免疫化学诊断技术的分类与局限63788.pptx
《免疫化学诊断技术的分类与局限63788.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《免疫化学诊断技术的分类与局限63788.pptx(53页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、免疫化学免疫化学診斷技术診斷技术的进展的进展 Automated Chemiluminescence SystemAutomated Chemiluminescence System利用抗原抗体反应和分离技术测定(量)与疾病有关的化学分子。免疫化学免疫化学診斷技术診斷技术pp免疫免疫免疫免疫同位素标记同位素标记同位素标记同位素标记測定測定測定測定法法法法pp化学发光法化学发光法化学发光法化学发光法酶联化学发光酶联化学发光偏振荧光偏振荧光时间分辨荧光时间分辨荧光电化学发光电化学发光直接化学发光直接化学发光免疫化学免疫化学診斷技术診斷技术的分类的分类 免疫免疫同位素标记同位素标记測定測定法法放射免
2、疫法已有放射免疫法已有3030多年历史。比较其它多年历史。比较其它传统的方法,它有特异性好,灵敏度传统的方法,它有特异性好,灵敏度高,准确性好,可靠性强等特点,故高,准确性好,可靠性强等特点,故在临床科研上广泛使用。在临床科研上广泛使用。免疫同位素標記法之局限免疫同位素標記法之局限 uu半衰期短;uu試劑批內与批間差异大;uu反應過程長;uu靈敏度有限;uu放射性廢物的處理;免疫免疫化学发光法化学发光法s s 酶联化学发光酶联化学发光s s 偏振荧光偏振荧光s s 时间分辨荧光时间分辨荧光s s 电化学发光电化学发光s s 直接化学发光直接化学发光免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介 -酶联化
3、学发光酶联化学发光(EMCLIA)EMCLIA)u原理:原理:抗体包被的塑料固相抗体包被的塑料固相加入待测样本加入待测样本-抗原抗原加入碱性磷酸酶标记的抗体加入碱性磷酸酶标记的抗体洗洗加入底物加入底物-4-4-Mup,Mup,发光发光u产品:产品:雅培雅培Axsym,Axsym,梅里埃梅里埃Vidas,Vidas,强生强生Vitros,Vitros,DPC Immulite 2000,DPC Immulite 2000,罗氏罗氏ESES300300u原理:原理:標記在小分子抗原上的熒光素經標記在小分子抗原上的熒光素經485485nmnm的激發偏振光照射的激發偏振光照射後,發出光子,經過偏振儀形
4、成後,發出光子,經過偏振儀形成525550525550nmnm的偏振光;的偏振光;這一偏振光的強度與熒光素受激發時分子轉動的速度呈這一偏振光的強度與熒光素受激發時分子轉動的速度呈反反比比,游離的熒光素標記抗原,分子小,轉動速度,游離的熒光素標記抗原,分子小,轉動速度快快,激發,激發後發射的光子散向四面八方,因此偏振光信號弱;後發射的光子散向四面八方,因此偏振光信號弱;在測定過程中待測抗原小分子,熒光標記抗原小分子和特在測定過程中待測抗原小分子,熒光標記抗原小分子和特導性沆體大分子同時加入到一反應杯中,待測抗原越少,導性沆體大分子同時加入到一反應杯中,待測抗原越少,與抗體競爭結合的量越少,而熒光
5、標記抗原與抗體結合就與抗體競爭結合的量越少,而熒光標記抗原與抗體結合就越多,而熒光標記的小分子抗原與大分子抗體結合後,其越多,而熒光標記的小分子抗原與大分子抗體結合後,其分子的轉動速度減分子的轉動速度減慢慢,由此熒光偏振信號,由此熒光偏振信號強強。u产品:雅培产品:雅培AxsymAxsym免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介 -偏振荧光偏振荧光(FPIA)FPIA)u原理:原理:标记物为三價稀土離子如标记物为三價稀土離子如:銪銪(EuEu3+3+)、釤釤(SmSm3+3+)、鏑鏑(Dy3+)Dy3+)和鋱和鋱(Tb3+)Tb3+)等,它們可利用具有雙功能基團結構等,它們可利用具有雙功能基團結構
6、的螫合劑,在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結合,形的螫合劑,在水溶液中與抗原分子以共軛雙鍵結合,形成稀土離子成稀土離子螫合劑螫合劑抗原結合物。抗原結合物。當當標記稀土離子的抗原標記稀土離子的抗原標記稀土離子的抗原標記稀土離子的抗原與與待測抗原待測抗原待測抗原待測抗原共同與抗體競爭結合,共同與抗體競爭結合,形成抗原抗體免疫復合物,其中含有標記稀土離子,然形成抗原抗體免疫復合物,其中含有標記稀土離子,然後利用時間分辨熒光分析儀,可測出復合物中稀土離子後利用時間分辨熒光分析儀,可測出復合物中稀土離子發射熒光的強度,以此確定待測抗原的含量發射熒光的強度,以此確定待測抗原的含量。u产品:产品:EG&GEG
7、&G的的DELFIADELFIA免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介 -时间分辨荧光时间分辨荧光(TRFIA)TRFIA)u原理:原理:先將特异性抗體包被在磁性微珠。另外將發光劑先將特异性抗體包被在磁性微珠。另外將發光劑 Ru Ru(bpy)(bpy)3 3 2+2+標記在特异性抗體上。標記在特异性抗體上。將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發光劑標記的抗體將待測樣本與包被抗體的磁性微珠和發光劑標記的抗體共同溫育,形成磁性微珠包被抗體共同溫育,形成磁性微珠包被抗體抗原抗原發光劑標記發光劑標記杭體復合物。杭體復合物。加入加入TPATPA緩沖液和緩沖液和TPATPA在電極表面進行電子轉移,產生電在電極
8、表面進行電子轉移,產生電化學發光。化學發光。u产品:产品:罗氏罗氏ElecsysElecsys免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介 -电化学发光电化学发光(ECLIA)ECLIA)免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介 -直接化学发光直接化学发光(CLIA)CLIA)u原理:原理:利用化學發光技術和磁性微粒子分離技術相結合的利用化學發光技術和磁性微粒子分離技術相結合的測定方法。以丫啶酯為發光的標記物,固相載體為極細小測定方法。以丫啶酯為發光的標記物,固相載體為極細小的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯免中的雙抗體夾的磁性顆粒。其測定原理與放射免疫和聯免中的雙抗體夾心法和競爭結合法相似。心法和競爭
9、結合法相似。單克隆抗體或抗原包被磁性微粒單克隆抗體或抗原包被磁性微粒抗原抗體結合,洗滌分離抗原抗體結合,洗滌分離加入氧化劑發光:經過加入氧化劑(加入氧化劑發光:經過加入氧化劑(H H2 2O O2 2)和和 pH pH 糾正糾正液(液(NaOHNaOH)使成鹼性,這時丫啶酯在不需要催化劑的情使成鹼性,這時丫啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發光,集光器和光電倍增管接收。記錄況下分解、發光,集光器和光電倍增管接收。記錄5 5秒秒鐘內所產生的光子能。鐘內所產生的光子能。u产品:产品:拜耳拜耳ACS:180SE,Advia Centaur,Advia IMSACS:180SE,Advia Centau
10、r,Advia IMS全全 自自 動動 化化 學學 發發 光光 系系 統統拜耳拜耳 ACSACS(A Automated C Chemiluminescence S System)免疫化学发光法简介免疫化学发光法简介 -直接化学发光直接化学发光(CLIA)CLIA)直接化學發光的机理直接化學發光的机理 -ACRIDINE ESTERACRIDINE ESTER丫啶酯丫啶酯u最 簡 易 u最 快 速 非常稳定;非常稳定;与抗体或抗原结合不与抗体或抗原结合不影响发光;影响发光;N+CH3BrCOOCH3CH3R丫啶酯丫啶酯丫啶酯丫啶酯 :在:在:在:在pH10pH10pH10pH10时,快速充分释
11、放光子。时,快速充分释放光子。时,快速充分释放光子。时,快速充分释放光子。丫啶酯丫啶酯 -ACRIDINE ESTERACRIDINE ESTER不需催化劑不需催化劑 穩定性高穩定性高 產光強產光強 線性好線性好 本底低本底低 反應快反應快 結合后不影響發光結合后不影響發光 靈敏度高靈敏度高-可達可達1010-15-15 摩爾摩爾直接化學發光的机理直接化學發光的机理丫丫丫丫 啶啶啶啶 酯酯酯酯 一一一一 秒秒秒秒 鐘鐘鐘鐘 直直直直 接接接接 閃閃閃閃 光光光光 ,強強強強 度度度度 是是是是 碘碘碘碘125 125 125 125 在在在在 一一一一 分分分分 鐘鐘鐘鐘 發發發發 出出出出
12、光光光光 子子子子 的的的的 十十十十 万万万万 倍倍倍倍0 06.06.05.05.02.02.01.01.00 0200,000200,000400,000400,000600,000600,000800,000800,0001,000,0001,000,0003.03.04.04.0秒秒100100200200300300400400500500600600直直 接接 閃閃 光光 慢慢 發發 光光 光光 強強 度度直接化學發光的机理直接化學發光的机理直直 接接 閃閃 光光 慢慢 發發 光光 直接化學發光的机理直接化學發光的机理由由由由 于于于于 超超超超 低低低低 本本本本 底底底底,直
13、直直直 接接接接 化化化化 學學學學 發發發發 光光光光 具具具具 有有有有 高高高高 靈靈靈靈 敏敏敏敏 性性性性Tracer Concentration(moles/L)sensitivity limitof fluorescencesensitivity limit ofchemiluminescenceFluorescenceFluorescenceBackground Noise LevelBackground Noise LevelChemiluminescenceChemiluminescenceBackground LevelBackground Level 10109 98
14、87 76 65 54 43 32 21 10 01010-15.51010-171010-161010-151010-141010-131010-121010-101010-91010-81010-11RelativeRelative LightLight IntensityIntensitytracer signal直接化學發光的机理直接化學發光的机理直直直直 接接接接 化化化化 學學學學 發發發發 光光光光 不不不不 受受受受 pHpHpHpHpHpH 和和和和 溫溫溫溫 度度度度 影影影影 響響響響n n減輕漂移減輕漂移n n提高重复性提高重复性0 0 0 02020202040404
15、04060606060808080801001001001001201201201208 8 8 89 9 9 9101010101 1 1 11 1 1 11212121213131313pHpHpHpHpHpHpHpHpHpHpHpHTemperature Degrees CTemperature Degrees CTemperature Degrees CTemperature Degrees C120120120120100100100100808080806060606040404040202020200 0 0 01515151520202020252525253030303035
16、35353540404040直直 接接 閃閃 光光慢慢慢慢 發發發發 光光光光 直直直直 接接接接 閃閃閃閃 光光光光慢慢慢慢 發發發發 光光光光RelativeRelativeRelativeRelative LIghtLIght LIghtLIght Intensity(%)Intensity(%)Intensity(%)Intensity(%)溫溫溫溫溫溫溫溫 度度度度度度度度 RelativeRelativeRelativeRelative LightLightLightLight IntensityIntensityIntensityIntensity丫啶丫啶 酯直接發光酯直接發光C
17、L(AE)CL(AE)電電 化化 學學 發發 光光 ECL(TU+TPA)ECL(TU+TPA)信 號 的 產 生丫啶 酯 与 H2 O 2 的 簡 單反 應需 三 個 電 板 去 激 發 由 几 個分 子 態 參 加 的 复 雜 反 應速 度不 到 2 秒5 秒,但 洗 電 极 需 40 60 秒靈 敏 度10-15 M,足 以 滿 足 免疫 試 驗 的 要 求10-11-10-17 M本 底极 低較 高,過 剩 的 TPA會 發 光特 异 性不 受 溫 度 与 pH 的影響受 pH,金 屬 及 螯 合 物 影 響直接化學發光与电化學發光比较直接化學發光与电化學發光比较丫啶丫啶丫啶丫啶 酯直
18、接發光酯直接發光酯直接發光酯直接發光CL(AE)CL(AE)CL(AE)CL(AE)電電電電 化化化化 學學學學 發發發發 光光光光 ECL(TU+TPA)ECL(TU+TPA)ECL(TU+TPA)ECL(TU+TPA)信信 號號 的的 產產 生生丫啶丫啶 酯酯 与与 H H2 2O O2 2 的的 簡簡 單單反反 應應需需 三三 個個 電電 板板 去去 激激 發發 由由 几几 個個分分 子子 態態 參參 加加 的的 复复 雜雜 反反 應應速速 度度不不 到到 2 2 秒秒5 5 秒,秒,但但 洗洗 電電 极极 需需 40-60 40-60秒秒靈靈 敏敏 度度10-10-1515 M M,足
19、,足 以以 滿滿 足足免疫免疫 試試 驗驗 的的 要要 求求1010-11-11 -10-10-1717 M M本本 底底极极 低低較較 高,過高,過 剩剩 的的 TPATPA 會會 發發 光光特特 异异 性性不不 受受 溫溫 度度 与与 pH pH 的的影響影響受受 pH,pH,金金 屬屬 及及 螯螯 合合 物物 影影 響響微顆粒微顆粒粗顆粒粗顆粒 Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Yu功能功能抗原抗体反應相抗原抗体反
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 免疫化学 诊断 技术 分类 局限 63788
限制150内