理学生理学学习.pptx

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1、ContentsBackgroundMaterialsandMethodsHypothesisResultsDiscussion第1页/共30页BackgroundCl-channelc-AMP-PKACFTRinh-172第2页/共30页CFdiseasenotonlyaCFTRproblem,butalsowithhyper-absorbNa+.ThestudyofWelsh,deniedthisview.Welshusedshort-circuitcurrentmethodtodothisarticle.第3页/共30页短路电流装置短路电流 (ISC)(ISC)定义为穿过上皮并使得跨上皮

2、电压降为零的电流。钳制模式1.电流钳模式跨上皮电流被钳制在0A，测量细胞两侧的电势差。2.电压钳模式组织的跨上皮电压被设定在一个特定的值，然后接通电压钳，跨上皮电流将此电压维持在预设值上。这种模式用于测定由上皮主动转运的离子。第4页/共30页第5页/共30页短路电流的实验方法研究上皮正常或病理情况下的离子转运研究药物样品 液对上皮细 胞Isc的影响阻断剂法 离子替代法打孔法 第6页/共30页阻断剂法在加药反应之前加入某种通道的阻断剂（如Cl-通道阻断剂DPC等）对组织进行一段时间的孵育，然后再加药，或在加药反应到高峰的时候再加阻断剂，看此时药物的反应是否会被抑制。第7页/共30页离子替代法把正

3、常K-H溶液中的某种离子替换掉（如Cl-用葡萄糖酸根替代），看此时加药后的反应比起在正常K-H中的反应是否有变化。第8页/共30页打孔法在细胞两侧先加入某种离子浓度不相同的溶液（如做K+导就在顶膜侧加入高K+，基膜面加入低K+溶液），然后有目的性地在细胞的某侧加入打孔剂（如制霉毒素，两性霉素等），将该侧打穿，使该侧外界与细胞内相通（即细胞内液与该侧外溶液相同），待其稳定后，再加入药物，看此时是否能引起进一步的反应。第9页/共30页上皮细胞上皮细胞生物体内依靠不同组织系统的作用有选择性地将必须的非电解质和电解质从外环境吸收或者从内环境分泌出去，所有这些组织系统由大量形态较规则，排列紧密的细胞组成

4、，这些多面体细胞组成的几乎没有细胞间质的薄层称之为上皮。具有极性：顶膜面和基底膜面特点具有紧密连接，在形态上彼此紧密的相连续不具有毛细血管，依赖附近的结缔组织供给营养和氧气主要功能：屏障功能和有方向性物质转运功能。第10页/共30页Cl-分泌分泌NKCC cotransporterCFTRNa+channel基底膜面顶膜面第11页/共30页NewbornCFTR/andCFTRF508/F508pigsincreasednasalVtandVtamillikepersonswhohaveCF.ButhavenomoreNa+absorptionthancontrols.InCF,elevati

5、onsinbasalVt,basalIsc,Vtamil,andIscamilarecausedbythelackofapicalClconductance,notbyincreasedNa+conductance.MeasuredGt,Isc,andVt.第12页/共30页HypothesisHowlackofCFTRchangesElectrolytetransportinprimaryculturesofdifferentiatedhumanAirwayepithelia?DecreasedClconductance,increasedNa+conductance,oracombinat

6、ionofthetwo?第13页/共30页Materials and MethodsPrimaryCulturesofHumanAirwayEpithelia.InvitroHumanAirwayEpithelia.ElectrophysiologicalMeasurements.第14页/共30页Results TheeffectsofthesecompoundsonCFandNon-CFEpithelia:1、ObservationsaboutGt:Fig.2.第15页/共30页Na+channel activity increased in CF epithelia?Amiloride

7、sensitive current in epithelia第16页/共30页Na+absorption in CF not exceed that in non-CF.Open-circuit Na+unidirectional and net Na+flux ratesFig.3.第17页/共30页2、Observations about IscFig.1.Fig.2.第18页/共30页3、Observations about VtFig.2.第19页/共30页Conclusion:AmiloridecausesgreaterVtandIscchangesinCFEpithelia第20页

8、/共30页 Excised Non-CF Epithelia Show Properties Similar to Those in Cultured Epithelia.Fig.2.第21页/共30页ParadoxicalFinding:VtamilandIscamilNotNa+ConductanceIncreasedinCF.Conclusion:CF/non-CFdifferencesinBasalVt,Vtamil,andIscamil?第22页/共30页Fig.2.Fig.4.Values of basal Vt,Vtamil,and Iscamil did not exceed

9、or were only slightly greater than those in non-CF第23页/共30页Fig.5.In Cl-free solutions,basal Vt,Vtamil,and Iscamil did not differ between CF and non-CF.Clfree solutions reduced basal Isc in both non-CF and CF第24页/共30页Effects of CFTRinh-172Fig.6.第25页/共30页Gt:Same in non-CF and CF Fig.7.第26页/共30页Discuss

10、ion CFAirwayEpitheliaHaveReducedAnionConductancebutNotIncreasedNa+Conductance.ThedataallowfourmainconclusionsaboutelectrolytetransportinCFvs.non-CFairwayepithelia.第27页/共30页First,CFairwayepitheliahaveamarkedlyreducedtrans-epithelialClconductanceunderbasalconditions.Second,non-CFepitheliahadsomeconsti

11、tutiveCFTRClConductanceunderbasalconditions.Third,themeasurementsofGt,apicalNa+current,and22Na+fluxesindicatethatNa+conductanceinCFepitheliadidnotexceedthatinnon-CFepithelia.Fourth,thepaperfoundthatbasalVt,VtamilandIscamilweregreaterinCFthaninnon-CFepithelia.第28页/共30页Thank you!娄本光 2011-11-3第29页/共30页感谢您的观看！第30页/共30页