药物分析巴比妥类药物分析.pptx

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1、 基本要求基本要求 一、掌握我国药典中巴比妥类药物的一、掌握我国药典中巴比妥类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉国外药典本类药物鉴别和含二、熟悉国外药典本类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。量测定的基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。返 回第1页/共107页一、结构特征与典型药物一、结构特征与典型药物 巴比妥类药物是巴比妥酸的衍生物，结构通式如下巴比妥类药物是巴比妥酸的衍生物，结构通式如下第2页/共107页5,55,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5,55,5取代的硫代巴比妥类药物取代的硫代巴比妥类

2、药物1,5,51,5,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物本类药物的结构可大致分为两个部分：本类药物的结构可大致分为两个部分：1.1.环状丙二酰脲环状丙二酰脲、1,31,3二酰亚胺基团二酰亚胺基团决定巴比妥类药物的特性决定巴比妥类药物的特性2.2.取代基部分取代基部分区别各种巴比妥类药物区别各种巴比妥类药物第3页/共107页第4页/共107页第5页/共107页第6页/共107页第7页/共107页戊巴比妥戊巴比妥第8页/共107页返 回硫喷妥钠硫喷妥钠第9页/共107页二、理化特征二、理化特征 1.1.性状性状 巴巴比比妥妥类类药药物物通通常常为为白白色色结结晶晶或或者者为为结结晶晶性性粉粉末

3、末，具具有有一一定定的的熔熔点点。在在空空气气中中未未定定，加加热热都都能能升升华华。一一般般微微溶溶或或极极微微溶溶于于水水，易易溶溶于于乙乙醇醇；其其钠钠盐盐易易溶于水，难溶于有机溶剂。溶于水，难溶于有机溶剂。第10页/共107页 2.2.弱酸性弱酸性 巴巴比比妥妥类类药药物物的的母母核核环环状状结结构构中中含含有有1 1，3-3-二二酰酰亚亚胺胺基基团团，能能使使其其分分子子发发生生酮酮式式-烯烯醇醇式式互互变变异异构构，在在水水溶溶液液中中发生二级电离，其反应式为：发生二级电离，其反应式为：第11页/共107页 由由于于本本类类药药物物具具有有弱弱酸酸性性（pKpKa a 值值为为7.

4、37.38.48.4）故故可可与与强强碱碱反反应应生成水溶性的盐类，一般为钠盐。成盐反应为：生成水溶性的盐类，一般为钠盐。成盐反应为：第12页/共107页 由由弱弱酸酸与与强强碱碱形形成成的的巴巴比比妥妥钠钠盐盐，其其水水溶溶液液呈呈碱碱性性，加加酸酸酸酸化化后后，则则析析出出结结晶晶性性的的游游离离巴巴比比妥妥类类药药物物，可可用用有有机机溶溶剂剂将将其其提提取取出出来来。上上述述这这些些性性质质可可用于巴比妥类药物的分离、鉴别、检查和含量测定。用于巴比妥类药物的分离、鉴别、检查和含量测定。第13页/共107页 3.3.水解反应水解反应 巴巴比比妥妥类类药药物物及及其其钠钠盐盐的的六六元元环

5、环状状结结构构比比较较稳稳定定，遇遇酸酸、氧氧化化剂剂、还还原原剂剂时时，一一般般情情况况下下不不会会破破裂裂，但但与与碱碱共共沸时则水解开环，并产生沸时则水解开环，并产生氨气氨气。第14页/共107页(1)(1)巴比妥类药物的水解巴比妥类药物的水解 主主要要是是酰酰亚亚胺胺基基团团的的性性质质，与与碱碱溶溶液液共共沸沸就就可可以以水水解解生生成成氨氨气气，生生成成的的氨气可使红色石蕊试纸变蓝。反应式如下：氨气可使红色石蕊试纸变蓝。反应式如下：JP(14)JP(14)采用这一反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥。采用这一反应鉴别异戊巴比妥和巴比妥。第15页/共107页 (2)2)巴比妥类药物钠盐的水解巴

6、比妥类药物钠盐的水解 本本类类药药物物钠钠盐盐的的水水溶溶性性比比较较大大，在在吸吸湿湿的的情情况况下下也也能能水水解解。水水解解的的速速度度与与温温度度和和pHpH值值有有关关。室室温温和和pH10pH10以以下下时时水水解解较较慢慢，pH11pH11以以上上随随着着碱碱度度的的增增加加水水解速度也随之加快。解速度也随之加快。第16页/共107页 4.4.与重金属反应与重金属反应 (1)(1)与与AgAg+的反应的反应可溶性的可溶性的白色白色第17页/共107页(2)(2)与与CuCu2+2+的反应的反应巴比妥类药物巴比妥类药物 +铜吡啶试液铜吡啶试液吡啶吡啶紫色或紫色沉紫色或紫色沉淀淀硫喷

7、妥钠硫喷妥钠 +铜吡啶试液铜吡啶试液吡啶吡啶绿色绿色第18页/共107页第19页/共107页第20页/共107页 (3)(3)与与CoCo2+2+的反应的反应 这这一一反反应应的的现现象象与与铜铜盐盐反反应应的的现现象象相相似似，均均生生成成紫紫堇堇色色配配位位化化合合物物。本本反反应应要要求求在在无无水水的的条条件件下下进进行行，所所用用试试剂剂均均应应不不含含水水分分，以以使使反反应应灵灵敏敏，而而且且形形成成的的有有色色产产物物也也比比较较稳稳定定，常常用用无无水水乙乙醇醇或或甲甲醇醇；钴钴盐盐为为醋醋酸酸钴钴、硝硝酸酸钴钴或或氧氧化化钴钴；碱碱以以有有机碱为好，一般采用机碱为好，一般采

8、用异丙胺异丙胺。第21页/共107页第22页/共107页(4)(4)与与HgHg2+2+的反应的反应白色第23页/共107页 5.5.与香草醛的反应与香草醛的反应 巴巴比比妥妥类类药药物物分分子子结结构构中中丙丙二二酰酰脲脲基基团团中中氢氢比比较较活活泼泼，可可与与香香草草醛醛在在浓浓硫硫酸酸存存在在下下发发生生缩缩合合反反应应，生生成成棕棕红红色色产产物物。BPBP（20002000）戊戊巴巴比比妥妥采采用用此此反反应应进行鉴别。进行鉴别。第24页/共107页加乙醇后，其反应产物可转变为加乙醇后，其反应产物可转变为棕红色棕红色第25页/共107页 6.6.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 主

9、主要要特特点点：随随着着电电离离级级数数的的不不同同，巴巴比比妥妥类类药药物物的的紫紫外外光光谱谱会会发发生生显显著著的的变变化化。也也就就是是说说，溶溶液液pHpH值值的的不不同同以以及及取取代基的不同会对紫外光谱产生影响。代基的不同会对紫外光谱产生影响。第26页/共107页A.H2SO4溶液溶液（0.05mol/L）B.pH9.9缓冲液缓冲液C.NaOH溶液溶液（0.1mol/L）巴比妥类药物的紫外吸收光谱巴比妥类药物的紫外吸收光谱第27页/共107页 在在酸酸性性溶溶液液中中，5 5，5-5-二二取取代代和和1 1，5 5，5 5三三取取代代巴巴比比妥妥类类药药物物不不电电离离，无无明明

10、显显的的紫紫外外吸吸收收峰峰；在在pH10pH10的的碱碱性性溶溶液液中中，发发生生一一级级电电离离，形形成成共共轭轭体体系系结结构构，在在240nm240nm处处出出现现最最大大吸吸收收峰峰；在在pH13pH13的的强强碱碱性性溶溶液液中中，5 5，5-5-二二取取代代巴巴比比妥妥类类药药物物发发生生二二级级电电离离，引引起起共共轭轭体体系系延延长长，导导致致吸吸收收峰峰向向红红移移至至255nm255nm；1 1，5 5，5-5-三三取取代代巴巴比比妥妥类类药药物物，因因1 1位位取取代代基基的的存存在在，故故不不发发生二级电离，最大吸收峰仍位于生二级电离，最大吸收峰仍位于240nm240

11、nm。第28页/共107页硫喷妥的紫外吸收光谱硫喷妥的紫外吸收光谱HCl HCl 溶液溶液 (0.1mol/L)(0.1mol/L)-NaOH NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L)(0.1mol/L)第29页/共107页 硫硫代代巴巴比比妥妥类类药药物物的的紫紫外外吸吸收收光光谱谱则则不不同同，在在酸酸性性或或碱碱性性溶溶液液中中均均有有较较明明显显的的紫紫外外吸吸收收。在在盐盐酸酸溶溶液液（0.1mol/L0.1mol/L）中中，两两个个吸吸收收峰峰分分别别在在287nm287nm和和238nm238nm；在在氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液（0.1mol/L0.1mol/L）中中，两两个个吸吸

12、收收峰峰分分别别移移至至304nm304nm和和255nm255nm。另另外外，在在pH13pH13的的强强碱碱性性溶溶液液中中，硫硫代代巴巴比比妥妥类类药药物物在在255nm255nm处处的的吸收峰消失，只存在吸收峰消失，只存在304nm304nm处的吸收峰。处的吸收峰。第30页/共107页 7.7.色谱行为特征（主要用于鉴别）色谱行为特征（主要用于鉴别）（1 1）TLC:TLC:在在硅硅胶胶60F60F254254上上点点样样，氯氯仿仿-丙丙酮酮（4:14:1）为为展展开开剂剂，显显色色，在在紫紫色色背背景景上上可可观观察察到到白白色色的的斑斑点点。一一般般采采用用对对照照品品（或或标标准

13、准品品）比比较较法法，要要求求供供试试品品斑斑点点的的R Rf f值值应应与与对对照照品品斑斑点的一致。点的一致。（2 2）HPLC:HPLC:与与对对照照品品比比较较保保留留行行为为，主主要要是比较保留时间和相对保留时间。是比较保留时间和相对保留时间。第31页/共107页 8.8.显微结晶显微结晶 巴巴比比妥妥类类药药物物可可根根据据其其本本身身或或与与某某种种试试剂剂的的反反应应产产物物的的特特殊殊晶晶型型，进进行行同同类类或或不不同同类类药药物物的的鉴鉴别别。此此法法亦亦适适用用于于生生物物样样品品中中微微量量巴巴比比妥妥类类药物的检验。药物的检验。（1 1）药药物物本本身身的的晶晶形形

14、 取取药药物物或或从从酸酸性性溶溶液液中中，用用有有机机溶溶剂剂提提取取、经经酸酸化化、提提取取、纯纯化化后后，即即生生成成相相应应巴巴比比妥妥类类药药物物的的特特殊殊结结晶晶。在在显显微微镜镜下下观观察察结结晶晶形形状状：巴巴比比妥妥为为长长方方形形；苯苯巴巴比比妥妥在在开开始始时呈球形，然后变成花瓣状的结晶。见课本时呈球形，然后变成花瓣状的结晶。见课本P101P101。第32页/共107页 （2 2）反反应应产产物物的的晶晶形形 鉴鉴于于某某些些巴巴比比妥妥类类药药物物可可与与重重金金属属离离子子反反应应，生生成成具具有有特特殊殊晶晶形形的的沉沉淀淀。因因此此，可可利利用用此此特特性性进进

15、行行鉴鉴别别。例例如如，巴巴比比妥妥可可与与硫硫酸酸铜铜-吡吡啶啶试试液液进进行行反反应应，生生成成十十字字形形紫紫色色结结晶晶，如如课课本本P101P101图图5-45-4所所示示；苯苯巴巴比比妥妥反反应应后后，则则形形成成浅浅紫紫色色细细小小不不规规则则的的或或类类似似菱菱形形的的结结晶晶；其其他他巴巴比比妥妥类类药药物不能形成结晶，可利用这一特性来区分之。物不能形成结晶，可利用这一特性来区分之。返 回第33页/共107页三、鉴别试验三、鉴别试验 1.1.丙二酰脲鉴别反应丙二酰脲鉴别反应 这这一一鉴鉴别别试试验验已已经经收收载载在在中中国国药药典典附附录录中中的的“一一般般鉴鉴别别试试验验

16、”项项下下。包括银盐反应和铜盐反应，分别生成沉淀和呈色，反应。包括银盐反应和铜盐反应，分别生成沉淀和呈色，反应。第34页/共107页 1.1.丙二酰脲鉴别反应丙二酰脲鉴别反应 已已经经收收载载在在中中国国药药典典附附录录中中的的“一一般般鉴鉴别别试试验验”项项下下。包包括括银银盐盐反反应应和和铜铜盐盐反反应应，分分别别生生成成沉沉淀淀和和呈呈色色，反反应应的的原原理理前前面已经提到过，在此不再赘述。面已经提到过，在此不再赘述。第35页/共107页 2.2.测定熔点测定熔点 巴巴比比妥妥类类的的钠钠盐盐酸酸 游游离离巴巴比比妥妥类类药药物物 过过滤滤 洗洗涤涤 干燥干燥 测熔点测熔点 第36页/

17、共107页 例如：例如：司司可可巴巴比比妥妥钠钠的的鉴鉴别别 取取本本品品1g 1g 溶溶解解 强强力力搅搅拌拌 加加水水煮煮沸沸溶溶解解成成澄澄清清溶溶液液 放放冷冷 过滤过滤 结晶在结晶在7070干燥后，熔点约为干燥后，熔点约为9797。苯苯巴巴比比妥妥钠钠的的鉴鉴别别 中中国国药药典典的的方方法法：取取本本品品约约0.5g 0.5g 加加水水溶溶解解 加加过过量量稀稀盐盐酸酸 白白色色结结晶晶性性沉沉淀淀 过过滤滤 用用水水洗洗净净沉沉淀淀 105105干干燥，熔点应为燥，熔点应为174174178178。水水稀醋酸稀醋酸第37页/共107页 巴巴比比妥妥的的鉴鉴别别 取取本本品品0.5

18、g0.5g，加加1mol/L1mol/L碳碳酸酸钠钠溶溶液液5ml5ml使使溶溶解解，加加4.5%4.5%（W/VW/V）对对硝硝基基氯氯苄苄的的乙乙醇醇溶溶液液10ml10ml，在在水水浴浴上上加加热热回回流流30min30min，放放置置1h1h后后，滤滤 过过，所所 得得 沉沉 淀淀 用用 乙乙 醇醇 进进 行行 重重 结结 晶晶 后后，在在100105100105干干 燥燥，测测 定定 衍衍 生生 物物 的的 熔熔 点点，应应 为为150150左右。巴比妥与对硝基氯苄的衍生化反应为：左右。巴比妥与对硝基氯苄的衍生化反应为：第38页/共107页 3.3.利用特殊取代基或元素的鉴别试验利用

19、特殊取代基或元素的鉴别试验 （1 1）利用不饱和取代基的鉴别试验）利用不饱和取代基的鉴别试验 具具有有不不饱饱和和取取代代基基的的巴巴比比妥妥类类药药物物，中中国国药药典典收收载载了了司司可可巴巴比比妥妥钠钠。其其分分子子结结构构中中含含有有烯烯丙丙基基，可可与与碘碘、溴溴或或高高锰锰酸酸钾钾作作用用，发发生生加加成成或或氧氧化反应，而使碘、溴或高锰酸钾褪色化反应，而使碘、溴或高锰酸钾褪色。与与碘试液碘试液反应反应第39页/共107页 与与高高锰锰酸酸钾钾的的反反应应 含含不不饱饱和和取取代代基基的的巴巴比比妥妥类类药药物物，具具有有还还原原性性，在在碱碱性性溶溶液液中中与与高高锰锰酸酸钾钾反

20、反应应，使使紫紫色色的的高高锰锰酸酸钾钾还还原原成成棕棕色色的的二二氧化锰。氧化锰。第40页/共107页（2 2）利用芳环取代基的鉴别试验）利用芳环取代基的鉴别试验 硝硝化化反反应应 含含芳芳香香取取代代基基的的巴巴比比妥妥类类药药物物，如如取取苯苯巴巴比比妥妥或或其其钠钠盐盐，与与硝硝酸酸钾钾和和硫硫酸酸共共热热，可可发生硝化反应，生成黄色硝基化合物。发生硝化反应，生成黄色硝基化合物。黄色第41页/共107页 与与硫硫酸酸-亚亚硝硝酸酸钠钠的的反反应应 苯苯巴巴比比妥妥与与硫硫酸酸-亚亚硝硝酸酸钠钠反反应应生生成成橙橙黄黄色色产产物物，并并随随即即转转变变为为橙橙红红色色。本本反反应应确确切

21、切的的原原理理不不清清，可可能能为为苯苯环环上上的的亚亚硝硝基基反反应应。此此鉴鉴别别试试验验为为中中国国药药典典收收载载的的方方法法，可可用用于于区区别苯巴比妥和其他不含苯环取代基的巴比妥类药物。别苯巴比妥和其他不含苯环取代基的巴比妥类药物。与与甲甲醛醛-硫硫酸酸的的反反应应 苯苯巴巴比比妥妥与与甲甲醛醛-硫硫酸酸反反应应，生生成成玫玫瑰瑰红红色色产产物物。此此鉴鉴别别方方法法也也为为中中国国药药典典收收载载，可用于区别苯巴比妥和其他巴比妥类药物。可用于区别苯巴比妥和其他巴比妥类药物。第42页/共107页（3 3）硫元素的鉴别试验）硫元素的鉴别试验 巴巴比比妥妥类类分分子子结结构构中中含含有

22、有硫硫的的药药物物，如如硫硫喷喷妥妥钠钠，可可将将其其硫硫元元素素转转变变为为无无机机硫硫离离子子，而而显显硫硫化化物物的的反反应应。如如硫硫喷喷妥妥钠钠在在氢氢氧氧化化钠钠试试液液中中与与铅铅离离子子反反应应生生成成白白色色沉沉淀淀；加加热热后后，沉沉淀淀转转变变成成黑黑色色的的硫硫化化铅铅。此此鉴鉴别别试试验验可可用用于于硫硫代巴比妥类与巴比妥类药物的区别代巴比妥类与巴比妥类药物的区别。返 回第43页/共107页 四、特殊杂质检查四、特殊杂质检查 特特殊殊杂杂质质是是指指在在特特定定药药物物的的生生产产和和贮贮存存过过程程中中引引入入的的杂杂质质。药药物物中中特特殊殊杂杂质质的的检检查查主

23、主要要是是根根据据药药物物和和杂杂质质在在物物理理化化学学性性质质上上的的差差异异来来进进行行的的。我我们们分分别别以以苯苯巴巴比比妥和司可巴比妥钠为例。妥和司可巴比妥钠为例。第44页/共107页 1.1.苯巴比妥的特殊杂质检查苯巴比妥的特殊杂质检查第45页/共107页 （1 1）酸度（指示剂法）酸度（指示剂法）酸度的检查主要是控制副产物苯基丙二酰脲。苯基丙二酸度的检查主要是控制副产物苯基丙二酰脲。苯基丙二酰脲是由于中间体（酰脲是由于中间体（）的乙基化反应不完全，而与脲素）的乙基化反应不完全，而与脲素缩合生成的。因其分子中缩合生成的。因其分子中5 5 位碳原子上的氢受相邻丙羧基位碳原子上的氢受

24、相邻丙羧基的影响，致使酸性比苯巴比妥强，能使甲基橙指示剂呈红的影响，致使酸性比苯巴比妥强，能使甲基橙指示剂呈红色。色。第46页/共107页（2 2）溶液的澄清度）溶液的澄清度 本项检查主要是控制苯巴比妥中本项检查主要是控制苯巴比妥中乙醇不溶性杂质乙醇不溶性杂质，利用苯巴比妥酸这，利用苯巴比妥酸这些杂质在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小的特性进行检查。些杂质在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小的特性进行检查。第47页/共107页 （3 3）中性或碱性物质）中性或碱性物质 中中性性或或碱碱性性物物质质是是由由中中间间体体（）形形成成的的酰酰胺胺、酰酰脲脲或或分分解解产产物物等等杂杂质质，不不溶溶于于氢氢

25、氧氧化化钠钠试试液液但但溶溶于于乙乙醚醚；而而苯苯巴巴比比妥妥具具有有酸酸性性，溶溶于于氢氢氧氧化化钠钠试试液液，故故采采用用提提取取重重量量法法测测定定其其含含量量。检检测测方方法法为为：取取本本品品1.0g 1.0g 置置分分液液漏漏斗斗中中 加加氢氢氧氧化化钠钠试试液液10ml10ml溶溶解解 加加水水5ml5ml与与乙乙醚醚25ml 25ml 分分取取醚醚层层 用用水水振振摇摇洗洗涤涤3 3次次（每每次次5ml5ml）取取醚醚液液过过滤滤 滤滤液液于于105105蒸蒸干干，在在105105干干燥燥1h1h，遗留残渣不得过遗留残渣不得过3mg3mg。第48页/共107页 2.2.司可巴比

26、妥钠的特殊杂质检查司可巴比妥钠的特殊杂质检查第49页/共107页（1 1）溶液的澄清度）溶液的澄清度 此此项项检检查查主主要要是是控控制制水水不不溶溶性性杂杂质质，巴巴比比妥妥类类药药物物的的钠钠盐盐极极易易溶溶于于水水，因因此此本本品品的的水水溶溶液液应澄清，否则表明含有水不溶性杂质。应澄清，否则表明含有水不溶性杂质。需需注注意意的的是是，因因本本品品的的水水溶溶液液易易与与空空气气中中的的二二氧氧化化碳碳作作用用，而而析析出出司司可可巴巴比比妥妥，故故进进行行该该项项目目检检查查时时，溶溶解解样样品品的的水水应应新新沸沸放放冷冷以以消消除除水水中二氧化碳的干扰。中二氧化碳的干扰。第50页/

27、共107页（2 2）中性或碱性物质）中性或碱性物质 检检查查的的杂杂质质是是合合成成过过程程中中产产生生的的中中性性或或碱碱性性副副产产物物以以及及司司可可巴巴比比妥妥钠钠的的分分解解产产物物，如如酰酰脲脲（）、酰胺（酰胺（）类化合物。）类化合物。()()返 回第51页/共107页五、含量测定五、含量测定 银量法银量法 溴量法溴量法 巴比妥类药物的含巴比妥类药物的含 酸碱滴定法酸碱滴定法 量测定方法量测定方法 紫外分光光度紫外分光光度 提取重量法提取重量法 HPLCHPLC法、法、GCGC法法 第52页/共107页（一）（一）银量法银量法 基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液基于巴比妥类药物在合适

28、的碱性溶液中，可与银离子定量成盐，可采用银量法测中，可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及定本类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。剂，中国药典均采用银量法测定其含量。优点优点：操作简便，专属性较强。：操作简便，专属性较强。缺点缺点：受温度影响较大；滴定终点以溶液：受温度影响较大；滴定终点以溶液出现浑浊为终点指示难以观察。出现浑浊为终点指示难以观察。第53页/共107页 1.1.原理原理 反应摩尔比：反应摩尔比：1:11:1 溶剂系统：甲醇溶剂系统：甲醇

29、3 3无水碳酸钠无水碳酸钠 终点指示：电位法指示（终点指示：电位法指示（AgAg玻璃电极系统）玻璃电极系统）自身指示法自身指示法 第54页/共107页 2.2.测定方法与计算测定方法与计算 例如例如:异戊巴比妥及其钠盐的测定：异戊巴比妥及其钠盐的测定：取取本本品品约约0.2g 0.2g 加加甲甲醇醇40ml40ml使使溶溶解解 新新鲜鲜配配制制的的3%3%无无水水碳碳酸酸钠钠溶溶液液15ml15ml，照照电电位位法法，用用硝硝酸酸银银滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴 定定，即即 得得。每每 1ml1ml硝硝 酸酸 银银 滴滴 定定 液液（0.1mol/L0.1mol/L）相

30、相 当当 于于 22.63mg22.63mg的的 C C1111H H1818N N2 2O O3 3（或或24.83mg24.83mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO3 3）。）。原料药：直接滴定法（容量分析法）原料药：直接滴定法（容量分析法）D%=第55页/共107页 3.3.注意事项注意事项 （1 1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制 （2 2）硝酸银滴定液应新鲜配制）硝酸银滴定液应新鲜配制第56页/共107页 （二）（二）溴量法溴量法 凡凡在在5 5位位取取代代基基含含有有不不饱饱和和键键的的巴巴比比妥妥类类药药物物，其其不不饱饱和和键键能能与与溴溴定

31、定量量地地发发生生加加成成反反应应，故故可可采采用用溴溴量量法法测测定定其其含含量量。中中国国药药典典收收载载的的司司可可巴巴比比妥妥钠钠采采用用本本法法测测定定。其其测测定定原原理理可可用用下下列列反反应应式式表表示：示：（定量过量）（定量过量）Br2 +2KI 2KBr +I2（剩余）（剩余）I2 +2Na2S2O3 2NaI +Na2S4O6第57页/共107页 溴滴定液的配制：溴滴定液的配制：取溴酸钾取溴酸钾3.0g3.0g与溴化钾与溴化钾15g15g，加水适量，加水适量使之溶解成使之溶解成1000ml1000ml，摇匀。，摇匀。反应的摩尔比：反应的摩尔比：1:21:2第58页/共10

32、7页 司司可可巴巴比比妥妥钠钠的的测测定定方方法法：取取本本品品约约0.1g 0.1g 加加 水水10ml10ml振振摇摇 使使 溶溶 解解 精精 密密加加溴溴 滴滴定定 液液（0.1mol/L0.1mol/L）25ml 25ml 盐盐酸酸5ml5ml，立立即即密密塞塞并并振振摇摇1min1min，在在暗暗处处静静置置15min 15min 加加KIKI试试液液10ml 10ml 摇摇匀匀 用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白

33、白试试验验校校正正。每每1ml1ml溴溴滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）相相当当于于13.01mg13.01mg的的C C1212H H1717N N2 2NaONaO3 3。第59页/共107页 原料药原料药 剩余滴定法剩余滴定法第60页/共107页 注意事项：注意事项：（1 1）操作中要防止溴和碘的逸失。）操作中要防止溴和碘的逸失。（2 2）平行条件进行空白试验可以减少溴和碘逸失带来的误差。）平行条件进行空白试验可以减少溴和碘逸失带来的误差。第61页/共107页（三）（三）酸碱滴定法（酸量法）酸碱滴定法（酸量法）巴巴比比妥妥类类药药物物呈呈弱弱酸酸性性，可可作作为为一一元元

34、酸酸以以标标准准碱碱液液直直接接滴滴定定，或或在在非非水水溶溶液液中中用用强强碱碱溶溶液直接滴定。常用的方法如下：液直接滴定。常用的方法如下：1.1.在在水乙醇混合溶剂水乙醇混合溶剂中滴定中滴定 基基于于本本类类药药物物在在水水中中的的溶溶解解度度较较小小，滴滴定定时时多多在在醇醇溶溶液液或或含含水水的的醇醇溶溶液液中中进进行行，这这样样可可避避免免反反应应中中产产生生的的弱弱酸酸盐盐易易于于水水解解而而影影响响滴滴定定终终点点。常常以以麝麝香香草草酚酚酞酞为为指指示示剂剂，滴滴定定至至淡淡蓝蓝色为终点。色为终点。第62页/共107页 例如例如：异戊巴比妥的含量测定异戊巴比妥的含量测定 取取本

35、本品品约约0.5g0.5g，精精密密称称定定，加加乙乙醇醇20ml20ml溶溶解解后后，加加麝麝香香草草酚酚酞酞指指示示剂剂6 6滴滴，用用氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液液（0.1mol/L0.1mol/L）滴滴定定，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正，即即得得。每每1ml1ml氢氢氧氧化化钠钠滴滴定定液（液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3。第63页/共107页原料药原料药 直接滴定法（有空白校正）直接滴定法（有空白校正）T T滴定度，每滴定度，每1ml1ml滴定液相当于被测组分

36、的滴定液相当于被测组分的mgmg数数 V V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（滴定时，供试品消耗滴定液的体积（mlml）V VO O滴定时，空白消耗滴定液的体积（滴定时，空白消耗滴定液的体积（mlml）f f浓度校正因子浓度校正因子第64页/共107页 2.2.在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定 表面活性剂是一种所谓表面活性剂是一种所谓“两亲两亲”分子，即其分子是由分子，即其分子是由亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水溶液中溶液中浓度很低时浓度很低时，基本上呈，基本上呈单分子单分子状态存在，但当状态存在，但当超过某一浓度时（临界胶束浓度）

37、，多余的表面活性超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子组剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子组成数的聚集物，称为胶束或胶团。成数的聚集物，称为胶束或胶团。胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。第65页/共107页 本本法法是是在在有有机机表表面面活活性性剂剂的的胶胶束束水水溶溶液液中中进进行行滴滴定定，用用指指示示剂

38、剂或或电电位位法法指指示示终终点点。常常用用的的有有机机表表面面活活性性剂剂有有：溴溴化化十十六六烷烷基基三三甲甲基基苄苄铵铵(CTMA)(CTMA)和氯化四癸基二甲基苄铵和氯化四癸基二甲基苄铵(TDBA)(TDBA)。采采用用本本法法测测定定巴巴比比妥妥和和苯苯巴巴比比妥妥的的结结果果的的相相对对标标准准差差（RSDRSD）均均小小于于0.3%0.3%，并并优优于于在在水水-乙醇混合溶液中的滴定方法。乙醇混合溶液中的滴定方法。第66页/共107页 3.3.非水滴定法非水滴定法 巴巴比比妥妥类类药药物物在在非非水水溶溶液液中中的的酸酸性性增增强强，用用碱碱性性标标准准溶溶液液滴滴定定时时，终终

39、点点较较为为明明显显，可可获获得得比比较较满满意意的的结结果果。测测定定时时常常用用的的有有机机溶溶剂剂有有二二甲甲基基甲甲酰酰胺胺、甲甲醇醇、氯氯仿仿、丙丙酮酮、无无水水乙乙醇醇、苯苯、吡吡啶啶、甲甲醇醇-苯苯（151585）、乙乙醇醇-氯氯仿仿（1 110）等等；常常用用的的滴滴定定剂剂有有甲甲醇醇钾钾（钠钠）的的甲甲醇醇（或或乙乙醇醇）溶溶液液、氢氢氧氧化化四四丁丁基基铵铵的的氯氯苯苯溶溶液液等等；常常用用的的指指示示剂剂为为麝麝香香草草酚酚蓝蓝等等，也也可可用玻璃用玻璃-甘汞电极系统，以电位法指示终点。甘汞电极系统，以电位法指示终点。第67页/共107页（四）紫外分光光度法（四）紫外分

40、光光度法 巴巴比比妥妥类类药药物物在在酸酸性性介介质质中中几几乎乎不不电电离离，无无明明显显的的紫紫外外吸吸收收。但但在在碱碱性性介介质质中中电电离离为为具具有有紫紫外外吸吸收收特特征征的的结结构构，因因而而可可采采用用紫紫外外分分光光光光度度法法测测定定其其含含量量。本本法法灵灵敏敏度度高高，专专属属性性强强，广广泛泛应应用用于于巴巴比比妥妥类类药药物物的的原原料料及及其其制制剂剂的的含含量量测测定定，以以及及固固体体制制剂剂的的溶溶出出度度和和含含量量均均匀匀度度检检查查，也也常常用于体内巴比妥类药物的检测。用于体内巴比妥类药物的检测。第68页/共107页 1.1.直接测定的紫外分光光度法

41、直接测定的紫外分光光度法 本本法法是是将将供供试试品品溶溶解解后后，根根据据溶溶液液的的pHpH，在在最最大大吸吸收收波波长长（maxmax）处处，直直接接测测定定对对照照品品溶溶液液和和供供试试品品溶溶液液的的吸吸收收度度，再再计计算算药药物物的的含含量量。中中国国药药典典对对注注射射用用硫硫喷喷妥钠的含量测定采用本法。妥钠的含量测定采用本法。Beer-LambertBeer-Lambert定律定律 A=-A=-T=ElC ACT=ElC AC第69页/共107页 单组分定量的方法单组分定量的方法：1.1.吸收系数法（绝对法）吸收系数法（绝对法）第70页/共107页 2.2.标准曲线法标准曲

42、线法 3.3.对照法对照法第71页/共107页 教材中以注射用硫喷妥钠的含量测定为例：教材中以注射用硫喷妥钠的含量测定为例：取取装装量量差差异异项项下下的的内内容容物物，混混合合均均匀匀，精精密密称称取取适适量量（约约相相当当于于硫硫喷喷妥妥钠钠0.25g0.25g），置置500ml500ml量量瓶瓶中中，加加水水稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，量量取取此此溶溶液液用用0.4%0.4%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液定定量量稀稀释释制制成成每每1ml1ml中中约约含含5g5g的的溶溶液液；另另取取硫硫喷喷妥妥对对照照品品，加加0.4%0.4%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液溶溶解解并并定定量量稀稀释释制制成成

43、每每1ml1ml中中约约含含5g5g的的溶溶液液。照照分分光光光光度度法法，在在304nm304nm波波长长处处测测定定吸吸收收度度，根根据据每每支支的的平平均均装装量量计计算算。每每1mg1mg硫硫喷喷妥妥相相当于当于1.091mg1.091mg的的C C1111H H1717N N2 2NaSNaS。第72页/共107页 2.2.提取分离后的紫外分光光度法提取分离后的紫外分光光度法 提提取取分分离离的的主主要要目目的的是是消消除除干干扰扰物物质质对对测测定定的的影影响响。根根据据巴巴比比妥妥类类药药物物具具有有弱弱酸酸性性，在在氯氯仿仿等等有有机机溶溶剂剂中中易易溶溶，而而其其钠钠盐盐在在

44、水水中中易易溶溶的的特特点点。测测定定时时取取供供试试液液适适量量，加加酸酸酸酸化化后后，用用氯氯仿仿提提取取巴巴比比妥妥类类药药物物。氯氯仿仿提提取取液液加加pH7.2pH7.27.57.5缓缓 冲冲 溶溶 液液，振振 摇摇，分分 离离 弃弃 去去 水水 相相 缓缓 冲冲 液液 层层。再再 用用0.45mol/L0.45mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液提提取取氯氯仿仿层层中中的的巴巴比比妥妥类类药药物物，将将碱碱提提取取液液调调节节至至适适宜宜pHpH，然然后后选选择择相相应应的的吸吸收收波波长长进进行行测测定。定。第73页/共107页 USP USP（2424）对苯巴比妥钠的含量测定采用

45、本法）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法 样样品品 溶溶解解 酸酸化化 氯氯仿仿提提取取 精精密密量量取取适适量量氯氯仿仿液液 蒸蒸气气浴浴上上挥挥干干 乙乙醇醇、pH9.6pH9.6缓缓冲冲液液 供试品溶液（样品液）供试品溶液（样品液）苯苯巴巴比比妥妥对对照照品品 乙乙醇醇、pH9.6pH9.6缓缓冲冲液液 标标准准溶溶液（对照液）液（对照液）240nm240nm为测定波长为测定波长第74页/共107页多组分混合物不经分离的定量方多组分混合物不经分离的定量方法法 计算分光光度计算分光光度法法解方程组法解方程组法双波长分光光度法双波长分光光度法差示分光光度法差示分光光度法导数光谱法导数光谱法三波长

46、法三波长法第75页/共107页 3.3.差示紫外分光光度法（差示紫外分光光度法（A A法法）本本法法是是利利用用巴巴比比妥妥药药物物在在不不同同pHpH值值溶溶液液中中的的电电离离级级数数不不同同，因因而而产产生生紫紫外外吸吸收收光光谱谱的的情情况况不不同同，以以此此为为依依据据设设计计测测定定方方法法。该该法法常常用用于于巴巴比比妥妥类类药药物物的的制制剂剂分分析析，也也可可用用于于体体内内巴巴比比妥妥类类药药物的监测。物的监测。第76页/共107页（1 1）测定方法测定方法 取取两两份份相相等等的的供供试试溶溶液液，分分别别制制成成两两种种不不同同的的化化学学环环境境（如如在在其其一一中中

47、加加酸酸、碱碱或或缓缓冲冲液液改改变变溶溶液液的的pHpH，或或在在其其一一中中加加能能与与供供试试品品发发生生某某种种化化学学反反应应的的试试剂剂），然然后后将将两两者者分分别别稀稀释释至至同同样样浓浓度度，一一份份置置样样品品池池中中，另另一一份份置置参参比比池池中中，于于适适当当波波长长处处，测其吸收度的差值（测其吸收度的差值（A A值）。值）。第77页/共107页（2 2）必要条件必要条件 a.a.供供试试品品在在不不同同的的化化学学环环境境中中以以不不同同的的分分子子形形式式存存在在，它它们们的的吸吸收收光光谱谱有有显显著著的的差差异。异。b.b.干扰物的吸收不受测定时化学环境的影干

48、扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。响，光谱行为不变。第78页/共107页（3 3）定量依据）定量依据 供供试试品品在在两两种种不不同同的的化化学学环环境境中中分分别别以以x x、y y表示，干扰物用表示，干扰物用z z表示。表示。第79页/共107页 也也就就是是说说，吸吸收收度度差差值值（A A）仅仅与与待待测测组组分分的的浓浓度度有有关关，而而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。可用对照法或标准曲线法定量可用对照法或标准曲线法定量第80页/共107页（4 4）特点特点 保保留留了了通通常常的的分分光光光光度度法法简简易易快快速速、

49、直直接接读读数数的的优优点点，又又无无需需事先分离，并能消除干扰。事先分离，并能消除干扰。第81页/共107页 以复方巴比妥散中苯巴比妥的测定为例：以复方巴比妥散中苯巴比妥的测定为例：利利用用复复方方苯苯巴巴比比妥妥散散中中的的阿阿司司匹匹林林和和水水杨杨酸酸等等成成分分在在pH5.91pH5.91和和8.048.04条条件件下下的的紫紫外外吸吸收收光光谱谱重重合合，A A=0=0，而而苯苯巴巴比比妥妥在在240nm240nm波波长长处处，在在pH5.91pH5.91和和8.048.04条条件件下下A A的的值值最最大大。因因此此A A大大小小只只与与苯苯巴巴比比妥妥浓浓度度成成正正比比，是是

50、该该法法用用于于苯苯巴比妥的定量依据。巴比妥的定量依据。返 回第82页/共107页思考题思考题1.1.如何根据巴比妥类药物的结构特征来如何根据巴比妥类药物的结构特征来选择分析方法？选择分析方法？2.2.巴比妥类药物的紫外吸收光谱有何特巴比妥类药物的紫外吸收光谱有何特征？征？3.3.巴比妥类药物的含量测定方法及其原巴比妥类药物的含量测定方法及其原理是什么？理是什么？练习与思考 第83页/共107页练习题练习题AA型题型题 1.1.苯巴比妥中检查的特殊杂质是苯巴比妥中检查的特殊杂质是 A.A.巴比妥巴比妥 B.B.间氨基酚间氨基酚 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.中性或碱性物质中性或碱性物质 E.E