平面色谱技术03课件.pptx

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1、1 1）纸色谱）纸色谱载体：滤纸（纤维素），可吸附载体：滤纸（纤维素），可吸附22%水，其中水，其中 6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子 之间的偶极作用）形成固定相之间的偶极作用）形成固定相纸纸纸纸22%H22%H2 2OO6%H2O 固定相固定相流动相流动相S S S SS S S SS S S SS S S SS S S SS S S SS S S S纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱 -正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱第1页/共43页2)2)薄层色谱薄层色谱 薄层薄层 分离机制分离机制 主要应用范围主要应用范围氧化铝板氧化铝板 吸附吸附

2、 脂肪和芳香化合物、生物脂肪和芳香化合物、生物 硅胶板硅胶板 吸附吸附 碱、甾类、萜类碱、甾类、萜类改性硅胶改性硅胶 C C2 2,C,C8 8,C,C1818RP RP 正相、反相正相、反相 非极性物质、极性物质非极性物质、极性物质CNCN板板 正相、反相正相、反相 农药、酚类、甾类农药、酚类、甾类NHNH2 2板板 正相、反相、正相、反相、核苷酸、农药、酚类、甾类、核苷酸、农药、酚类、甾类、阴离子交换阴离子交换 维生素类、嘌呤衍生物维生素类、嘌呤衍生物纤维素纤维素 分配分配 氨基酸、梭酸氨基酸、梭酸乙酰纤维素乙酰纤维素 正相、反相正相、反相 蒽醌类、抗氧化剂蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂离子交

3、换剂 阴、阳离子交换阴、阳离子交换 氨基酸、梭酸、氨基糖、肽氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺聚酰胺 分配分配 黄酮类、酚类黄酮类、酚类葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 凝胶过滤凝胶过滤 蛋白质、核苷酸蛋白质、核苷酸第2页/共43页2.薄层色谱操作技术1)薄层板(1)(1)(1)(1)载体：载体：硅胶：表面带有硅醇基，硅胶：表面带有硅醇基，pH=4.5pH=4.5，经，经150150活化脱水活化脱水 后，后，4646个硅醇基个硅醇基/nm/nm2 2(2)(2)(2)(2)薄层参数：薄层参数：厚度：厚度：普通薄层普通薄层 高效薄层高效薄层 制备薄层制备薄层 0.25mm 0.2mm 0.52mm 0.25mm

4、 0.2mm 0.52mm 活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示,它随含水量的增它随含水量的增加而减弱加而减弱第3页/共43页活度级别活度级别活度级别活度级别含水量含水量含水量含水量吸附力吸附力吸附力吸附力硅胶硅胶硅胶硅胶氧化铝氧化铝氧化铝氧化铝增增增增强强强强硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系第4页/共43页不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况第5页/共43页(3)(3)粘合剂与添加剂粘合剂与添加剂 粘合剂粘合剂a.a.煅石膏煅石膏（CaSOCaSO4 42H2H

5、2 2O)O)：120140120140烘烤烘烤24h,24h,过过200200目筛，密闭备用。目筛，密闭备用。b.b.羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（-a)a)：0.21.0%0.21.0%添加剂添加剂a.a.荧光指示剂荧光指示剂 ZnSOZnSO4 4:Mn 254nm:Mn 254nm ZnSZnSCdS:Ag 366nmCdS:Ag 366nmb.b.酸、碱或缓冲液酸、碱或缓冲液c.c.硝酸银溶液硝酸银溶液：饱合化合物：饱合化合物 炔烃炔烃 反式烯烃反式烯烃 顺式烯烃顺式烯烃第6页/共43页(4)(4)薄层的制备方法薄层的制备方法 手工制板手工制板 a.a.软板软板 b.b.硬板硬板(

6、含粘合剂含粘合剂)匀浆匀浆涂布涂布凉干凉干活化活化预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板 a.a.a.a.普通薄层普通薄层预制板预制板-硅胶、氧化铝、纤维素、硅硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板板 b.b.b.b.高效高效薄层预制板薄层预制板-氨基、氰基键合硅胶板、手氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝-纤维纤维素、纤维素素、纤维素-硅胶、硅藻土硅胶、硅藻土-硅胶等）硅胶等）第7页/共43页(5)(5)(5)(5)薄层板的

7、活化薄层板的活化 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质R R 值就小。值就小。活化：活化：105120105120105120105120干燥干燥 0.51h 0.51h 0.51h 0.51h 级级 活度的标定：活度的标定：a.a.a.a.氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取偶氮苯偶氮苯30mg30mg30mg30mg和和对对-甲氧基偶甲氧基偶氮

8、苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各20mg20mg20mg20mg溶于四溶于四氯化碳氯化碳50ml50ml50ml50ml中，摇匀备用。中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液20l20l20l20l点于待测板上，用四点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的R R ，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板的花度级别。的花度级别。第8页/共43页染料染料染料染料活度级别（活度级别（活度级别（活度级别（R R 值）值）值）值）偶氮苯偶氮苯偶氮苯偶氮苯0.590.590.740.740.850.850.950.95对对对对

9、-甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯0.160.160.490.490.690.690.890.89苏丹黄苏丹黄苏丹黄苏丹黄0.010.010.250.250.570.570.780.78苏丹红苏丹红苏丹红苏丹红0.000.000.100.100.330.330.560.56对对对对-氨基偶氮苯氨基偶氮苯氨基偶氮苯氨基偶氮苯0.000.000.030.030.080.080.190.19氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别第9页/共43页b.b.薄层活度的标定薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（

10、苏丹苏丹红（苏丹）各）各20mg20mg溶于溶于1ml1ml氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙乙酸乙酯（酸乙酯（9 9：1 1）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对-二甲氨基二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。第10页/共43页（6 6 6 6）薄层板的预处理）薄层板的预处理 常用方法：常用方法：用氯仿用氯仿-甲醇甲醇(1:1)(1:1)(1:1)(1:

11、1)或所用展开剂先展或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在110110110110干燥干燥0.510.51h h h h，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理。理。（7 7 7 7）烧结）烧结薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层 机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用第11页/共43页2 2）点样：（1 1 1 1）样品溶液的制备样品溶液的制备 纯品的溶解纯品的溶解 样品的提取与净化样品的提取与净化 a.a.a.a.溶剂

12、提取法溶剂提取法 b.b.b.b.液液萃取法液液萃取法 c.c.c.c.液固萃取法液固萃取法-亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂溶剂的选择溶剂的选择 a.a.a.a.溶剂溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点样环形色谱效应；样环形色谱效应；b.b.b.b.溶剂的溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；c.c.c.c.溶剂的沸点要适中。溶剂的沸点要适中。第12页/共43页(2)(2)(2)(2)点样点样 样品浓度样品浓度 0.011.00%0.011.00%点样体积点样体积 经典薄层经典薄层 15 15 l l 高效薄层高效薄

13、层 0.10.5 0.10.5 l l 点样过多会造成原点点样过多会造成原点“超载超载”，展开剂产生，展开剂产生“绕行绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。点样直径点样直径 经典薄层经典薄层 5mm(5mm(一般一般3mm)3mm)高效薄层高效薄层 12mm12mm 点样间距点样间距 经典薄层经典薄层 1 1 1 12cm 2cm 高效薄层高效薄层 0.50.5 g g 荧光荧光 0.01ng0.01ng（2 2）蒸气检出法）蒸气检出法（3 3）试剂显色法）试剂显色法 显色方法显色方法 a.a.a.a.喷雾显色喷雾显色b.b.b.b.浸渍显色浸渍显色c.

14、c.c.c.超压衍生化超压衍生化d.d.d.d.展层展层-显色法显色法 显色试剂显色试剂第34页/共43页a.a.通用显色剂通用显色剂 a)a)a)a)硫酸硫酸 组成：硫酸组成：硫酸-水（水（1:11:11:11:1），硫酸），硫酸-甲醇或乙醇甲醇或乙醇（1:11:11:11:1），），1.5M1.5M1.5M1.5M硫酸与硫酸与0.50.50.50.5 1.5M1.5M1.5M1.5M硫酸铵。硫酸铵。方法：喷后方法：喷后110110110110烤烤15min,15min,15min,15min,不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜 色。色。b)0.5%b)0.5%b)0.5%b)0.5%碘的

15、氯仿溶液碘的氯仿溶液 c)c)c)c)中性中性0.05%0.05%0.05%0.05%高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。d)5%d)5%d)5%d)5%磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液方法：喷后方法：喷后120120120120烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气熏，则背景变无色。气熏，则背景变无色。b.b.b.b.专属显色剂专属显色剂第35页/共43页（4 4）定性）定性 斑点的斑点的R R 值值斑点的显色特性斑点的显色特性 斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描a.a.a.a.薄层色谱薄层色谱-紫外可见光谱扫描紫外

16、可见光谱扫描b.b.b.b.薄曾色谱薄曾色谱-三维光谱扫描三维光谱扫描与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用 a.a.a.a.与其它色谱法：与其它色谱法：GCGCGCGC、HPLCHPLCHPLCHPLCb.b.b.b.与电化学法联用：与电化学法联用：阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴定法定法c.c.c.c.与光谱法联用：与光谱法联用：原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、IRIRIRIR、MS MS MS MS、NMR NMR NMR NMR（）定量）定量第36页/共43页平板色谱简单、方便、及操作费用低，平板色谱简单、方便、及操作费用低，可可以以在在一一块块层

17、层析析板板上上同同时时展展开开多多个个试试样样及及将将多多条条滤纸同时展开。滤纸同时展开。采采用用方方形形薄薄层层板板还还可可以以方方便便的的进进行行二二维维展展开开，即即按按一一般般方方法法展展开开后后，改改变变方方向向和和展展开开剂剂再再次次展展开开，进进一步改善分离效果。一步改善分离效果。试样一般不需要经过预处理即可分离。试样一般不需要经过预处理即可分离。.平板色谱特点及应用第37页/共43页 缺缺点点：分分离离效效率率较较低低，不不适适用用挥挥发发性性试试样样分分离离。定性定量不便。定性定量不便。应应用用：平平板板色色谱谱法法在在染染料料、农农药药、医医药药、有有机机酸酸碱碱类类化化合

18、合物物、糖糖类类化化合合物物、氨氨基基酸酸、蛋蛋白白质质及及中中草草药药中中有有效效成成分分的的分分离离分分析析中中经经常常被被使使用用。也也可可以以用用于于无无机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种预试方法预试方法。第38页/共43页合成药物的分析方面的应用合成药物的分析方面的应用l药物的定性检鉴别药物的定性检鉴别l纯度检查纯度检查l合成药制剂的含量测定合成药制剂的含量测定l稳定性考查稳定性考查l药物代谢研究药物代谢研究l合成工艺的监控及反应机制的研究合成工艺的监控及反应机制的研究第39页/共43页谢谢！谢谢！第40页/共43页各组分在薄板上的位置常用比

19、移值（Rf）来表示。A，B为样品溶液点样的位置，如图1所示：1、比移值（Rf）起始线a bcAB溶剂前沿图1、Rf值的测量示意图A物质的物质的Rf=;B物质的物质的Rf=;所以所以Rf值与值与K之间关系可用下式表之间关系可用下式表示：示：Rf=1/1+K（Vs/Vm）原点至溶剂前沿的距离原点至斑点中心的距离=Rfabbc第41页/共43页在一定色谱条件下，Rf值为常数，其值在01之间，若某组分Rf=0，表示它不随展开剂移动，吸附剂对它的吸附力很强，留在原点不动。若Rf=1，表示吸附剂对它基本不吸附，随着展开剂到达溶剂前沿，K=0。Rf值越小，表示该组分K越大，极性越大。根据物质的化学结构不同，极性不同，在同一薄板上展开，我们能预测它们的Rf值大小。第42页/共43页感谢您的观看。第43页/共43页