.3 结果判断结果判断v平均着床率平均着床率=怀孕母鼠数怀孕母鼠数/交配母鼠交配母鼠数数?v平均活胎率平均活胎率=活产胎数活产胎数/怀孕母鼠怀孕母鼠数数?v着床后死亡率着床后死亡率=（吸收胎数（吸收胎数+死胎数）死胎数）/着床数着床数v畸胎出现率畸胎出现率=畸形胎仔总数畸形胎仔总数/活产胎仔活产胎仔总数总数?v活胎畸形出现率活胎畸形出现

44、率=活胎畸形数活胎畸形数/活胎总数活胎总数v母体畸胎出现率母体畸胎出现率=畸胎的母体数畸胎的母体数/妊娠母体数妊娠母体数v致畸指数致畸指数=母体母体LD50/LD50/胎仔最小致畸作用胎仔最小致畸作用量量?第68页，讲稿共79张，创作于星期二3.2 3.2 离体致畸试验离体致畸试验v目的目的：初步筛选致畸物及其致畸作用机制。：初步筛选致畸物及其致畸作用机制。v方法方法：体外全胚培养、器官培养和细胞胚培：体外全胚培养、器官培养和细胞胚培养试验。养试验。v优点优点：省时、省力；直接对人类血、尿进行：省时、省力；直接对人类血、尿进行试验，直接观察人类的接触反应；易于控制试验，直接观察人类的接触反应；

45、易于控制试验条件，减少干扰引起的误差。试验条件，减少干扰引起的误差。第69页，讲稿共79张，创作于星期二4 4 繁殖试验繁殖试验v4.1 4.1 动物选择与剂量分组动物选择与剂量分组v4.2 4.2 试验步骤试验步骤v4.3 4.3 观察指标观察指标v4.4 4.4 结果判断结果判断第70页，讲稿共79张，创作于星期二4.1 4.1 动物选择与剂量分组动物选择与剂量分组v选择健康刚断乳的大鼠。每组选择健康刚断乳的大鼠。每组2020只雌鼠、只雌鼠、1010只雄鼠。只雄鼠。v设对照组、高剂量组（设对照组、高剂量组（9090天或长期毒性试验天或长期毒性试验的最大无作用量）和低剂量组（的最大无作用量）

46、和低剂量组（1/301/30最大无最大无作用量或人类可能摄入量的作用量或人类可能摄入量的100100倍）。必要时倍）。必要时设置一个中间剂量组。设置一个中间剂量组。第71页，讲稿共79张，创作于星期二4.2 4.2 试验步骤试验步骤v先给受试物接触先给受试物接触9090天，性成熟后即可按常规天，性成熟后即可按常规方式交配，所生仔鼠为第一代（方式交配，所生仔鼠为第一代（F1F1）。每代）。每代交配两次，第一次交配生仔交配两次，第一次交配生仔F1aF1a断乳后断乳后1010天再天再使亲代进行第二次交配，生仔为使亲代进行第二次交配，生仔为F1bF1b。其余各。其余各代以此类推进行繁殖试验。观察各子代

47、的发代以此类推进行繁殖试验。观察各子代的发育情况。育情况。第72页，讲稿共79张，创作于星期二4.3 4.3 观察指标观察指标v交配指数交配指数=阴道检出精子的雌鼠数阴道检出精子的雌鼠数/交配的雌鼠数交配的雌鼠数v受精指数受精指数=交配受精的雌鼠数交配受精的雌鼠数/与雄性同笼的雌鼠数与雄性同笼的雌鼠数v受孕率受孕率=妊娠雌鼠数妊娠雌鼠数/交配雌鼠数交配雌鼠数v正常分娩率正常分娩率=正常分娩雌鼠数正常分娩雌鼠数/妊娠雌鼠数妊娠雌鼠数v活产率活产率=活产胎仔数活产胎仔数/胎仔总数胎仔总数v妊娠率妊娠率=出生活胎母鼠数出生活胎母鼠数/受孕鼠数受孕鼠数v出生存活率出生存活率=生后生后4 4天仔鼠存活数

48、天仔鼠存活数/胎仔总数胎仔总数v哺育存活率哺育存活率=21=21天断乳仔鼠存活数天断乳仔鼠存活数/胎仔总数胎仔总数第73页，讲稿共79张，创作于星期二4.4 4.4 结果判断结果判断v将试验组结果与对照组比较，若试验动物在将试验组结果与对照组比较，若试验动物在交配、妊娠、幼仔存活、幼仔发育等方面受交配、妊娠、幼仔存活、幼仔发育等方面受到影响，则说明受试物对动物繁殖功能有损到影响，则说明受试物对动物繁殖功能有损害作用。害作用。第74页，讲稿共79张，创作于星期二5 5 胚胎毒性胚胎毒性v胚胎毒性指受试物对母体子宫内发育的胚胎或胎儿产胚胎毒性指受试物对母体子宫内发育的胚胎或胎儿产生的毒性作用。包括

49、生的毒性作用。包括:v胚胎死亡胚胎死亡v生长发育迟缓生长发育迟缓v胎儿先天缺陷和畸形及功能发育不全胎儿先天缺陷和畸形及功能发育不全第75页，讲稿共79张，创作于星期二胚胎死亡胚胎死亡v是胚胎发育的某个阶段出现死亡。是胚胎发育的某个阶段出现死亡。v早期胚胎死亡仅能看见吸收胎，晚期死亡则早期胚胎死亡仅能看见吸收胎，晚期死亡则为死胎。为死胎。v其是化学物质引起胚胎毒性的最严重表现。其是化学物质引起胚胎毒性的最严重表现。第76页，讲稿共79张，创作于星期二生长发育迟缓生长发育迟缓v胎儿的生长发育较正常的胎儿缓慢，表现体胎儿的生长发育较正常的胎儿缓慢，表现体重、身长增长和骨骼钙化等缓慢。重、身长增长和骨

50、骼钙化等缓慢。v此外脑组织重量、脑细胞数及脑中各种酶含此外脑组织重量、脑细胞数及脑中各种酶含量和活性均低于正常对照组。量和活性均低于正常对照组。v判断标准为胎儿的平均体重低于正常对照组判断标准为胎儿的平均体重低于正常对照组的的2 2个标准差。个标准差。第77页，讲稿共79张，创作于星期二胎儿先天缺陷和畸形及功能发育不全胎儿先天缺陷和畸形及功能发育不全v包括外观、内脏、骨骼及中枢神经系统等畸包括外观、内脏、骨骼及中枢神经系统等畸形。如各种原因导致维生素形。如各种原因导致维生素A A过多可导致中枢过多可导致中枢神经系统、心血管及面部畸形。神经系统、心血管及面部畸形。v由于胎儿发育障碍而导致功能障碍