第七章动物实验概论精选文档.ppt

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1、第七章动物实验概论本讲稿第一页，共六十九页第一节实验动物生产供应管理及使用的特点 一、一、.实验动物繁殖生产的特点实验动物繁殖生产的特点 1、难以控制的繁殖规律 2、对生活环境的高度依赖 3、生产成本高 4、管理要求高 本讲稿第二页，共六十九页二、实验动物供应使用的特点 1、可供使用时间短 2、供应使用的规格要求千变万化 3、供应使用量的峰谷落差大本讲稿第三页，共六十九页三、实验动物生产供应的特殊管理要求 1、与国际接轨的要求 2、国家、地方管理法规的要求 3、质量管理要求 本讲稿第四页，共六十九页四、医学研究使用实验动物的特点 医学院校科研使用实验动物的通常特点是：规格严，要求高，品种多，范

2、围广，有诸多制约因素影响动物实验的顺利开展；实验所需要的动物、品种、数量、规格、质量要求不一；实验目的、要求、方法不一；实验人员成份(有教师、医生、研究生、技术人员)不一；操作技能参差不齐；急性实验少，慢性实验多，使用时间或集中或分散，无规律可循；本讲稿第五页，共六十九页主要表现：主要表现：1、使用时间的不确定性2、临时计划多 3、计划可塑性大4、科研经费不足 5、多因素的制约 本讲稿第六页，共六十九页第二节 实验动物许可证 一、申请实验动物生产许可证的条件一、申请实验动物生产许可证的条件 1、实验动物种种子子来来源源于于国家实验动物中心或国家认可的种种源源单单位位，遗传背景清楚，质量符合现行

3、的国家标准；2、具有保证实验动物及相关产品质量的饲养、繁育、生产环境设施及检测手段环境设施及检测手段；本讲稿第七页，共六十九页 3、使用的实验动物饲料、垫料及饮水符合国家标准及相关要求；4、具有保证正常生产和保证动物质量的专业技术人员、熟练技术工人及检测人员；5、具有健全有效的质量管理制度质量管理制度；6、生产的实验动物质量符合国家标准实验动物质量符合国家标准；7、法律、法规规定的其它条件。本讲稿第八页，共六十九页二、申请实验动物使用许可证的条件：1、使用的实验动物使用的实验动物及相关产品必须来自来自有实验动物生产许可证的单位，质量合格；有实验动物生产许可证的单位，质量合格；2、实验动饲育环境

4、及设施符合国家标准；环境及设施符合国家标准；本讲稿第九页，共六十九页 3、使用的实验动物饲料、垫料及饮水符合国家标准及相关要求；4、有经过专业培训的实验动物饲养和动物实验人员；5、具有健全有效的管理制度；6、法律、法规规定的其它条件。本讲稿第十页，共六十九页三、实验动物许可证的适用对象 实验动物生产许可证适用于从事实验动物及相关产品保种、繁育、生产、供应、运输及有关商业性经营的组织和个人。实验动物使用许可证适用于使用实验动物及相关产品进行科学研究和实验的组织和个人。本讲稿第十一页，共六十九页四、实验动物许可证的审批和发放 各省、自治区、直辖市科技厅（科委、局）负责受理许可证申请，并进行考核和审

5、批。专家组对申请单位的申请材料及实际情况进行审查和现场验收，出具专家组验收报告。对申请生产许可证的单位，其生产用的实验动物种子须按照关于当前许可证发放过程中有关实验动物种子问题的处理意见（国科财字1999044号）进行确认。本讲稿第十二页，共六十九页 省、自治区、直辖市科技厅（科委、局）在受理申请后的三个月内给出相应的评审结果。合格者由省、自治区、直辖市科技厅（科委、局）签发批准实验动物生产或使用许可证的文件，发放许可证。省、自治区、直辖市科技厅（科委、局）将有关村料（申请书及申请材料、专家组验收报告、批准文件）报送科技部及有关部门备案。本讲稿第十三页，共六十九页五、管理和监督 凡取得实验动物

6、生产许可证的单位，应严格按照国家有关实验动物的质量标准进行生产和质量控制。在出售实验动物时，应提供实验提供实验动物质量合格证动物质量合格证，并附符合标准规定的近期实验动物质量检测报告。实验动物质量合格证内容应该包括生产单位、生产许可证编号、动物品种品系、动物质量等级、动物规格、动物数量、最近一次的质量检测日期、质量检测单位、质量负责人签字，使用单位名称、用途等。本讲稿第十四页，共六十九页 具有实验动物使用许可证的单位在接受外单位委托的动物实验时，双方应签署协议书，使用许可证复印件必须与协议书一并使用，方可作为实验结论合法性的有效文件。本讲稿第十五页，共六十九页 实验动物许可证不得转借、转让、出

7、租实验动物许可证不得转借、转让、出租给他人使用。给他人使用。许许可可证证实实行行年年检检管管理理制制度度。年检不合格的单位，由省、自治区、直辖市科技厅（科委、局）吊销其许可证，并报科技部及有关部门备案，予以公告。未取得实验动物生产许可证的单位不得未取得实验动物生产许可证的单位不得从事实验动物生产、经营活动。未取得实验从事实验动物生产、经营活动。未取得实验动物使用许可证的单位，或者使用的实验动动物使用许可证的单位，或者使用的实验动物及相关产品来自未取得生产许可证的单位物及相关产品来自未取得生产许可证的单位或质量不合格的，所进行的动物实验结果不或质量不合格的，所进行的动物实验结果不予承认。予承认。

8、本讲稿第十六页，共六十九页 已取得实验动物许可证的单位，违反本办法规定生产、使用不合格动物的，一经核实，发证机关有权收回其许可证，并予公告。情节恶劣、造成严重后果的，依法追究行政责任和法律责任。依法追究行政责任和法律责任。本讲稿第十七页，共六十九页第三节 实验动物的使用计划编制 凡涉及使用实验动物的课题，课题申报者在申报前应主动与实验动物中心取得联系，提出拟用实验动物的品种、等级、数量、规格要求等的预计划，待课题正式立项后应及时编制实验动物详细使用计划，确定使用实验动物的日期，交由实验动物中心安排生产及供应。本讲稿第十八页，共六十九页 报送计划的时间为：使用小鼠前3个月，使用大鼠前4个月，使用

9、狗、兔等非自繁动物之前1个月。这样才能使实验动物生产供应部门有充裕的时间进行选种选配、繁殖生产或外出采购并按程序进行检疫和检验。计划一旦落实就必须严格执行，任何变动都将造成经济损失和时间的浪费。本讲稿第十九页，共六十九页第四节 实验动物的领取或外购 一、实验动物的领取 1、发放实验动物在每天规定的时间段内进行 2、根据事先所造计划提前一天通知饲养员，自觉遵守领取时间。3、领取动物必须遵守有关制度，履行登记、付款手续。本讲稿第二十页，共六十九页二、实验动物的购买 1、提出外购申请，经实验动物中心负责人同意；2、事先与供应单位联系并确认能够提供，并问清楚等级、价格、包装、供应方式，可供应日期；3、

10、如果系慢性实验，则必须首先与实验动物中心签订好动物实验室的使用和代养观察协议，办妥有关手续；本讲稿第二十一页，共六十九页 4、购买时要索取实验动物质量合格证、许可证复印件和其他相关资料；5、选择最快、最安全、最有效的运输方式；6、遵守动物运输检验检疫法；7、如需要实验动物中心协助，应事先支付足额费用。本讲稿第二十二页，共六十九页三、实验动物的运输 1、运输容器 运输容器应能防止微生物污染及承受短暂性的挤压，保证实验动物的健康与安全，并能防止动物逃逸 运输无特定病原体（SPF）动物，运输箱更要加上一层特殊滤帽，以防止外界微生物的污染。运输笼盒应考虑实验动物的生理、生态和习性等因素，要特别注意，在

11、同一运输箱内不能混合不同品种、不同性别或不同等级的动物。本讲稿第二十三页，共六十九页2、动物运输箱的标签 1）、收件人姓名、地址、单位及电话。2）、寄件人姓名、地址、单位及电话（以及紧急联络电话号码）。3）、装箱时间，运输日期、时间。4）、动物数量、性别、品种、品系、年龄等相关资料。5）、运输箱件数。6）、动物健康证明或相关资料。本讲稿第二十四页，共六十九页3、运输工具 运输工具需要有通风和空调设备，以防运输中出现过热或过冷引起动物的反应与不适。本讲稿第二十五页，共六十九页4、验收动物 主管兽医或动物饲养管理人员应在对外包装消毒后小心地打开运输箱，检查动物是否有任何死亡或异样。本讲稿第二十六页

12、，共六十九页四、进出口检疫 动物出入境必须取得国家出口或进口许可证，来自特定疾病疫区的动物，不能进口。依国际规范，野生猎捕灵长类动物需测试肺结核、疱疹B病毒和其他相关传染病，确认不携带有规定的病原微生物才能引进。每当引进其他国家的实验动物（啮齿类）进入国内时，必须经国家检验检疫机构批准，确定符合要求的专门场所进行饲养、检疫，且要求有健康证明文件（health certificate）。动物于检疫后，必须作定期微生物监测,确认动物健康后，才能用于繁殖生产或长期研究。本讲稿第二十七页，共六十九页第五节 动物实验准备与实施 本讲稿第二十八页，共六十九页一、动物实验的概念 动物实验是根据研究目的，恰当

13、地选用标动物实验是根据研究目的，恰当地选用标准的符合实验要求的实验动物，在设计的条件准的符合实验要求的实验动物，在设计的条件下，进行各种科学实验、观察、记录动物的反下，进行各种科学实验、观察、记录动物的反应过程或反应结果，以探讨或检验生命科学中应过程或反应结果，以探讨或检验生命科学中未知因素的专门活动。未知因素的专门活动。动物实验是人类生存和发展的必要手段。本讲稿第二十九页，共六十九页二、实验人员的资质认定 动物实验人员应掌握实验动物科学基本知识。必须了解国家、省、市及所在单位实验动物机构有关实验动物和动物实验的管理法规和制度，并能够切实遵照执行。参与动物实验的人员都必须通过所在省、市科技主管

14、部门组织的实验动物从业人员上岗考试，并取得科技主管部门统一颁发的上岗资格证书。本讲稿第三十页，共六十九页三、动物实验设计、选题的一般原则：科科学学性性。即选题应具有明确的理论意义和实践意义，符合科学性的原则。应当在理论学习、技能掌握、文献检索、研究积累的基础上提出假说，设计新的实验。创创新新性性。创新性是科学的灵魂，选题能够探索生命科学中的未知事物或未知过程，或能揭示已知事物中的未知规律，或提出新见解、新技术、新方法。可行性。可行性。指选题应切合研究者的学术水平、技术水平，具备开展实验的条件，能够顺利得以实施。本讲稿第三十一页，共六十九页伦理原则伦理原则。实验动物同样是生命体，同样需要考虑伦理

15、问题。动动物物实实验验设设计计应应按按照照“R”原原则则进进行行评评估估和和设设计计。在满足研究需要的前提下，尽可能少用实验动物，或寻找替代方法；实验应当在动物没有痛苦的条件下进行，需要手术或其他损伤性实验时，应当给动物麻醉或镇静。实验后的动物应给予很好的护理。本讲稿第三十二页，共六十九页统计学考虑统计学考虑。动物实验设计时应充分考虑统计学原则，即对照、随机、重复的原则。在分组、例数、采用的指标等方面，都应事先考虑研究结束后的数据统计方法，以及采用这些方法在设计时需要注意的问题。本讲稿第三十三页，共六十九页、实验设计的几个要素（1）处理因素）处理因素 人为施加不同试验条件（给受试对象以各种物理

16、、化学或生物学刺激），以揭示生物体的内在规律。控制处理水平（如剂量、时间、强度、频率等）在合理的范围。本讲稿第三十四页，共六十九页（2）试验对象）试验对象 选择合适的实验动物或动物组织和细胞等。必须保证试验对象的一致性，试验对象应当对处理因素敏感，并且反应稳定。（3）试验效应的观察）试验效应的观察 采用适当的观察指标，包括定量指标、定性指标和半定量指标，观察动物对各种试验施加因子的反应。选择指标时应当考虑到指标的关联性、客观性、灵敏度和可用性，以提高效应观察的敏感性和特异性。本讲稿第三十五页，共六十九页、实验设计的原则(1)对照性原则对照性原则 同体对照，即同一动物在施加实验因素前后所获得的不

17、同结果和数据各成一组，作为前后对照，或同一动物在施加实验因素的一侧与不施加实验因素的另一侧作左右对照；异体对照，即实验动物均分为两组或多组，一组不施加实验因素，另一组或几组施加实验因素。没有对照组的实验结果往往是难以令人信服的。对照应在同时同地同条件下进行。本讲稿第三十六页，共六十九页（2）一致性原则）一致性原则 一致性原则是指在实验中，实验组与对照组除了处理因素不同外，非处理因素基本保证均衡一致。这是处理因素具有可比性的前提。（3）重重复复性性原原则则 重复性原则是指同一处理要设置多个样本例数。重复的作用是估计试验误差，降低试验误差，增强代表性，提高精确度。重复的目的就是要保证实验结果能在同

18、一个体或不同个体中稳定地再现。为此，必须有足够的样本数。样本数过少，实验处理效应将不能充分显示；样本数过多，又会增加工作量，也不符减少实验动物用量的原则。本讲稿第三十七页，共六十九页（4）随随机机性性原原则则 随机性原则就是按照机遇均等的原则来进行分组。其目的是使一切干扰因素造成的实验误差尽量减少，防止实验者的主观因素或其他偏性误差造成的影响。（5）客观性原则）客观性原则 客观性原则是指所选择的观测指标尽可能不带有主观成分。所有观测指标尽可能便于定性定量，结果判断要以客观数据为依据。本讲稿第三十八页，共六十九页四、动物实验条件的准备 1、实验场所、实验场所 必须持有实验动物使用许可证持有实验动

19、物使用许可证 必须是标准化的条件，规范化的标准化的条件，规范化的管理。管理。本讲稿第三十九页，共六十九页 2、仪器、药品、试剂 仪器要校准，好用、会用；药品、试剂要提前预定，按照说明书进行配制，特别注意的是，生物试剂要在确认有合格的实验动物和其它条件都具备的情况下才可配制；各种实验器械要消毒、配套。本讲稿第四十页，共六十九页 3、实验动物、实验动物 实验动物是特殊的材料，是有生命的物质。实验前应了解实验动物品种、品系、等级、许可证、动物质量合格证情况，进一步提交详细的使用计划。对本单位不能提供的实验动物，则必须联系购买，购买的程序、要求、运输等都要认真考虑本讲稿第四十一页，共六十九页4、实验人

20、员实验人员是实验成败的关键因素。是否取得动物实验上岗资格证书对实验内容是否熟悉实验操作是否熟练时间安排是否有保证本讲稿第四十二页，共六十九页五、预实验 检查各项准备工作是否完备实验方法和步骤是否切实可行测试指标是否稳定可靠可初步了解实验结果与预期结果的距离，从而为正式实验提供补充、修正、完善的意见和经验本讲稿第四十三页，共六十九页六、动物实验的实施 动物实验的实施就是动物实验按照整个实验设计的技术路线付诸行动的过程。应对相关人员作出合理分工，明确职责 实验技术人员要认真履行职责，对实验过程中出现的各种问题要认真分析，及时汇报，提出处理方案。实验过程中的观察结果与预期不符时，要及时作出分析和调整

21、，避免人、财、物力的不必要浪费。在实验过程中，要敢于舍弃原设计中不尽合理的部分，仍要不断修正和完善实验方案。本讲稿第四十四页，共六十九页七、实验记录与资料整理 1、检查资料 2、设计分组 3、表格整理 4、统计分析 本讲稿第四十五页，共六十九页八、动物实验报告与论文撰写 1、实验动物种系名称、实验动物种系名称 实验动物品种、品系名称必须准确、规范，避免使用通俗称谓，如SD大鼠不要写成SD大白鼠，昆明种小鼠应写成“KM小鼠”（已获国际认可），BALB/c小鼠不能写成Balb/c小鼠，更不能写成B小鼠。2、背景资料、背景资料 动物从何处获得，遗传学分类属于哪一类，微生物等级属于哪一级，必须交代清楚

22、。实验动物供应单位的生产许可证编号及合格证情况。避免使用模糊的描述，如将封闭群日本大耳白兔描述成纯种大白兔或纯种兔等错误概念。本讲稿第四十六页，共六十九页 3、性性别别和和规规格格 应准确描述实验所使用实验动物的雌雄性别数量、年龄、体重等。4、动物实验条件、动物实验条件 实验动物使用许可证编号，实验动物饲养方式（饲料来源、质量标准、饲喂方式、饮水方式、饲养密度、笼具与垫料种类等），实验观察环境的级别，都应作出详尽的描述。5、动物的处理方式、动物的处理方式 动物实验使用的麻醉剂的种类、剂量与方法、给药途径与方法、动物的标本采集方式、动物的处死方式等都要尽可能注明。本讲稿第四十七页，共六十九页第六

23、节 影响动物实验结果的因素 本讲稿第四十八页，共六十九页一、动物因素（一）、种属（一）、种属 不同种属的哺乳动物的生命现象，特别是一些最基本的生命过程，有一定共性，这是医学研究中应用动物实验的基础。但不同种属的动物在对各种实验施加因子的反应上，又各有不同：1不同种属动物对同一致病因素的易感性不同。2不同种属动物的基础代谢率相差很大。3不同种属动物对药物的反应有明显差异。4不同种属动物所进行的实验结果有较大的差异。本讲稿第四十九页，共六十九页（二）、品种、品系（三）、年龄、体重及性别（四）、生理状态（五）、健康状况 本讲稿第五十页，共六十九页二、环境因素 （一）、温、湿度 （二）、气流和清洁度

24、（三）、光照 （四）、噪音 （五）、动物饲养密度 （六）、动物营养 （七）、饲喂环节 （八）、环境微生物 本讲稿第五十一页，共六十九页三、技术因素（一）、动物选择（一）、动物选择（二）、实验季节（二）、实验季节（三）、昼夜过程（三）、昼夜过程（四）、麻醉深度（四）、麻醉深度（五）、手术技巧（五）、手术技巧（六）、实验用药（六）、实验用药（特性、剂型、剂量、途（特性、剂型、剂量、途径、技能）径、技能）（七）、对照问题（七）、对照问题（八）、实验准备和实验重复（八）、实验准备和实验重复 本讲稿第五十二页，共六十九页第七节 动物实验的质量管理 本讲稿第五十三页，共六十九页一、质量管理的基本程序 按照

25、国家实验动物管理条例和各部门各系统有关动物实验的法规、规定和操作规范，根据不同的实验内容，由实验单位组建独立的有科技人员参加的动物实验质量保证监督管理机构，负责规范本单位的动物实验的工作。质量监督管理人员，不能参加被管理的项目。本讲稿第五十四页，共六十九页(二)质量管理的内容和职责 1收集保存有关动物实验的资料、实验方案、总结报告的副本。2根据实验动物法规，对动物实验全过程进行全面审核。主要内容有对实验记录、总结报告、项目实施条件、检测方法、实验进度。对实验的软硬件按规范要求进行管理，实施实验档案管理与检查制度。3对每项动物实验实施检查和监督，并制定检查计划，详细记录检查的内容、存在的问题、采

26、取的措施等，并在检查记录上签名，保存备查。本讲稿第五十五页，共六十九页 4定期现场检查动物实验设施、仪器设备、动物实验室管理情况。5及时向单位负责人和项目负责人报告检查发现的问题，并提出解决问题的建议和报告。6参与标准操作规程的制定，保存其副本。7协助上级质量监督机构进行工作。本讲稿第五十六页，共六十九页(三)质量管理的组织实施 动物实验质量监督管理报告主要有以下内容：1动物实验环境的全面运行管理状况的数据收集。2实验动物饲养人员、动物实验人员的上岗证件。3仪器、设备完好运行的确认。4项目计划书、实验方案、标准操作程序与执行情况的核对。5实验报告书的检查核对。6实验过程中原始资料、标本，样品数

27、据与实验报告书的核对。本讲稿第五十七页，共六十九页 7实验方法、测试、分析、统计方法等与实验报告的核对。8实验中所有动物死亡、剖检记录的核对。9实验过程中对影响实验因素纠正方法与实验报告的核对。10实验动物及其饲料合格证及与项目计划书要求的核对。11其他必须检查和说明的内容，如动物的保护与动物实验的伦理监督等。12国家或地方实验动物管理机构对本动物实验室最近一次的检测结果。13动物实验质量监督的综合评价。本讲稿第五十八页，共六十九页(四)质量监督的综合评价 根据我国实验动物管理条例和实验动物国家标准及地方或部门法规标准化的操作规程(SOP)，在质量监督管理报告的基础上，按4级评审标准进行评价。

28、本讲稿第五十九页，共六十九页(五)审批质量监督报告 (六)发放动物实验质量可信证明书 动物实验质量监督报告审批通过后，由动物实验室出具动物实验可信质量证明书，并注明该项目可信的级别。证书可复制，其中一份存档，一份交项目责任人。本讲稿第六十页，共六十九页二、动物实验条件的控制和人员的管理(一一)动物实验条件的控制和要求动物实验条件的控制和要求 1、我国医、药部门实验动物管理法规规定，研究生毕业论文，以及省部级正式的科学实验和正规的生物检验必须应用清洁级或以上的实验动物。国家级课题和国际合作项目必须使用SPF或以上级别动物。动物实验的设施应与实验动物等级相匹配。应在屏障环境进行清洁级和SPF级动物

29、实验。必须严格控制人员和物品的进出。隔离环境用于无菌动物、悉生动物或SPF级动物实验，该系统要保证与环境的绝对隔离，又要满足动物、物品进出时隔离环境不被破坏。本讲稿第六十一页，共六十九页 2凡从事动物实验的单位和个人必须取得国家或地方省级实验动物管理机构统一颁发的等级动物实验设施许可证。并严格按照许可证上规定的许可范围进行实验。3动物实验所需用的动物饲料，应根据动物种类、级别和不同生理阶段饲喂相应的全价饲料。生产饲料必须取得实验动物管理机构颁发的实验动物饲料生产许可证。购买饲料必须到有许可证的单位去购买并索要和保存每一批饲料的合格证备查。要注意饲料的储藏保质，消毒要按有关规范进行。严格控制实验

30、动物的饮水质量，普通级动物应符合人的饮水标准。屏障系统、隔离系统实验动物的饮水要净化或灭菌。本讲稿第六十二页，共六十九页(二)人员管理 1从事动物实验的各类人员，包括管理人员必须取得所在地实验动物管理机构颁发的实验动物从业人员上岗证。2实行动物实验的全面质量管理，建立完善各项标准化的技术操作规范，定期组织技术培训和考核。本讲稿第六十三页，共六十九页三、动物实验室文件、资料的管理(一)动物实验文件资料(二)动物实验文件资料的管理责任(三)文件资料分类(四)资料记录(凭证)(五)文件系统(六)文件资料的管理要求(七)实验结果报告书的要求 本讲稿第六十四页，共六十九页(七)实验结果报告书的要求 1标

31、题和实验意义。2实验设施的名称和所在地，以及实验条件的级别等。3实验的起止日期。4施加因素的名称、方法、批号、含量、效价、纯度等。5受试对象的名称种(品)系，年龄、体重范围、来源、级别、饲养条件和级别等。6给药途径、方法、剂量、次数和时间等。7观察的次数，测定分析的种类和方法等。本讲稿第六十五页，共六十九页 8各部分工作完成责任人的姓名。9对实验过程中不可预测和影响实验结果的纠正办法。10数据分析的统计方法。11项目责任人的签名，报告日期。12该报告法律责任人签名。13质量监督人员的签名。14该报告的去向和份数。本讲稿第六十六页，共六十九页第八节 实验观察动物的饲养管理 一、普通级动物实验过程

32、中的饲养管理二、清洁级动物实验过程中的饲养管理三、SPF级动物实验过程中的饲养管理四、无菌级动物实验过程中的饲养管理 本讲稿第六十七页，共六十九页饲养管理的共同要求1、来源清楚，质量合格2、实验条件、饲养观察条件与级别标准一致3、细心观察，认真记录4、精心护理、合理饮食5、防止自残、互残本讲稿第六十八页，共六十九页思考题：1、什么是实验动物的“3R”？2、为什么要对实验动物实行微生物学和遗传学质量控制？3、近交系具有独特的遗传学特点，如何评价用近交系动物进行动物实验的结果？4、为什么小鼠在生物医学教学及研究中使用量最大、应用最庄广泛？5、为什么毕格犬是国际公认的实验动物？6、影响动物实验结果的技术因素有哪些？本讲稿第六十九页，共六十九页