热原检查法程春雷.pptx

《热原检查法程春雷.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《热原检查法程春雷.pptx（31页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、主要内容热原检查法的简介具体的修订内容修订的背景热原检查的适用性研究体外热原检查法第1页/共31页热原检查法的简介-1热原（PyrogenPyrogen）的含义 指临床上能使哺乳类动物产生热原反应的物质的总称。其本质系指某些药品中含有的能引起体温升高的杂质。The term derives from the greek word“pyros”(fire)and was apparently used first by Billbroth第2页/共31页热原的种类第3页/共31页热原检查法简介-2热原反应 因输注药液引起病人发热、寒战、头痛、昏迷、休克甚至死亡等反应。热原经静脉注入人体后15分钟

2、即能产生强烈的发热反应，重者昏迷甚至危及生命第4页/共31页热原检查法简介-3热原反应机理 热原进入人体循环系统后，刺激人外周血单核细胞和巨噬细胞释放细胞因子(即内致热原)如白介素1(IL-1)1(IL-1)、白介素6(IL-6)6(IL-6)、白介素8(IL-8)8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF(TNF)等。内热原性细胞因子作为信号分子通过 PGPGE E2 2 （神经中枢内引起发热的重要“终介质”）传导信号，提高视丘下部的温度调定点，激发体温调节机制使体温升高，体温过高可使人休克，甚至死亡第5页/共31页热原物质及发热机理第6页/共31页热原检查法简介-4 20 20世纪2020年代S

3、eibertSeibert采用家兔动物模型，通过系列实验证明了引起注射发热的物质来源于细菌，其对热稳定，并可通过滤器。之后，SeibertSeibert和其同事共同建立了用于检测药品终产品质量的热原试验第7页/共31页热原检查法简介-519411941年美国药典修订委员会首次组织了对热原的协作研究，有FDAFDA、NIHNIH和1414个药厂参加，使用253253只家兔进行了33003300次实验，研究结果于19431943年发表，并促使19421942年USPUSP第1212版首次正式收载家兔热原实验方法，为注射用药提供了一个有效和可靠的热原检测手段我国19531953年第一版药典收载了家兔

4、热原检测方法第8页/共31页热原检查法定义：本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。第9页/共31页 2010 版与2005版区别2010版2005版1、体重体重1.7kg以上以上（三部未改变）（三部未改变）体重体重1.73.0kg2、其中升温达其中升温达 0.6的的家兔应休息家兔应休息2周以周以上上 3、_*每一家兔的使用次数，用每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应于一般药品的检查，不应超过超过10次。次。*三部仍规定，对血液制品、抗毒素和其他同一过敏原的供试品在5天内可重复使用1次。第10页/共31

5、页2010版2005版4、在、在做做热原检查前热原检查前1-2日日 在在作作热原检查前热原检查前1-2日日5、温度相差不得大于、温度相差不得大于3，且应控制在，且应控制在1725（指实验室和饲养室）（指实验室和饲养室）实验室和饲养室的温度相实验室和饲养室的温度相差不得大于差不得大于5，实验室，实验室的温度应在的温度应在17256、实验室温度变化不得、实验室温度变化不得大于大于3应注意应注意实验室温度变化不实验室温度变化不得大于得大于3 2010 版与2005版区别第11页/共31页 2010 版与2005版区别 2010版 2005版7、应应防止动物骚动防止动物骚动防止动物骚动防止动物骚动8、

6、置于、置于宽松宽松适宜的装适宜的装置中置中置于适宜的装置中置于适宜的装置中9，深度一般约，深度一般约6cm，时，时间不得少于间不得少于1.5分钟分钟时间不得少于时间不得少于1分半分半钟钟10、且、且同组同组各兔间正常各兔间正常体温之差不得超过体温之差不得超过1且各兔间正常体温且各兔间正常体温之差不得超过之差不得超过1 第12页/共31页2010版2005版11、与供试品接触的试、与供试品接触的试验用器皿应无菌、验用器皿应无菌、无热原。去除热原无热原。去除热原通常采用干热灭菌通常采用干热灭菌法（法（250、加热、加热30分钟分钟），也可采），也可采用其他适宜的方法用其他适宜的方法试验用器的注射器

7、、针试验用器的注射器、针头及一切与供试品溶液头及一切与供试品溶液接触接触 的器皿，应置烘箱的器皿，应置烘箱中用中用250加热加热30分钟分钟，也可采用其他适宜的方也可采用其他适宜的方法除去热原法除去热原 2010 版与2005版区别第13页/共31页2010版2005版12、3只家兔体温升高只家兔体温升高总和低于总和低于1.3（三部未变，仍为（三部未变，仍为1.4）13、高于高于0.6，低于低于3.5 3只家兔体温升高总和只家兔体温升高总和低于低于1.4 0.6 以上，以上，3.5 以以下下2010 版与2005版区别第14页/共31页修订背景、热原实验是一个整体的动物实验，易受许多因素的影响

8、。动物自身的行为、生理、外部环境以及一些实验过程等都可影响结果的准确性。、对家兔体重取消了上限3.0kg3.0kg，同时取消家兔使用次数不超过次的规定。（与国外药典一致、提高家兔利用率、灵敏度不受影响）第15页/共31页 修订背景、增加了升温达0.6 的家兔应休息2 周以上新要求。（防止假阳性）4、实验环境要求更加严格：实验室与饲养室温度相差由不大于 5 改为3 5、强调同组各家兔间温差不大于1，对家兔固定方式：宽松。第16页/共31页6、判定标准更加严格：初试的3只家兔体温升高总和低于 1.4 改为低于1.3。3只1.3计合格限值平均0.4333），纠正了初试时合格要求值（3只1.4计平均0

9、.4633）大于复试后合格要求值（8只3.5计平均0.4375）的不合理性。本修改相应提高了复试率，判断标准基本一致，提高了结果的可靠性。标准要求稍低于美国药典，但高于英国、日本、欧洲药典。修订背景第17页/共31页实验用兔灵敏度测试每年不定期随机抽取体重和使用次数不同的实验用兔，按热原检查法要求注射EU/kg或10EU/kg内毒素标准品，应得到不符合规定的结果。第18页/共31页热原检查适用性研究新品种建立热原检查标准时，建议进行适用性研究，在不影响家兔正常生理的前提下，按人用每公斤体重每小时最大供试品剂量的倍设定限值。（化学药品一般为倍，中药为倍）。第19页/共31页热原检查适用性研究适用

10、性试验时设三组：限值剂量的供试品组 10EU/kg内毒素组含10EU/kg内毒素的供试品组。适用性试验判定：组符合规定，、组不符合规定表明该品种可建立热原检查项。第20页/共31页体外热原检查法体外热原检查法建立一种更合理、更适宜的热原检测模型，为药典提供一个完善可行的热原检测替代及补充方法。该研究对于提升我国药品质量控制的总体能力，避免今后国际贸易中的相关技术壁垒具有重大现实意义和社会价值。第21页/共31页家兔法：费用高家兔法：费用高 结果重复性差结果重复性差 使用活体动物实验使用活体动物实验 传统热原检测方法的不足内毒素法：只能检测细菌内毒素内毒素法：只能检测细菌内毒素 鲎资源日益匮乏鲎

11、资源日益匮乏 第22页/共31页 随着各种新技术产品的出现及现有方随着各种新技术产品的出现及现有方法存在的问题，传统热原检测方法日趋法存在的问题，传统热原检测方法日趋落后，不适应于产品的热原检测。落后，不适应于产品的热原检测。第23页/共31页 外热原 人体（分泌内热原）体温调节中枢 发热 新方法主要以应用动物来源或人源细胞模拟人体，通过检测内源性热原（主要为细胞因子，如IL-6、IL-1、TNF-）在体外进行热原检测。新方法原理细胞（分泌内热原）第24页/共31页新方法国外研究现状 国外对新方法的研究始于国外对新方法的研究始于2020世纪世纪8080年代，国际发达国家实验室，包括英国年代，国

12、际发达国家实验室，包括英国国家生物制品检定所国家生物制品检定所NIBSCNIBSC、德国国家疫苗及血清研究所、德国国家疫苗及血清研究所PEIPEI等，均对新的体外等，均对新的体外热原检测替代方法开展了研究。热原检测替代方法开展了研究。第25页/共31页 2010 2010版欧洲药典已收录了版欧洲药典已收录了5 5种新体外热原检测方法：种新体外热原检测方法：人新鲜全血人新鲜全血IL-1IL-1法法 人新鲜全血人新鲜全血IL-6IL-6法法 人冻存全血人冻存全血IL-1IL-1法法 MM6MM6细胞细胞IL-6IL-6法法 PBMCPBMC细胞细胞IL-6IL-6法法第26页/共31页新方法优点

13、不使用动物进行体内实验不使用动物进行体内实验 能真实地模拟人体对热原的反应能真实地模拟人体对热原的反应 能检测非内毒素热原能检测非内毒素热原 能定量或半定量能定量或半定量 能被广泛地应用能被广泛地应用 操作简单可行操作简单可行第27页/共31页新方法国内研究现状国内对新方法的研究与国际相比有一定差距，国内对新方法的研究与国际相比有一定差距，20102010版中国药典未收录新热版中国药典未收录新热原检测方法。原检测方法。国家药典委员会已经启动了体外热原检查法的课题，山东所是课题组成员国家药典委员会已经启动了体外热原检查法的课题，山东所是课题组成员之一。之一。第28页/共31页已开展的研究方法 兔新鲜全血法兔新鲜全血法 鼠新鲜全血法鼠新鲜全血法 人新鲜全血法人新鲜全血法 人冻存全血法人冻存全血法 PBMCPBMC细胞法细胞法第29页/共31页第30页/共31页感谢您的观看！第31页/共31页