考博分子生物学历年真题汇总.doc

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1、华中科技大学同济医学院考博分子生物学专业根底简答题历年试题汇总1. 顺式作用元件有哪些，并加以解释。2022 ，2022 考2. 人类基因组打算的 4 张图，各自的意义是什么？3. 癌基因激活的主要途径？问答：1.什么是基因治疗，基因治疗的主要策略是什么？基因治疗的技术及主要内容，2022 ， 2022，2022 考问答 2.蛋白质组学的主要技术有哪些并解释？2022 ，2022 考2022 简问答题1. PCR 原理，步骤，写出 6 种 PCR 衍生技术 2022，2022，2022 考2. 何谓基因克隆？简述其根本过程。09 年3.重组 DNA 技术，问答题 20 分，14 年考4.举例说

2、明基因表达的调控机制。题目太大，原核调控，真核调控？13 年问答 5.人类基因定位的常用方法及原理。12 年，09 年考简问 6.简述反式作用因子的构造特点及作用方式 09 年简问 7.简述逆转录病毒的构造特点 09 年考问答：真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？依据他们的构造特征可以分为哪些类型？它们和 DNA 相互识别的原理是什么？2022 年考问答：试述大肠杆菌中表达蛋白质产物的步骤。 2022 年考试比较克隆载体、原核载体和真核载体的特点 2022 年考2022 年真题英译中名词解释20 分.反义RNA； 操纵子 ；限制性核酸内切酶； 选择性剪切； 抑癌基因； 基因诊断；

3、RNA干扰 ； 质粒； gene maping； 管家基因简答题。真核基因组的构造和功能特点 20 分人类基因组的构造特征 15 分原癌基因的特点 15 分蛋白质组争辩常用技术有那些，简介其作用。15 分当前 基因治疗技术面临的技术问题有哪些？15 分以下为 2022-2022 年试题及网上答案一、假设要获得 IL-2 的基因工程产品，你应当怎么做？基因工程是在分子水平上对基因进展操作的简单技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作，又叫分子克隆，DNA 重组技术。1. 在 GENBANK 中检索 IL-2 的 mRNA 序列；在 gen

4、ecard 里检索 IL-2 高表达的组织；同时检索一下有关文献；2. 假设考虑使用原核表达系统通常是大肠杆菌表达系统，将 IL-2 的成熟肽的基因序列找出呵呵，我没有检索，不清楚是否有信号肽进展分析；3. 依据表达载体，设计含有适宜酶切位点的、对应成熟肽编码区的引物；二、试述反式作用因子的构造特征及作用方式(20 分)4. 提取 IL-2 高表达的组织的 mRNA，RT-PCR，T 载体克隆或直接酶切克隆至表达载体中、测序。Trans-acting factor 是一类细胞核内的蛋白质因子，能够与顺式作用元件和 RNA-pol 相互作用，调整基因转录活性。一般含有 DNA 结合构造域和转录活

5、化构造域。DNA 结合构造域：1 Helix-turn-helix 含有 3 个 helix，其中 helix3 与 DNA 识别结合， helix1 和 helix2 与其它蛋白质结合。2Zenic finger 锌指构造：由相对保守的一段氨基酸序列和锌离子结合，形成相对独立的功能域，像一根手指插入 DNA 的大沟。两种类型的 DNA 结合蛋白有这样的模序，一是锌指蛋白，另一个是甾体受体。3Leucine Zipper：亮氨酸拉链，两个蛋白质之间相互作用，共同建立一个转录复合体。是一种富含亮氨酸的蛋白质形成的二聚体 motif。这种 motif 可以识别特别的 DNA 序列。两个亮氨酸拉链区

6、的反式作用因子依靠疏水力气相互结合，N-端有碱性氨基酸构成的a-helix 能够与DNA 结合。Eg: AP1 与SV40增加子的结合 4helix-loop-helix: 兼性 a-helix 具有疏水面和亲水面，两个具有这种的motif 反式因子可以形成dimer。仅靠helix 的N-端有一段富含碱性氨基酸的序列可以与 DNA 结合。HLH 以同二聚体或者异二聚体作用于顺式作用元件。 5 同源异形构造域homeodomain,同源异性盒是一种编码 60aa 的序列，长 180bp，几乎存在于全部真核生物中。三、试述 2 型限制酶的功能与特性(20 分)转录激活域：与其他转录因子相互作用的

7、构造成分。常见的转录激活构造域有富含谷氨酰胺构造域，富含脯氨酸构造域及酸性螺旋构造域。 型酶相对来说最简洁，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或四周切割 DNA ，产生带 3”- 羟基和 5”- 磷酸基团的 DNA 产物，需 Mg2+ 的存在才能发挥活性，相应的修饰酶只需 SAM 。识别序列主要为 4-6bp ，或更长且呈二重对称的特别序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，有些是隔开的。 有特异识别和切割的序列部位 DNA 分子上两个单链断裂的部位通常不是直接相对的 断裂所形成的 DNA 片段常具有碱基互补的单链尾巴粘性末端四、试述影响原核基因转录的因素(20 分) 内

8、切酶的切割和修饰功能由两个不同的酶催化所完成，即内切酶活性和甲基化作用活性是分开的五、试述病毒核酸的构造特点(10 分)原核基因表达调控与真核存在很多共同之处，但因原核生物没有细胞核和亚细胞构造，其基因组构造要比真核生物简洁，基因表达的调控因此而比较简洁。虽然原核基因的表达也受转录起始、转录终止、翻译调控及 RNA、蛋白质的稳定性等多级调控，但其表达开、关的关键机制主要发生在转录起始。其特点包括以下 3 方面：1因子打算 RNA 聚合酶的识别特异性：原核生物只有一种 RNA 聚合酶，核心酶催化转录的延长， 亚基识别特异启动序列，即不同的 因子帮助启动不同基因的转录。2操纵子模型的普遍性：除个别

9、基因外，原核生物绝大数基因按功能相关性成簇地连续排列在染色体上，共同组成一个转录单位即操纵子，如乳糖操纵子等。一个操纵子含一个启动序列及数个编码基因。在同一个启动序列把握下，转录出多顺反子 mRNA。3阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性：在很多原核操纵子系统，特异的阻遏蛋白是把握启动序列活性的重要因素。当阻遏蛋白与操纵基因结合或解离时，构造基因的转录被阻遏或去阻遏。原核生物在细胞质内转录，转录和翻译同时进展。1病毒内的核酸构造相对简洁，其遗传物质可以是DNA 或者 RNA，也有阮粒病毒以蛋白质作为遗传物质，成熟的病毒内只有一种遗传物质，要么是DNA，要么是RNA。2病毒基因可以连续也可以中断，很少有重

10、复序列。病毒基因组大局部是用来编码蛋白质的，其编码区大于 90%。非编码区较少。非编码区通常是基因表达的调控区3有重叠基因存在，使得较小的基因片段可以携带较多的遗传信息。4病毒基因组是单倍体，功能相关的蛋白质基因常常丛集于基因组的一个或者多个特定部位，形成一个功能单元或者转录单元。六、真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么？依据它们的构造特征可以分为哪些类型？它们和 DNA 相互识别的原理是什么？七、简述细胞内癌基因激活的方式？特异性转录调控因子是指是除根本转录因子之外，与转录核心区以外的顺式作用元件相结合，影响基因转录的因子，分为 DNA 结合构造域和转录激活构造域。与 GGGCGG

11、 结合的特异性转录调控因子叫 Sp1。与CCAAT 结合的转录因子叫 CBF。大多数类固醇激素与受体结合之后，构成特异性转录因子，与顺式作用元件结合，激活基因转录。也有转录调控抑制因子， 可以掩盖转录活化区，掩盖转录起始区。还有 HSP。与 DNA 的识别模式有：(1)螺旋-转角- 螺旋，helix3 识别结合 DNA，helix1,helix2 结合其它蛋白质因子。(2)Zenic finger 与 DNA 大沟相结合，可以与 RNA-pol3 及其它转录因子相互作用。(3)亮氨酸拉链： N-末端由碱性氨基酸构成的 a-helix 可以与 DNA 相结合. (4)helix-loop-hel

12、ix 兼性 a-helix 具有疏水侧面和亲水侧面，两个具有这种 motif 的反式因子可以形成 dimer。紧靠 helix N-末端的碱性氨基酸组成的序列可以结合 DNA。 转录因子的 DNA 结合区都有特定的空间构型和带电性质。可以和构造和电荷量相匹配的 DNA 结合。(1) 点突变：基因中单个碱基替换，引起表达的蛋白质氨基酸序列转变。例如，结肠癌中常有k-ras 基因的点突变。(2) 插入启动子：多见于癌症的起始阶段。某些病毒(ALV)的长末端重复序列(LTR)含有启动子，转染宿主细胞之后，插入到原癌基因四周或内部，启动基因转录，活化。例如 ALV 的 LTR 插入到 c-myc 四周

13、，可以使其表达水平提高 20-76 倍。(3)基因扩增： 见于癌症进展期。癌基因不断复制，拷贝数增多。在染色质中有浅染区，均质染色质。其不断复制扩增，可以脱离染色体，形成双微体。例如，在小细胞肺癌中， c-myc 扩增，胶质瘤中ERBB1 扩增，神经纤维瘤中，n-myc 扩增。(4) 染色体易位和重排：染色体易位时，八、简述基因治疗中转移外源基因至体内的非病毒和病毒途径的主要原理假设断裂点发生在原癌基因四周，可以转变癌基因的构造和转录调控系统，使之激活。例如， 在 Burkitt 淋巴瘤中，有t(8;14),(q24;q32)易位。慢性粒细胞白血病中有BCL/ABL 融合基因， 使络氨酸蛋白激

14、酶激活，不受生长因子/受体的调控，使 c-ABL 活化，导致 CML。非病毒途径有(1)直接注射法：将含有裸 DNA 的溶液直接对患者肌肉注射，DNA 转入肌组织，并向全身表达目的基因的产物。可以持续几个月到1 年多。但是，转入效率很低。仅限于肌肉组织。(2)电穿孔法：在高压电脉冲作用下，使细胞膜打孔，让外源DNA 快速导入宿主细胞。主要与电压和脉冲时间有关。(3) 脂质体转移法：用磷脂双分子层包裹目的基因，与细胞膜有类似的构造，通过内吞作用，进入细胞，可以防止细胞内核酸酶的降解目的基因。 (4) 阳离子多聚体：阳离子聚胺与阴离子 DNA 形成复合物，与细胞外表带负电的受体结合，通过内吞作用进

15、入细胞。没有细胞特异性，没有靶向性，基因转移效率低。(5) 同源重组法：外源基因专一的整合到受体细胞的特定部位，基因修正。病毒途径：病毒载体的要求：可以有效地进入靶细胞，具有可插入治疗基因的较大空间和筛选标记，具有把握治疗基因表达的顺式作用元件。(1) 逆转录病毒：反转录病毒虽是 RNA 病毒，但有反转录酶，可使 RNA 转录为 DNA，再整合到宿主细胞基因组。具有穿透细胞的力量，可使近 100%的受体细胞被感染，转化细胞效率高。无严格的组织特异性，随机整合的病毒可长期存留，对细胞无害。这种载体只能把其DNA 整合到能旺盛分裂细胞的染色体，而不适合于那些不能正常分裂的细胞，如神经元。由于病毒自

16、身含有病毒癌基因，就有使宿主细胞感染病毒和致癌的危急性。人们有目的地将病毒基因及其癌基因除去，仅留它们的外壳蛋白， 以保存其穿透细胞的功能，试图避开上述缺点。这种改造后的病毒称为缺陷型病毒defective virus。这样的病毒中的反转录酶可将 RNA 转化为 DNA，有助于该 DNA 顺当进入宿主细胞的基因组，而该病毒则死亡。(2) DNA 病毒介导载体DNA viral mediated vector：DNA病毒包括腺病毒、SV40、牛乳头瘤病毒、疱疹病毒等，一般认为这类病毒难于改造成缺陷型病毒。牛乳头瘤病毒重组后，可不插入宿主染色体中引起插入突变，又可在宿主染色体外独立复制，并表达出基

17、因产物。美国设计了一个的腺病症载体，它是用一个化学连接器即赖氨酸链lysine chain将 DNA 栓在病毒外壳上，这样组成的运输器，通过一个外表抗体而进入细胞核，使宿主基因与治疗基因共同表达。这个病毒载体称为腺病毒多赖氨酸DNA 复合体adeno virus-polylysine DNA-complex。九、请你评价一下人类基因组打算HGMP完成的意义(1)对人类疾病基因争辩的奉献 :人类疾病相关的基因是人类基因组中构造和功能完整性至关重要的信息。对于单基因病，承受“定位克隆”和“定位候选克隆”的全思路，导致了亨廷顿氏舞蹈症、遗传性结肠癌和乳腺癌等一大批单基因遗传病致病基因的觉察，为这些疾

18、病的基因诊断和基因治疗奠定了根底。对于心血管疾病、肿瘤、糖尿病、神经精神类疾病老年性痴呆、精神分裂症、自身免疫性疾病等多基因疾病是目前疾病基因争辩的重点。安康相关争辩是 HGP 的重要组成局部，1997 年相继提出：“肿瘤基因组解剖打算”“环境基因组学打算”。 (2)对医学的奉献:基因诊断、基因治疗和基于基因组学问的治疗、基于基因组信息的疾病预防、疾病易感基因的识别、风险人群生活方式、环境因子的干预对生物技术的奉献 胚胎细胞克隆羊多利a 基因工程药物:分泌蛋白多肽激素，生长因子，趋化因子，凝血和抗凝血因子等及其受体。b 诊断和争辩试剂产业 :基因和抗体试剂盒、诊断和争辩用生物芯片、疾病和筛药模

19、型。 对细胞、胚胎、组织工程的推动,胚胎和成年期干细胞、克隆技术、器官再造。c 对制药工业的奉献 :筛选药物的靶点：与组合化学和自然化合物分别技术结合，建立高通量的受体、酶结合试验以学问为根底的药物设计：基因蛋白产物的高级构造分析、推测、模拟药物作用“口袋”。 个体化的药物治疗：药物基因组学。d 对社会经济的重要影响:生物产业与信息产业是一个国家的两大经济支柱；觉察功能基因的社会和经济效益；转基因食品；转基因药物如减肥药，增高药 e 对生物进化争辩的影响:生物的进化史，都刻写在各基因组的“天书”上；草履虫是人的亲戚 13 亿年；人是由300400 万年前的一种猴子进化来的；人类第一次“走出非洲

20、”200 万年的古猿；十、分子生物学试验中所涉及的引物有哪几种，各有什么用途和特点？f 带来的负面作用:侏罗纪公园不只是科幻故事；种族选择性灭亡性生物武器；基因专利战； 基因资源的掠夺战；基因与个人隐私。十一、什么是分子克隆技术？它的主要步骤是什么？1） 纯粹的用于扩增目的基因片段的引物，这种引物一般都是成对消灭。 2用于基因测序用的引物，一般假设所测的片段长度短的话小于800bp，可以用一条，固然两条正反通测也可以。 3用于筛选的引物，比方平经常见的SSP，RFLP 等引物，这种引物也是成对消灭的， 但主要用于基因多态性筛选的，针对单位点多态性来说。十二、真核细胞和原核细胞基因表达在转录水平

21、上调控的特点。在分子水平上供给一种纯化和扩增特定 DNA 片段的方法。常含有目的基因，用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分别提纯所需的克隆载体，可以得到插入 DNA 的很多拷贝，从而获得目的基因的扩增。原核细胞： 1.转录起始调控：(1) 因子与启动子的作用模式 原核细胞的 RNA-pol 只有一种，组成成分为2?因子与启动子结合。在原核生物分化发育过程中，不同基因有序表达也是不同因子在不同时间产生并发挥作用引起的。(2) 转录起始的负调控 最典型的是乳糖操纵子的调整(3) 转录起始的正调控 典型

22、例子是阿拉伯糖操纵子，ara C 基因产物 Ara C起着关键作用，当环境中有阿拉伯糖时，Ara C 形成 dimer 与 I1、I2 结合，激活BAD 基因转录。(4) 转录起始的复合调控 葡萄糖代谢产物的分解阻遏负调控和 CAP-cAMP 复合物的正调控。2. 转录终止调控：(1) 依靠于因子的转录终止，色氨酸操纵子中有衰减子(2) 不依靠于因子的转录终止，识别发夹构造，使转录停顿。十三、就你所知 RNA 争辩领域中，理论和技术方面的进展有哪些。真核细胞：1.转录前调控：(1)染色体构造对转录的影响： 疏松的染色质转录活泼(2)DNA 的修饰：真核基因 CpG island 中的 C 通常

23、被甲基化，阻碍某些基因转录。2. 顺式作用元件： 真核基因非编码区中调控基因转录的 DNA 序列，包括启动子、增加子、沉默子。3.反式作用因子：一类细胞核内的蛋白质因子，可以与 RNA-pol 和顺式作用元件相互作用，调整基因转录。(1)根本转录因子：在真核基因启动子上，参与组装转录起始复合物的蛋白质因子。 TFII 有 6 种。(2)特异性转录因子：结合在核心转录原件以外的其它上游顺式作用元件的蛋白质因子，通过 DNA-蛋白质相互作用，调整基因转录，可以对环境变化快速作出反响。与 GGGCGG box 结合的激活蛋白称为 SP1;与 CCAAT box 结合的转录因子称为 CBF。SP1 和

24、 CBF 都能够与特异性的 DNA 序列结合，启动转录。多种类固醇激素也是特异转录因子，与相应受体结合后，作用于激素应答序列，促进转录。此外，在真核基因中也存在转录抑制因子，可以掩盖转录活化区，或者掩盖转录起始点，与根底转录因子相互作用，抑制转录。 2. 反式作用因子与DNA 相互作用的模式：helix-turn-helix, Zenic finger, leucine zipper, helix-loop-helix.RNA 具有生物功能多样性，在遗传信息的翻译中起打算作用，mRNA 有信使和模板的作用，转运 RNA 可以转运氨基酸和信息交换，rRNA 有装配和催化作用。1992 年 Hol

25、ler 等证明转肽反响有核糖体大亚基催化。核酶的觉察RNA 具有催化功能和持家功能。RNA 编辑：RNA 编码序列的转变称为 RNA 编辑。hnRNA snRNA 戴帽加尾防止降解。反义 RNA：与 mRNA 序列互补的一段 RNA，可以沉默 mRNA 的翻译。(1) RNA 剪切是真核生物基因表达过程中一个格外重要的机制，经过 RNA 的剪切、连接以后即可产生具有编码信息功能的mRNA。RNA 剪切机制在生物的生长发育过程中至关重要。RNA 剪切就是将基因组中转录出来的 RNA 前体中的内含子剪切出去，然后再在相应酶的作用下将剪切后的 RNA 重连接起来. RNA 的剪切位臵主要依靠于剪切位

26、点的判定，剪切位点一般都具有其专属特定的序列。麻省理工学院的争辩人员开发出一种的计算方法来推测遗传材料中的哪些序列转录为 RNA 时会象电影剪接室中被剪掉的胶片一样被剪切掉，哪些会最终幸运地成为生命的蓝图。(2) RNA 测序分析中的最进展使用一种叫做 RNA-seq 的技术，最的高通量 DNA 测序技术现在能够被大规模地应用于捕获一个细胞中整套的 mRNA 转录本。尽管 RNA-seq 才仅仅两岁，但是它已经快速集中到基因组学领域，并且它现在正在被用于分析从细菌到灵长类生物的转录组。测序的深度允许争辩者定量基因表达水平，以在真核生物物种中觉察选择性异构体，甚至描述细菌基因组的操纵子构造十四、

27、简述 PCR 技术中引物设计的要点。(3) RNA 干扰技术争辩进展:RNA 干扰( RNA interfer ence, RNAi)是由双链 RNA 介导的序列特异的基因沉默现象, 它在转录水平、 转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达,具有高效性和高特异性的特点。小干扰 RNA ( small interfer ing RNA 或 shor t inter fering RNA, siRNA) 是 RNAi 作用中的效应分子,作为引导序列, 依据碱基互补原则识别靶基因转录出的信使 RNA( mRNA) , 并引导沉默复合物( RNAinduced silencing complex , RI

28、SC) 复合体结合 mRNA。随后 siRNA 与 mRNA 在复合体中换位, 核酸酶 Dicer 将 mRNA 切割成 2123 核苷酸的片段, 从而可以破坏特定目的基因转录产生的 mRNA, 使其功能沉默。应用于根底医学，肿瘤治疗，白血病治疗，抗病毒。首先引物与模板的序列要严密互补，其次引物与引物之间避开形成稳定的二聚体或发夹构造，再次引物不能在模板的非目的位点引发 DNA 聚合反响。1原则：用于 PCR 反响的引物需要有两条被扩增目的基因的两端，并分别与模板正负链序列互补；引物长度一般以 18-25 个核苷酸为宜；两条引物之间尤其在 3端的序列不能有互补，以免形成引物二聚体；引物的碱基组

29、成应平衡，避开消灭嘌呤、嘧啶碱基积存。PCR 扩增中得退火温度是依据引物的 Tm 值打算的，两条引物的 Tm 值不能差异太大；依据需要，可以在合成引物时于其 5端加修饰成分。a长度：1530bp，其有效长度Ln=2(G 十 C)十(A 十 T)一般不大于 38，否则 PCR 的最适延长温度会超过 Taq 酶的最正确作用温度(74 度)，从而降低产物的特异性。十五、试述真核基因组构造的根本特点。20 分BG 十 c 含量：应在 45%一 55%之间，PCR 扩增中的复性温度一般是较低 Tm 值引物的 Tm 值减去 510 度。引物长度小于 20 时，其 Tm 恒等于 4(G 十 C)十 2(A

30、十 T)。C碱基分布的随机性：应避开连续消灭 4 个以上的单一碱基。尤其是不应在其 3端消灭超过 3 个的连续 G 或 C，否则会使引物在 G 十 C 富集序列区错误引发。D引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级构造。 E引物之间：两个引物之间不应有多于 4 个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避开 3端的互补重叠。1. 真核生物基因组 DNA 与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因的基因组是双份的即双倍体,diploid，即有两份同源的基因组。2.真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个构造基因经过转录和翻译生成一个 mRNA 分子和一条多肽

31、链。3. 存在重复序列，重复次数可达百万次以上。4.基因组中不编码的区域多于编码区域。5.大局部基因含有内含子，因此，基因是不连续的。6.基因组远远大于原核生物的基因组，具有很多复制起点，而每个复制子的长度较小。原核生物基因组特点：十六、试述重组 DNA 的根本过程。20 分1. 基因组多数由环状双链 DNA 分子组成 2.具有类核构造 3.操纵子构造(operon):功能上相关的几个构造基因往往串联排列在一起,受上游共同的调控区和下游转录终止信号所构成的基因表达单位.转录时,几个基因转录在一条 mRNA 链上,再分别翻译成各自不同的蛋白质.4.构造基因中无内含子 , 与真核细胞的主要区分 .

32、 编码区基因占基因组比例约 50% 左右, 存在间隔区.5.DNA 绝大局部用于编码蛋白质 ,构造基因多为单拷贝 ,6.构造基因中无重叠现象 (一段DNA 序列编码几种蛋白质多肽链)7.基因组中存在重复序列 8.基因组中存在可移动的 DNA 序列,如转座子和质粒等十七、试述基因治疗争辩的主要内容或策略。20 分DNA 重组DNA recombination指 DNA 分子内或分子间发生的遗传信息的重共价组合过程。包括同源重组、特异位点重组和转座重组等类型，广泛存在于各类生物。体外通过人工 DNA 重组可获得重组体 DNA，是基因工程中的关键步骤.基因治疗gene therapy是指将外源正常基

33、因导入靶细胞，以订正或补偿因基因缺陷和特别引起的疾病，以到达治疗目的。也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。包括体细胞治疗和生殖细胞治疗。一般程序：1.治疗基因的选择：正常基因代替致病基因，在细胞内产生有正常功能的蛋白质。2. 治疗基因导入宿主细胞内： 非病毒导入和病毒导入 3. 靶细胞的选择：一般为体细胞，病变细胞或者正常免疫细胞。禁用生殖细胞。成功的有造血干细胞，皮肤成纤维细胞，肝细胞， 肌细胞。策略有基因矫正，基因置换，基因增补，基因沉默十八、癌基因在信号传导中的分类基因治疗的策略 (一)基因矫正 订正致病基因中的特别碱基，而

34、正常局部予以保存。(二) 基因置换 指用正常基因通过同源重组技术，原位替换致病基因，使细胞内的 DNA 完全恢复正常状态。(三)基因增补 把正常基因导入体细胞，通过基因的非定点整合使其表达，以补偿缺陷基因的功能，或使原有基因的功能得到增加，但致病基因本身并未除去 (四)基因失活 将特定的反义核酸反义 RNA、反义 DNA)和核酶导入细胞，在转录和翻译水平阻断某些基因的特别表达，而实现治疗的目的。(五)“自杀基因” 在某些病毒或细菌中的某基因可产生一种酶，它可将原无细胞毒或低毒药物前体转化为细胞毒物质，将细胞本身杀死，此种基因称为“自杀基因”。(六)免疫基因治疗 免疫基因治疗是把产生抗病毒或肿瘤

35、免疫力的对应与抗原打算族基因导入机体细胞，以到达治疗目的。如细胞因子(cytokine)基因的导入和表达等。(七) 耐药基因治疗 耐药基因治疗是在肿瘤治疗时，为提高机体耐受化疗药物的力量，把产生抗药物毒性的基因导入人体细胞，以使机体耐受更大剂量的化疗。如向骨髓干细胞导入多药抗性基因中的 mdr-1。1. 表达生长因子样物质：某些癌基因可以编码生长因子样的活性物质，例如，sis 癌基因的表达产物与 PDGF链高度同源，int-2 癌基因蛋白与成纤维细胞生长因子构造相像。此类癌基因激活可使生长因子样物质生成增多，以自分泌或旁分泌方式刺激细胞增殖。在人神经胶质母细胞瘤、骨肉瘤和纤维肉瘤中均可见 si

36、s 基因特别表达。2. 表达生长因子受体类蛋白：某些癌基因可以表达生长因子受体的类似物，通过模拟生长因子的功能受体起到促增殖的作用。例如，erb-B 癌基因编码的变异型 EGF 受体，缺乏与配体结合的膜外区，但在没有 EGF 存在的条件下，就可持续激活下游的增殖信号。在人乳腺癌、肺癌、胰腺癌和卵巢肿瘤中已觉察 EGF 受体的过度表达；在卵巢肿瘤亦可见 PDGF 受体高表达，且这些受体的表达与预后呈负相关。细胞凋亡的途径：细胞凋亡是细胞在肯定条件下承受刺激信号并受基因调控的一种自主性、程序性死亡过程。关于细胞凋亡的机制，在哺乳动物细胞中主要有以下几条通路：死亡受体介导的细胞凋亡途径，线粒体介导的

37、凋亡途径，内质网介导的细胞凋亡途径，粒酶介导的细胞凋亡途径，Anoiki 介导的细胞凋亡途径。另外，这几条通路后期的共同途径是胱天蛋白酶家族激活。1 凋亡受体介导的细胞凋亡途经 (外部途径)1.1 受体 Fas 为代表介导的信号转导途径 该途径由死亡受体 Fas 为代表介导启动，死亡信号诱导复合体death inducing signal complex，DISC的形成是级联反响的关键步骤1.2 肿瘤坏死因子受体tumor necrosis facter receptor ，TNFR为代表介导的信号转导途径 。该途径由死亡受体 TNFR为代表介导启动。肿瘤坏死因子受体(TNF Rs) 是具有代

38、表性的最大的死亡受体家族，胞内区都具有转导细胞死亡信号所必需的一段高度同源性的氨基酸序列，即 DD。TNF 主要是由感染而活化的巨噬细胞和 T 细胞产生，通过其细胞外表受体 TNFR和 TNFR介导细胞凋亡。下游 caspase 的级联反响导致细胞凋亡。线粒体裂解。1.3 TRAIL 信号转导通路 目前已觉察了两类 TNF 相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis induced ligand，TRAIL)受体。含有死亡构造域2. 线粒体介导的细胞凋亡途径JNK 信号转导通路。在细胞凋亡过程中 cyt-c 的释放是线粒体外膜通透性增高的结果。P38 和细胞外信号调整激酶extracellular signal regulated kinase，ERK的动态平衡打算了细胞的存活与凋亡。前者主要促细胞凋亡，后者主要促细胞存活。3. 内质网介导细胞凋亡的途径 钙离子在内质网介导细胞凋亡途径中起主要作用细胞凋亡的信号转导