实验七稀释平板计幻灯片.ppt

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1、实验七实验七 稀释平板计稀释平板计第1页，共12页，编辑于2022年，星期五一、实验目的一、实验目的l掌握活菌计数的基本原理及方法l掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法第2页，共12页，编辑于2022年，星期五二、实验原理二、实验原理-稀释平皿计数法稀释平皿计数法l将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来，计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌数。l每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体积）稀释倍数第3页，共12页，编辑于2022年，星期五二、实验原理二、实验原理-土壤中真

2、菌的分离纯化土壤中真菌的分离纯化l马丁孟加拉红-链霉素培养基马丁培养基孟加拉红链霉素第4页，共12页，编辑于2022年，星期五三、实验器材三、实验器材（一）培养基1、牛肉膏蛋白胨培养基2、马丁孟加拉红-链霉素培养基（二）其他1、无菌培养皿2、无菌吸管3、无菌水（三）仪器1、超净工作台2、玻璃刮铲3、酒精棉球第5页，共12页，编辑于2022年，星期五四、实验步骤四、实验步骤-稀释平板计数法稀释平板计数法1 1、熔化培养基、熔化培养基2 2、倒平皿、倒平皿3 3、梯度稀释法稀释原菌样品、梯度稀释法稀释原菌样品第6页，共12页，编辑于2022年，星期五四、实验步骤四、实验步骤4 4、涂平皿：、涂平皿

3、：选取选取1/101/106 6,1/10,1/107 7,1/10,1/108 8三个稀释度计数，每皿取菌液三个稀释度计数，每皿取菌液0.1ml0.1ml，用玻璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一个重复。，用玻璃刮铲涂布均匀，每个稀释度做一个重复。5 5、3737倒置培养倒置培养2 2天天6 6、计数：、计数：每每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU（同一稀释度平板上菌落平均数（同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数）稀释倍数）/原菌样品体积（原菌样品体积（ml）第7页，共12页，编辑于2022年，星期五菌落计数规则：菌落计数规则：（一）选择平均菌

4、落数在（一）选择平均菌落数在30300间的平板间的平板1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数平均菌落数乘以稀释倍数报告；乘以稀释倍数报告；2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值）：的值）：1）若）若0.5比值比值2，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。，以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。2）若）若2比值或比值比值或比值 0.5，则取其中较少的菌落总数进行报告。，则取其中较少的菌落总数进行报告。（二）所有菌落数均不在（

5、二）所有菌落数均不在30300间间以最接近以最接近30或或300的平均菌落数乘稀释倍数的平均菌落数乘稀释倍数1、若所有稀释度的菌落平均数均大于、若所有稀释度的菌落平均数均大于300，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释，则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告；倍数报告；2、若所有稀释度的菌落平均数均小于、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以，则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告；稀释倍数报告；第8页，共12页，编辑于2022年，星期五四、实验步骤四、实验步骤-从土壤里分离真菌从土壤里分离真菌1 1、熔化培养基、熔化培养基2 2、倒平皿、倒平皿3 3

6、、捻碎土样，将土样溶解在、捻碎土样，将土样溶解在90ml90ml无菌水三角瓶中无菌水三角瓶中4 4、梯度稀释法稀释土样、梯度稀释法稀释土样10g90ml10-110-210-310-410-5第9页，共12页，编辑于2022年，星期五4 4、涂平皿：、涂平皿：每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液每个稀释度均需要涂布平皿，每皿取菌液0.1ml0.1ml，用玻，用玻璃刮铲涂布均匀。璃刮铲涂布均匀。5 5、28倒置培养倒置培养37天天6 6、观察并描述真菌菌落特征、观察并描述真菌菌落特征第10页，共12页，编辑于2022年，星期五五、实验结果及分析五、实验结果及分析l稀释平皿计数法：稀释平皿计数法：稀释倍数106107108菌落数每每ml原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，原菌样品中微生物的活细胞数（菌落形成数，CFU（同一稀释度平板上菌落平均数（同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数）稀释倍数）/原菌样品体积（原菌样品体积（ml）第11页，共12页，编辑于2022年，星期五l描述酵母菌菌落特征：l描述霉菌菌落特征第12页，共12页，编辑于2022年，星期五