生物化学实验30 还原性维生素C的定量测定电子课件 .pptx

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1、生物化学实验30 还原性维生素C的定量测定电子课件 生物化学实验技术生物化学实验技术还原性维生素C的定量测定实验类型：验证性实验类型：验证性实验类型：验证性实验类型：验证性教学时数：教学时数：教学时数：教学时数：3 3生物化学实验技术一、实验目的一、实验目的 掌握掌握2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法。的原理和方法。生物化学实验技术二、实验二、实验原理原理 维生素维生素C具有很强的还原性，还原型抗坏具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原染料血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐，本身则二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，氧化成脱氢抗坏血

2、酸。在酸性溶液中，2,6-二二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。生物化学实验技术 因此因此，可用，可用2,6-二氯酚靛酚滴定样品中的二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的点。如无其他杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。呈正比。生物化学实验技术三、仪器与试剂三、仪器与试剂1、材料：新鲜蔬菜水果、材料：新

3、鲜蔬菜水果2、仪器：研钵，天平，、仪器：研钵，天平，容量瓶，容量瓶，量筒，刻度量筒，刻度吸管，吸管，锥形瓶，锥形瓶，微量滴定管，漏斗，新鲜蔬微量滴定管，漏斗，新鲜蔬菜或新鲜水果，滤纸，离心机。菜或新鲜水果，滤纸，离心机。3、试剂：、试剂：2%草酸溶液，标准维生素草酸溶液，标准维生素C溶液，溶液，0.02%2,6-二氯酚靛酚溶液。二氯酚靛酚溶液。生物化学实验技术四、实验内容四、实验内容1、提取：称取新鲜样品约、提取：称取新鲜样品约4g，置于研钵中，置于研钵中，加入加入5mL 2%草酸溶液研磨成浆状，残渣再草酸溶液研磨成浆状，残渣再次研磨，一同转入次研磨，一同转入50mL容量瓶中，草酸总量容量瓶中

4、，草酸总量为为35mL，加水定容。，加水定容。2、过滤：提取液充分混匀后，离心，过滤。、过滤：提取液充分混匀后，离心，过滤。生物化学实验技术3、样品滴定：准确吸取滤液、样品滴定：准确吸取滤液5 mL于于50mL的锥的锥形瓶中，立即用标定过的形瓶中，立即用标定过的2,6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液滴定至终点，粉红色，滴定至终点，粉红色，15秒不褪色。记录所用秒不褪色。记录所用染料的毫升数（重复测定染料的毫升数（重复测定23次）。次）。4、空白滴定：准确量取、空白滴定：准确量取35mL 2%的草酸，放的草酸，放入入50mL容量瓶中，加水定容。准确吸容量瓶中，加水定容。准确吸5 mL于于50mL的锥形瓶中，立即用的锥形瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液滴定至终点，粉红色，滴定至终点，粉红色，15秒不褪色。记录所用秒不褪色。记录所用染料的毫升数（重复测定染料的毫升数（重复测定23次）。次）。生物化学实验技术5、计算、计算6、标定、标定2,6-二氯酚靛酚：取维生素二氯酚靛酚：取维生素C标准液标准液5mL及及1%草酸溶液草酸溶液5mL于于50mL的锥形瓶中，的锥形瓶中，用配制好的用配制好的2,6-二氯酚靛酚溶液标定。二氯酚靛酚溶液标定。