最经典的使用说明书幻灯片.ppt
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1、最经典的使用说明书第1页,共64页,编辑于2022年,星期六BioEdit简介简介BioEdit是一个性能优良的免费的生物序列编辑器,可在Windows 95/98/NT/2000中运行,它的基本功能是提供蛋白质、核酸序列的编辑、排列、处理和分析。与DNAMAN相比,其分析内容相对丰富一些,而且提供了很多网络程序的分析界面和接口,与DNAMAN等软件配合使用更好。尤其值得一提是利用BioEdit能够十分方面地根据指定的核酸序列绘制相应的质粒图谱。第2页,共64页,编辑于2022年,星期六序列的常规操作:序列的常规操作:序列输入序列输入序列输入序列输入:多种序列输入方式;序列分类序列分类序列分类
2、序列分类:按标题、位置、定义、参数、注释等分类;成对排列成对排列成对排列成对排列:两序列的最佳排列及计算同一性和类似性;序列屏蔽序列屏蔽序列屏蔽序列屏蔽:仅采用联配中部分区域进行分析而排除其他。核酸分析核酸分析核酸分析核酸分析:组成、互补、反转、翻译、质粒、限制性内切酶;蛋白质分析蛋白质分析蛋白质分析蛋白质分析:氨基酸成分、疏水性轮廓、疏水力矩平均数翻译或反翻译翻译或反翻译翻译或反翻译翻译或反翻译:把DNA或RNA翻译成蛋白质;切换翻译切换翻译切换翻译切换翻译:在核酸和编码蛋白质序列中切换核苷酸序列;点图点图点图点图成对比较成对比较:相互比较两序列的矩阵,生成一个点图。第3页,共64页,编辑于
3、2022年,星期六 BLASTBLAST本地使用BLASTo创建本地数据库o本地BLAST搜寻BLASTINTERNET客户端程序 ClustalWClustalW 使用互联网工具使用互联网工具使用互联网工具使用互联网工具HTMLBLAST网络浏览器PSI-BLASTnnPredict 进化分析进化分析进化分析进化分析第4页,共64页,编辑于2022年,星期六主要内容主要内容 绘制质粒图绘制质粒图绘制质粒图绘制质粒图 限制性内切酶图限制性内切酶图限制性内切酶图限制性内切酶图 蛋白质分析蛋白质分析蛋白质分析蛋白质分析 组成分析组成分析组成分析组成分析熵图熵图熵图熵图疏水性轮廓疏水性轮廓疏水性轮廓
4、疏水性轮廓联配中搜寻保守区联配中搜寻保守区联配中搜寻保守区联配中搜寻保守区 根据密码子的使用翻译核苷酸根据密码子的使用翻译核苷酸根据密码子的使用翻译核苷酸根据密码子的使用翻译核苷酸 RNARNARNARNA比较分析比较分析比较分析比较分析共变共变共变共变潜在配对潜在配对潜在配对潜在配对互交信息分析互交信息分析互交信息分析互交信息分析 第5页,共64页,编辑于2022年,星期六一、绘制质粒图(一、绘制质粒图(Plasminddrawing)使用BioEdit质粒绘图功能,序列可以通过自动的位置标记,自动修改成环形质粒。特征、多连接位点和限制性位点可以通过使用对话框增加。当将一个序列进入质粒图时,
5、在背景上出现一个限制性内切酶图谱,所以可以通过对话框选择可以增加限制性位点。它们自动增加到当前的位点。质粒功能提供简单的绘制和标记工具。标签和绘图可以通过鼠标移动和缩放。想要编辑目标性质,双击目标。想要从一个DNA序列产生一个质粒,从“Sequence”菜单中“NucleicAcid”子菜单中选择“CreatePlasmidfromSequence”选项。选择这个选项时,限制性内切酶图谱将会使用通常商业化的,储存在存储器中的限制性内切酶。质粒第一次产生时,它显示成有10个位点标记的圆圈,中央是标题。第6页,共64页,编辑于2022年,星期六第7页,共64页,编辑于2022年,星期六1.Rest
6、rictionsites:(限制性位点限制性位点)想 要 增 加 限 制 性 位 点,从“Vector”菜 单 中 选 择“RestrictionSites”选项。将会显示一下对话框:第8页,共64页,编辑于2022年,星期六想要显示图谱中的限制性内切酶,从右边(“DontShow”中)选择任何想要的酶,用按钮将它们移动到左边。按下“Apply&Close”时,这个位点就会增加到图谱中。指定的酶如果只有一个酶切位点,就会在酶切位点上出现一个“U”。如果没有“U”,将会显示第一个酶切位点。想要移动图谱中酶的位置,在“Show”中增加选择的酶的亮度,按下按钮将它们移动另一边。第9页,共64页,编辑
7、于2022年,星期六2.Positionalmarks(位置标记位置标记):点击“Vector”菜单中的“PositionalMarks”选项,可以出现以下对话框:可以通过移动位置标记到“Show”中,单独增加位置标记,或者设定应用的分割标记数量。想要没有标记,选择“Divideinto:”中的下拉菜单顶端的“None”。第10页,共64页,编辑于2022年,星期六3.Features(特征特征):想要增加一个特征,如抗生素抵抗标记,从“Vector”菜单选择“AddFeature”。将显示以下对话框:选择的类型是“NormalArrow”、“WideArrow”、“NormalBox”和、“
8、WideBox”。在上面例子中的所有特征是“常规”宽度的。如果特征是一个箭头,箭头的方向将是从起点位置到终点位置。增加特征或酶时,他们各自的标记增加在外面,中心是可能的尺寸。标记可以被选择工具选择、移动、编辑和缩放。第11页,共64页,编辑于2022年,星期六4.GeneralVectorproperties4.GeneralVectorproperties载体属性可通过选“Vector”菜单中的“Properties”来更改:第12页,共64页,编辑于2022年,星期六可以通过指定起点和末端位置,来增加多接头按钮。多接头显示为“CourierNew”字体。在这个对话框中,特征可以被编辑、增加
9、或者删除。想 要 编 辑 或 删 除 一 个 现 存 的 特 征,在“Features”下拉式菜单中选择特征,并点击合适的按钮。点击“AddNew”按钮,可以增加一个新的特征。现在只有一个圆形、单链质粒是有效的。在以后的版本中中将会改进。“Font”按钮改变指示的默认字体。特征标记的字体将可以单独改变,但是位置标记不能单独改变。第13页,共64页,编辑于2022年,星期六二、二、RestrictionMaps(限制性内切酶图限制性内切酶图)BioEdit提供两种方法产生核苷酸序列的限制性内切酶图。一种内在的限制性内切酶图功能允许产生序列最多为65,536个核苷酸的限制性内切酶图。实际上,只能检
10、测大约35Kb,而且在速度慢的计算机上会要消耗很长的时间。你也可以通过万维网直接链接到WebCutter限制性内切酶图上。第14页,共64页,编辑于2022年,星期六1.1.WebCutterWebCutter:点亮你想要图谱的序列标题,从“WorldWideWeb”菜单中选择“Auto-fedWebCutterRestrictionMapping”第15页,共64页,编辑于2022年,星期六2.BioEdit:2.BioEdit:点亮你想要图谱的序列标题,从“Sequence”菜单选择“RestrictionMap”。以下选项将会显示在一个界面窗口:第16页,共64页,编辑于2022年,星期
11、六 显示图谱显示图谱显示图谱显示图谱:显示或省略序列的全图谱,互补链显示每个酶的酶切位点.默认值:yes 按照字母顺序排列名称按照字母顺序排列名称按照字母顺序排列名称按照字母顺序排列名称:显示关于所有内切酶、它们的识别序列、切割频率和所有位置(5末端开始是1)的列表.默认值:yes 位置数位置数位置数位置数:关于酶切位点的列表.默认值:no 唯一位点列表唯一位点列表唯一位点列表唯一位点列表:在全部序列中只有一个酶切位点的内切酶列表.默认值:no 切割切割切割切割5 5 5 5次或更少的酶次或更少的酶次或更少的酶次或更少的酶.默认值:yes 频率汇总表频率汇总表频率汇总表频率汇总表:关于所有正确
12、选择的内切酶和它们切割序列的次数。默认值:no 不能切割的内切酶不能切割的内切酶不能切割的内切酶不能切割的内切酶。默认值:yes 4-4-4-4-碱基内切酶碱基内切酶碱基内切酶碱基内切酶:想要包括这些酶,必须点击这个选项.默认值:no(不包括本身)5-5-5-5-碱基内切酶碱基内切酶碱基内切酶碱基内切酶:与4-base cutters相同.非严格识别序列的酶非严格识别序列的酶非严格识别序列的酶非严格识别序列的酶:有时你可排除它们.默认值:yes 大的识别位点大的识别位点大的识别位点大的识别位点:通常用于克隆,只有共同的6-碱基识别酶被使用.同裂酶同裂酶同裂酶同裂酶:若只显示一个特殊识别位点的一
13、个内切酶,不选(默认值=不选择).翻译翻译翻译翻译:显示沿着排列中的序列翻译(5端到3端的由左到右的翻译)互补翻译互补翻译互补翻译互补翻译:互补链的翻译方向相反.编号方式编号方式编号方式编号方式:是酶切位点的核酸的号码,而不是识别位点的起点.第17页,共64页,编辑于2022年,星期六3.RestrictionEnzymeBrowser(3.RestrictionEnzymeBrowser(限制性内切酶浏览器限制性内切酶浏览器限制性内切酶浏览器限制性内切酶浏览器)从核酸序列中得到内切酶谱时,显示酶的生产公司是很有用的。通过在内切酶图谱中选择制造厂商和按下按钮,可以手动浏览内切酶。你也可以通过选
14、择“Options”菜单中的“ViewRestrictionEnzymesbyManufacturer”选择,在任何时候检查内切酶。显示如右对话框:第18页,共64页,编辑于2022年,星期六在这个例子中,所有来源于Stratagene的限制性内切酶显示在左边的列表中,KpnI的亮度增加。KpnI的识别序列显示在顶端,同裂酶显示在它的下方,其他提供KpnI的公司显示在同裂酶的下方。BioEdit使用ReBase提供的gcgenz表,限制性内切酶数据在万维网的地址是:http:/ ReBase 下 载 最 新 的 gcgenz 表,将 其 命 名 为“enzyme.tab”,并 且 替 代 在B
15、ioEdit安 装 文 件 夹 中“tables”目录下的旧文件。注意注意注意注意:表必须是gcgenz格式的。你可以从tables文件夹中打开“enzyme.tab”文件查看格式,或者查看“RestrictionMaps”。限制性内切酶表格文件名必须是“enzyme.tab”,而且必须在BioEdit的“tables”文件夹里。第19页,共64页,编辑于2022年,星期六1.1.1.1.氨基酸的组成氨基酸的组成氨基酸的组成氨基酸的组成从“Sequence”菜单下进入“Protein”,再进入“aminaacidcomposition”,可对序列的氨基酸组成分析,结果以摘要和图例的形式给出。图
16、例中的柱形条表示每种氨基酸在序列中的摩尔比,如下图:三、蛋白质分析第20页,共64页,编辑于2022年,星期六以RGDVRGDVRGDVRGDV的minoroutercapsidproteinminoroutercapsidproteinAAS66885AAS66885AAS66885AAS66885为例:第21页,共64页,编辑于2022年,星期六2.2.2.2.熵图熵图熵图熵图在联配文件中有专栏用熵图来衡量可变性。它衡量的是在联配中每个位置的“信息量”的缺乏。准确地说,是每个位置的可预测性的缺乏。第22页,共64页,编辑于2022年,星期六3.3.疏水性轮廓疏水性轮廓(profile)(p
17、rofile)平均疏水性轮廓采用Kyte&Doolittle的方法,平均分值(总和/窗口大小)作为序列中各个位置的疏水性值,并以窗口中中间残基的疏水性值作图。第23页,共64页,编辑于2022年,星期六4.4.瞬间疏水性轮廓瞬间疏水性轮廓(hydrophobic moment profilehydrophobic moment profile)第24页,共64页,编辑于2022年,星期六5.5.平均瞬间疏水性轮廓平均瞬间疏水性轮廓第25页,共64页,编辑于2022年,星期六6.在联配中搜寻保守区在联配中搜寻保守区有时,即使序列之间的变化很大时,在几个序列中搜寻保守区是有用的。例如,根据一系列同
18、源序列发现通用的PCR引物。BioEdiot查找的是低平均“熵”的区域。首先选择你的序列,从“Aligment”-“FindConservedRegion”,对话框中各选项的内容:第26页,共64页,编辑于2022年,星期六BioEditversion5.0.9ConservedregionsearchAlignmentfile:Q:Ribosomal_RNAsome_methanos.bio5/10/048:57:33PMMinimumsegmentlength(actualforeachsequence):15Maximumaverageentropy:0.2Maximumentropyp
19、erposition:0.2Gapslimitedto2persegmentContiguousgapslimitedto1inanysegment2conservedregionsfoundRegion1:Position755to774Consensus:755AUUAGAUACCCGGGUAGUCC774第27页,共64页,编辑于2022年,星期六SegmentLength:20Averageentropy(Hx):0.0155Position755:0.0000Position756:0.0000Position757:0.0000Position758:0.0708Position7
20、59:0.0000Position760:0.0000Position761:0.0000Position762:0.0000Position763:0.0000Position764:0.0708Position765:0.0000Position766:0.1679Position767:0.0000Position768:0.0000Position769:0.0000Position770:0.0000Position771:0.0000Position772:0.0000Position773:0.0000Position774:0.0000第28页,共64页,编辑于2022年,星期
21、六Region2:Position1206to1222ConsensusConsensus:1206ACACGCGGGCUACAAUG1222SegmentLength:17Averageentropy(Hx):0.0182Position1206:0.0000Position1207:0.0000Position1208:0.0000Position1209:0.0000Position1210:0.0708Position1211:0.0708Position1212:0.0000Position1213:0.1679Position1214:0.0000Position1215:0.00
22、00Position1216:0.0000Position1217:0.0000Position1218:0.0000Position1219:0.0000Position1220:0.0000Position1221:0.0000Position1222:0.0000第29页,共64页,编辑于2022年,星期六BioEditversion5.0.9ConservedregionsearchConservedregionsearchAlignmentfile:G:Ribosomal_RNAsome_methanos.bio5/10/999:34:06PMMinimumsegmentlength
23、(actualforeachsequence):10Maximumaverageentropy:0.4Maximumentropyperposition:0.4with2exceptionsallowedGapslimitedto2persegmentContiguousgapslimitedto1inanysegment36conservedregionsfound36conservedregionsfound结果:结果:第30页,共64页,编辑于2022年,星期六7.7.根据密码子的使用翻译核苷酸根据密码子的使用翻译核苷酸核苷酸序列可根据三联体密码翻译预测的蛋白序列。从“Sequence”
24、-“Protein”-“Translation”,选择要按何种读框翻译。例如,以下是一个假设的Methanobacterium(甲烷细菌)的ORF(开放阅读框架)。第31页,共64页,编辑于2022年,星期六 MTH671codingregionMTH671codingregionATGGTTGCAGTACCCGGCAGTGAGATACTGAGCGGTGCACTACACGTTGTCTCCCAGAGCCTCCTCATACCGGTTATAATGGTTGCAGTACCCGGCAGTGAGATACTGAGCGGTGCACTACACGTTGTCTCCCAGAGCCTCCTCATACCGGTTATAGCA
25、GGTCTACTGTTATTCATGGTATACGCCATAGTGACCCTCGGAGGGCTCATATCAGAGTACTCTGGAAGGATAAGGGCAGGTCTACTGTTATTCATGGTATACGCCATAGTGACCCTCGGAGGGCTCATATCAGAGTACTCTGGAAGGATAAGGACTGATGTTAAGGAACTTGAATCGGCAATAAAATCAATTTCAAACCCAGGAACCCCTGAAAAGATAATTGAGGTCGTCACTGATGTTAAGGAACTTGAATCGGCAATAAAATCAATTTCAAACCCAGGAACCCCTGAAAAGATAATT
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