猪瘟传染病实验布鲁氏菌病的实验室诊断课件.ppt

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1、布鲁氏菌病的实验室诊断实验目的目的 初步掌握布氏杆菌病的初步掌握布氏杆菌病的细菌学、血清学菌学、血清学诊断断及及变态反反应等等检疫方法。疫方法。一、一、细菌学菌学检查染色染色观察察 改良改良Ziehl-Neelsen氏法：适于做胎膜和流氏法：适于做胎膜和流产胎胎儿内容物，流儿内容物，流产后阴道拭子。布氏杆菌染成后阴道拭子。布氏杆菌染成红色，背景色，背景为蓝色。色。改良改良Koster氏法：布氏杆菌染成桔氏法：布氏杆菌染成桔红色，背景色，背景为蓝色。色。培养：培养：培养基：普通培养基、肝培养基：普通培养基、肝汤培养基，血清葡萄糖培养基，血清葡萄糖琼脂或吐温葡萄糖脂或吐温葡萄糖琼脂脂选择培养基：培

2、养基：20-70万分之一的万分之一的结晶紫或晶紫或80万分之万分之一的乙基紫一的乙基紫条件：两份，一份于条件：两份，一份于10%CO2二、血清学二、血清学诊断断试管凝集反管凝集反应：抗原：用抗原：用0.5%石碳酸生理石碳酸生理盐水水1:10稀稀释 血清：新血清：新鲜，无明，无明显蛋白凝固，无溶血和腐蛋白凝固，无溶血和腐败 稀稀释血清：牛：血清：牛：1:50、1:100、1:200、1:400 羊：羊：1:25、1:50、1:100、1:20023滴稀释液2滴血清10滴稀释血清 110滴稀释血清10滴稀释液 210滴稀释血清10滴稀释液 310滴稀释血清10滴稀释液 4弃去10滴稀释血清10滴稀

3、释后的抗原管号稀释好的抗原（ml）稀释液（ml）清亮度（%）标记101.0（20滴）100+20.25（5滴）0.75（15滴）75+30.5（10滴）0.5（10滴）50+40.75（15滴）0.25（5滴）25+51.0（20滴）00-比比浊管的配制管的配制全部全部试管充分震管充分震荡，37-38度温箱中，度温箱中，22-24h后用比后用比浊管管对照照检查记录结果。出果。出现50%以上凝集的最高稀以上凝集的最高稀释度就是度就是这份血份血清的凝集价，因此清的凝集价，因此50%亮度的比亮度的比浊管很重要。管很重要。结果判定：阳性可疑阴性牛、马和骆驼1:100以上1:50低于1:50猪、羊和够1

4、:50以上1:25低于1：25可疑家畜可疑家畜3-4周重周重检，牛羊重，牛羊重检仍仍为可疑，判可疑，判为阳性；猪和阳性；猪和马重重检仍仍为可疑，同可疑，同场未出未出现阳性，判阳性，判为阴性。猪弱阳性阴性。猪弱阳性时，应结合流行病学判定合流行病学判定结果果虎虎红平板凝集平板凝集试验 被被检血清和布氏杆菌虎血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各平板凝集抗原各1滴，滴滴，滴于玻璃板上，混合均匀，室温于玻璃板上，混合均匀，室温4-10min记录反反应结果。果。同同时设定阴阳性血清定阴阳性血清对照。照。在在对照成立的情况下，被照成立的情况下，被检血清出血清出现任何程度的任何程度的凝集凝集现象均判象均判为阳性，

5、完全不凝集的判阳性，完全不凝集的判为阴性，阴性，无可疑反无可疑反应。全乳全乳环状反状反应（ABR）取新取新鲜全乳全乳1ml加入小加入小试管中，加入抗原管中，加入抗原1滴滴充分震充分震荡混合，置混合，置37-38水浴中水浴中60min，小，小心取出心取出试管，立即管，立即进行判定。行判定。按乳脂和乳柱的按乳脂和乳柱的颜色判定。色判定。强阳性反阳性反应（+）：乳柱上）：乳柱上层的乳脂形成明的乳脂形成明显红色或色或蓝色的色的环带，乳柱呈白色，分界，乳柱呈白色，分界清楚；清楚；阳性反阳性反应（+）乳脂）乳脂层的的环带虽呈呈红色或色或蓝色但不如色但不如+显著，乳柱微著，乳柱微带红色或色或蓝色；色；弱阳性反弱阳性反应（+）乳脂）乳脂层环带颜色色较浅，但比浅，但比乳柱乳柱颜色略深；色略深；疑似反疑似反应（）乳脂）乳脂层环带不甚明不甚明显，并与乳，并与乳柱分界模糊，乳柱柱分界模糊，乳柱带有有红色或色或蓝色；色；阴性反阴性反应（-）乳柱上）乳柱上层无任何无任何变化，乳柱呈化，乳柱呈均匀均匀浑浊的的红色或色或蓝色。色。