白血病免疫分型.pptx

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1、应用目的：l 确定淋巴系病变的起源和分化程度；l 鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病；l 确定髓系白血病各亚型；l 对形态学分类不明细胞进行定性；l 诊断急性未分化型白血病；l 诊断急性混合细胞白血病；l 诊断微小残留白血病或白血病浸润；l 判断白血病/淋巴瘤预后。第1页/共34页 流式细胞术(Flow Cytometry):对高速流过检测区的单个细胞或生物颗粒进行多参数、快速分析（或分选）的一种技术。第2页/共34页第3页/共34页数据显示方式：单参数直方图 双参数二维点图 等高图 二维密度图 三维图第4页/共34页单参数直方图双参数点图第5页/共34页荧光素FITC(异硫氰酸荧光素）：5

2、30nm（绿）PE（藻红蛋白）：575nm（橙黄）PI(碘化丙啶）：620nm（橙红）PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：675nm（深红）APC(别藻兰蛋白）：660nm（红）第6页/共34页 检测物：细胞表面、胞浆或胞核抗原性物质第7页/共34页CD（cluster of differentiation）：1982年起将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个分化群，并进行流水编号。一个CD相关抗体可包含多个克隆号。其他非CD系列抗原：如TCR、HLA等第8页/共34页正常血细胞中的抗原表达特点1.系列保守性2.时序性3.抗原表达量的模式化第9页/共34页干细胞嗜碱性细胞嗜酸性

3、细胞定向髓系干细胞红系巨核系粒单核系粒系单核系CD36 CD71 CD235aCD41 CD42a/b CD61CD4 CD11b CD14 CD64 HLA-DRCD36CD15 CD71 CD16(TDT CD7)CD34 CD117 CD13 CD33CD38 MPOCD34 CD13 CD33 CD117MPO第10页/共34页抗原刺激干细胞早前B前B静止期BPro-B ALLPre-B ALLCommon-B ALLCLL/SLL免疫母细胞浆细胞样淋巴细胞大B细胞淋巴瘤淋巴浆细胞淋巴瘤外套细胞滤泡区母细胞中心母细胞中心细胞边缘带细胞浆细胞套细胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤大B细胞淋巴瘤滤泡淋巴

4、瘤边缘带淋巴瘤骨髓瘤TDT+CD34+cCD79a+CD19+CD10 c-TDT+CD34+cCD79a+CD19+CD20 CD10+c-TDT+CD34 cCD79a+CD19+CD20+CD10 c+CD5+CD19+CD20 CD22+CD23+sIg+FMC7-CD38 CD138 CD56 cIg CD19-CD45-CD22+CD5-CD10-CD23-CD22+CD10+FMC7+CD23 bcl-2+CD5-CD19+CD20+CD22+CD38+IgM+sIg+CD22+CD10+sIg+CD34-TDT-CD5+CD22+sIg+FMC7+Cyclin D1+CD23-

5、CD22+bcl-6+CD10 CD5 CD30 第11页/共34页干细胞胸腺期胸腺期TDT+CD34+CD2cCD3CD7CD71TDT+CD34CD1aCD2cCD3CD7CD4CD8胸腺期TDT+CD2CD3CD5CD7CD4/CD8TCRPrecursor-T ALL成熟T细胞各分化群第12页/共34页 造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的分化发育阶段密切相关，表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。第13页/共34页白血病细胞中的抗原表达特点 表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具有以下特点：1.跨系表达 2.时相混乱 3.抗原表达量的改

6、变第14页/共34页免疫分型四种急性白血病单表型急性白血病表达某一个系列抗原为主的急性白血病双表型/双克隆急性白血病未分化型急性白血病第15页/共34页各系急性白血病重要抗原指标1.急性淋巴细胞白血病(AL)敏感性 特异性B-ALL:CD19 100%非特异cCD79a 99%特异T-ALL:CD7 100%非特异cCD3 100%特异第16页/共34页2.急性髓细胞白血病(AML)表达率 特异性CD13 70%非特异CD33 70%非特异CD117 70%特异cMPO 70%特异第17页/共34页错译表达（Ly+AML，My+ALL）：白血病细胞表达非本系细胞抗原标志物，具有预后意义。第18

7、页/共34页ALL CD13，CD33t(9;22)AML CD2+，DR-M3 t(15;17)，或RAR+，t(11;17)CD2+，DR+M4Eo inv(16)或 t(16;16)CD19+M0t(9:22)多见 M2t(8;21)TdT+,CD7+见于M0 CD56+M5/M4第19页/共34页双表型急性白血病记分系统分值 B系 T系 髓系 2 cCD79a cCD3 cMPO CD22 TCR cIgM TCR 1 CD19 CD2 CD117 CD10 CD5 CD13 CD20 CD8 CD33 0.5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD64第20页/共

8、34页部分慢性B淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型 CD5CD5CD10CD10CD19CD19CD22CD22CD23CD23HLA-DRHLA-DRFMC7FMC7SIgSIgCD11cCD11cCLLCLL+-+/-+/-+-+/-+/-PLLPLL-+-+-MCLMCL+-/+-/+-+-HCLHCL-+-+FCLFCL-+-/+-/+/-+/-+-MZLMZL-+-+/-+/-LPLLPL-+-/+-/+-/+-/+注：注：HCL CD103+CD25+HCL CD103+CD25+第21页/共34页部分慢性T淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型CD2CD2CD3CD3CD5CD5CD7CD7CD

9、4CD4CD8CD8CD25CD25CD56CD56CD57CD57T-CLL/PLLT-CLL/PLL+/-+/-/+-/+-T-LGLT-LGL+/-+/-+/-+/-+-/+-/+NK-LGLNK-LGL+-+/-+/-+-ATLATL+-+肝脾T细胞淋巴瘤：CD2+CD3+CD7+TCR+CD16+/-CD56+/-CD8-/+CD4-TCR-第22页/共34页标本种类：怀疑含有病变细胞的组织或体液，如外周血、骨髓、胸腹水、脑脊液、淋巴结等。标本要求：细胞有活性，最好不要超过48h。第23页/共34页光散射特征与细胞形态的关系第24页/共34页淋巴单核粒细胞CD45CD45M4/M5M

10、 3正常白血病L13,M02 M6,M7TSSCSSCMM 非造血 来源细胞CD45在免疫分型中的应用意义原始嗜碱嗜酸第25页/共34页正常骨髓第26页/共34页AML-M1AML-M1AML-M2AML-M2AML-M3AML-M3AML-M4/M5AML-M4/M5第27页/共34页AML-M6AML-M6非造血细胞非造血细胞非特异性染色（死亡细胞）非特异性染色（死亡细胞）ALLALL第28页/共34页分类不明细胞分类不明细胞第29页/共34页B B细胞克隆性细胞克隆性第30页/共34页结果报告第31页/共34页 白血病免疫分型其他方法：酶-底物显色 荧光显微镜 第32页/共34页谢谢谢谢第33页/共34页感谢您的观看。第34页/共34页