蛋白质工程制药.pptx

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1、S1 S1 蛋白质工程制药概述蛋白质工程制药概述从基因工程药物到蛋白质工程药物从基因工程药物到蛋白质工程药物蛋白质工程的诞生、概念蛋白质工程的诞生、概念蛋白质工程的基本过程蛋白质工程的基本过程蛋白质分子设计蛋白质分子设计第1页/共54页基因工程药物基因工程药物蛋白质工程药物蛋白质工程药物19821982年第一个基因工程药物：重组人胰岛素年第一个基因工程药物：重组人胰岛素n 重组蛋白存在问题：重组蛋白存在问题：1 1、稳定性差：体内半衰期短、稳定性差：体内半衰期短2 2、药理活性不够强：使用剂量偏大、药理活性不够强：使用剂量偏大3 3、毒副作用大、毒副作用大4 4、生产工艺复杂、生产工艺复杂蛋白

2、质工程药物蛋白质工程药物第2页/共54页蛋白质工程的诞生蛋白质工程的诞生1970S1970S末，末，SmithSmith等人建立了等人建立了寡核苷酸点突变寡核苷酸点突变改变改变DNADNA序列的方法序列的方法19821982年，一些实验室用此技术来改造蛋白质分子，研究蛋白质的功能年，一些实验室用此技术来改造蛋白质分子，研究蛋白质的功能19831983年，年，UlmerUlmer发表了题为发表了题为“Protein EngineeringProtein Engineering”的专论的专论目前已应用于医药领域，并有多种产品上市目前已应用于医药领域，并有多种产品上市第3页/共54页已上市的蛋白质工

3、程药物已上市的蛋白质工程药物1 1、体内半衰期短、体内半衰期短2 2、药理活性不够强、药理活性不够强3 3、毒副作用大、毒副作用大4 4、生产工艺复杂、生产工艺复杂第4页/共54页已上市的蛋白质工程药物已上市的蛋白质工程药物1 1、体内半衰期短、体内半衰期短2 2、药理活性不够强、药理活性不够强3 3、毒副作用大、毒副作用大4 4、生产工艺复杂、生产工艺复杂第5页/共54页已上市的蛋白质工程药物已上市的蛋白质工程药物1 1、体内半衰期短、体内半衰期短2 2、药理活性不够强、药理活性不够强3 3、毒副作用大、毒副作用大4 4、生产工艺复杂、生产工艺复杂第6页/共54页蛋白质工程的概念蛋白质工程的

4、概念蛋白质工程蛋白质工程（Protein EngineeringProtein Engineering）(第二代基因工程第二代基因工程)是以是以蛋白质结构功能关系的知识蛋白质结构功能关系的知识为基础，通过周密的为基础，通过周密的分子设计分子设计以及以及DNADNA重组技重组技术术，把天然的蛋白质改造成合乎人类需要的新的，把天然的蛋白质改造成合乎人类需要的新的突变蛋白质突变蛋白质(mutein)(mutein)的一的一项技术。项技术。第7页/共54页蛋白质工程的概念蛋白质工程的概念内涵：内涵：1 1、从、从DNADNA水平改变基因，改造蛋白质水平改变基因，改造蛋白质2 2、一个或多个氨基酸残基、

5、一个或多个氨基酸残基 结构域结构域 全新蛋白质全新蛋白质3 3、有目的地改造，获得期望功能、有目的地改造，获得期望功能 强调分子设计强调分子设计4 4、结合、结合DNADNA重组技术重组技术从不同尺度改造从不同尺度改造第8页/共54页蛋白质工程的基本过程蛋白质工程的基本过程第9页/共54页蛋白质工程的基本过程蛋白质工程的基本过程1 1、分离纯化所需改造的目的蛋白、分离纯化所需改造的目的蛋白2 2、对蛋白进行氨基酸序列测定、对蛋白进行氨基酸序列测定、X X射线晶体衍射线晶体衍射分析、核磁共振分析等射分析、核磁共振分析等结构和功能信结构和功能信息息3 3、根据结构和功能信息、生物信息学信息，、根据

6、结构和功能信息、生物信息学信息，运用蛋白质分子预测技术提出蛋白质设计方运用蛋白质分子预测技术提出蛋白质设计方案案4 4、分离克隆该蛋白编码基因，并进行突变改、分离克隆该蛋白编码基因，并进行突变改造造5 5、插入适当的载体表达、插入适当的载体表达6 6、分离纯化表达产物，检测其生物学功能、分离纯化表达产物，检测其生物学功能实验实验设计设计实验实验第10页/共54页蛋白质分子设计蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第11页/共54页蛋白质分子设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计的三个基本条件：蛋白

7、质分子设计的三个基本条件：1 1、蛋白质分子的基本知识：理化性质、结构与、蛋白质分子的基本知识：理化性质、结构与功能、构象规律功能、构象规律2 2、对具体改造的蛋白质分子必须有一个系统、对具体改造的蛋白质分子必须有一个系统、全面和深入的了解全面和深入的了解3 3、分子设计的基本工具：高性能的计算机硬件、分子设计的基本工具：高性能的计算机硬件、功能齐全的计算机软件功能齐全的计算机软件只有在此基础上，才能应用蛋白质分子预测只有在此基础上，才能应用蛋白质分子预测技术，提出合理的设计方案技术，提出合理的设计方案三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计

8、蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第12页/共54页蛋白质分子设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计的分类蛋白质分子设计的分类1 1、小范围改造：、小范围改造：对已知结构的蛋白质进行对已知结构的蛋白质进行少数几个残基的替换、部分片段的缺失，少数几个残基的替换、部分片段的缺失，改善蛋白质的性质和功能。改善蛋白质的性质和功能。2 2、较大程度的改造：、较大程度的改造：根据需求对来源于不根据需求对来源于不同蛋白质的结构域进行拼接组装，或在蛋同蛋白质的结构域进行拼接组装，或在蛋白质分子中进行大范围肽链替换、结构域白质分子中进行大范围肽链替换、结构域替换，获得多功能复合体。替换，获得多功能复合体。3 3、蛋

9、白质从头设计、蛋白质从头设计 （de novode novo protein design protein design）三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第13页/共54页概念：概念：从蛋白质分子一级结构出发，设计制造自然界中不存在的从蛋白质分子一级结构出发，设计制造自然界中不存在的全新蛋白全新蛋白，使之具有特定的空间结构和预期的生物功能。使之具有特定的空间结构和预期的生物功能。1 1、需要扎实的理论基础、需要扎实的理论基础2 2、在在分子设计分子设计与与试验验证试验验证之间交互进行之间交互进行蛋白

10、质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第14页/共54页PDAPDA循环循环（P Protein rotein D Design esign A Automationutomation）1 1、设计设计模拟模拟实验实验分析分析2 2、不断循环：一步步的修正最终获得成功、不断循环：一步步的修正最终获得成功蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计计算机模拟计算机模拟基因构建基因构建突变蛋白质产物突变蛋白质产物功能分析功能分析三个基本条件三个基

11、本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第15页/共54页蛋白质从头合成的范例蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：凋亡诱导肽：C CNGRNGRC-GGC-GGn n-（KLAKLAKKLAKLAK）2 2KLAKLAKKLAKLAK：可形成典型的两亲可形成典型的两亲-螺螺旋结构，进入细胞后，可破坏线粒旋结构，进入细胞后，可破坏线粒体膜引起细胞凋亡体膜引起细胞凋亡NGRNGR：与新生血管的内皮细胞特异结与新生血管的内皮细胞特异结合，起到靶向弹头的作用合，起到靶向弹头的作用蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计

12、三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第16页/共54页 利用利用NGRNGR为弹头，将为弹头，将KLALAKKLALAK肽特异地导向肿瘤部位肽特异地导向肿瘤部位的新血管内皮细胞，通过抑制新血管的生成，从而的新血管内皮细胞，通过抑制新血管的生成，从而抑制肿瘤的形成，且对其他细胞没有明显的毒性。抑制肿瘤的形成，且对其他细胞没有明显的毒性。300300 mol/L mol/L 3 3 mol/Lmol/L蛋白质从头合成的范例蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：凋亡诱导肽：C CNGRNGRC-GGn-C-GGn

13、-（KLAKLAKKLAKLAK）2 2蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第17页/共54页蛋白质从头合成的范例蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：凋亡诱导肽：C CNGRNGRC-GGn-C-GGn-（KLAKLAKKLAKLAK）2 2蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计考虑的其他因素考虑的其他因素1 1、Gly-GlyGly-Gly接头：接头：防止两功能部位的立体结构相互影响。防止两功能部位的立体结构相互影响。2 2、L-

14、L-型氨基酸（型氨基酸（D-D-型）：型）：防止蛋白酶的降解防止蛋白酶的降解三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第18页/共54页蛋白质从头合成的范例蛋白质从头合成的范例 凋亡诱导肽：凋亡诱导肽：C CNGRNGRC-GGn-C-GGn-（KLAKLAKKLAKLAK）2 2蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计蛋白质分子设计实验结果实验结果1 1、特异地被激活的新生血管内皮细胞内吞，引起凋亡、特异地被激活的新生血管内皮细胞内吞，引起凋亡2 2、在小鼠肿瘤模型中，可抑制肿瘤的生长，明显延长、在小鼠肿

15、瘤模型中，可抑制肿瘤的生长，明显延长治疗组小鼠的存活时间治疗组小鼠的存活时间3 3、对健康小鼠超剂量使用时，没有毒副作用的产生、对健康小鼠超剂量使用时，没有毒副作用的产生三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第19页/共54页1 1、顺式思维理性化设计、顺式思维理性化设计 合理化设计合理化设计2 2、基于各种功能筛选平台的非理性逆向改造策略、基于各种功能筛选平台的非理性逆向改造策略 非理性的体外进化非理性的体外进化3 3、两种策略的结合、两种策略的结合蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计

16、蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第20页/共54页1 1、顺式思维理性化设计顺式思维理性化设计 合理化设计合理化设计基于现有知识信息：蛋白质的结构与功能；基于现有知识信息：蛋白质的结构与功能；因此，受到已有认识水平的制约。因此，受到已有认识水平的制约。蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第21页/共5

17、4页2 2、基于各种功能筛选平台的非理性逆向改造策略基于各种功能筛选平台的非理性逆向改造策略非理性的体外进化非理性的体外进化1 1）构建包含众多突变蛋白的文库：）构建包含众多突变蛋白的文库：随机突变、随机突变、DNADNA改改组等组等2 2）筛选文库：）筛选文库：从功能入手进行筛选所需要的蛋白从功能入手进行筛选所需要的蛋白3 3）进行蛋白质基本结构、序列信息的分析）进行蛋白质基本结构、序列信息的分析蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第

18、22页/共54页3 3、两种策略的结合、两种策略的结合非理性的体外进化：非理性的体外进化：弥补合理性化设计应用中的局限弥补合理性化设计应用中的局限性，并且迅速得到大量有功能的目标分子，通过分析性，并且迅速得到大量有功能的目标分子，通过分析积累所需的蛋白质结构与功能相关信息积累所需的蛋白质结构与功能相关信息合理化设计：合理化设计：对非理性筛选出的候选分子进行合理化对非理性筛选出的候选分子进行合理化的分子修正，使之进一步符合实际需求的分子修正，使之进一步符合实际需求蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计的策略蛋白质分子设计蛋白质分子设计三个基本条件三个基本条件蛋白质蛋白质分子设计的分类分子设计的分类蛋

19、白质从头设计蛋白质从头设计蛋白质分子设计策略蛋白质分子设计策略第23页/共54页S2 S2 蛋白质工程的基本技术蛋白质工程的基本技术定点突变技术定点突变技术n随机突变技术随机突变技术1 1、寡核苷酸引物介导、寡核苷酸引物介导 的定点突变的定点突变2 2、PCRPCR介导的定点突变介导的定点突变3 3、盒式突变、盒式突变4 4、易错、易错PCRPCR5 5、DNADNA改组技术改组技术第24页/共54页易错易错PCRPCR连续易错连续易错PCRPCR（sequential error-prone sequential error-prone PCRPCR）：经以上一次）：经以上一次PCRPCR突

20、变的基因很难获得满意突变的基因很难获得满意的结果，于是将前一轮的结果，于是将前一轮PCRPCR扩增得到的有用突变基扩增得到的有用突变基因作为下一轮因作为下一轮PCRPCR的模板，每次获得的突变累积起的模板，每次获得的突变累积起来，产生重要的有益突变。来，产生重要的有益突变。可遗传的变化只发生在单一分子内部，属于可遗传的变化只发生在单一分子内部，属于无性进无性进化化（asexual evolutionasexual evolution）n易错易错PCRPCR（error-prone PCRerror-prone PCR）：利用缺乏修复功能）：利用缺乏修复功能的的TaqTaq酶，并设置容易引起出错

21、的酶，并设置容易引起出错的PCRPCR反应条件，在反应条件，在扩增目的基因的同时引入碱基错配，导致目的基因扩增目的基因的同时引入碱基错配，导致目的基因随机突变随机突变完全随机化完全随机化第25页/共54页易错易错PCRPCR优点：优点：简便易行简便易行 不足：不足：突变文库规模有限，有益突变突变文库规模有限，有益突变少，后续筛选工作费力、耗时，只适用少，后续筛选工作费力、耗时，只适用于较小的基因片段（于较小的基因片段（800bp 800bp）第26页/共54页DNADNA改组技术改组技术DNADNA改组改组（DNA shufflingDNA shuffling），又叫有性，又叫有性PCRPCR

22、（sexual-sexual-PCRPCR）等，将单一基因等，将单一基因随机片段化随机片段化，这些片段自配对，这些片段自配对PCRPCR扩增，由于扩增，由于易错易错PCRPCR而引入大量随机突变，并在多次循环中重组，使基因在体外迅速进化，而引入大量随机突变，并在多次循环中重组，使基因在体外迅速进化，从中筛选到有益重组。从中筛选到有益重组。n 优点：优点：体外定向进化，快速，高效体外定向进化，快速，高效（蛋白质、酶、抗体等）（蛋白质、酶、抗体等）第27页/共54页DNADNA改组技术改组技术第28页/共54页第29页/共54页基因家族改组基因家族改组DNADNA改组的不足：改组的不足：从从单一基

23、因出发单一基因出发，得到的随机点突变率很低，且有益突变的积累相对缓慢，得到的随机点突变率很低，且有益突变的积累相对缓慢在自然界中，不同物种同源基因本身就是具有非常丰富的变异，如果加以利用，就可以大大地加速基因在在自然界中，不同物种同源基因本身就是具有非常丰富的变异，如果加以利用，就可以大大地加速基因在体外的进化速度体外的进化速度基因家族改组基因家族改组（DNA family shufflingDNA family shuffling）第30页/共54页基因家族改组基因家族改组第31页/共54页第32页/共54页S3 S3 蛋白质工程制药实例蛋白质工程制药实例蛋白质工程在新药研究中的应用蛋白质工

24、程在新药研究中的应用胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究第33页/共54页蛋白质工程在新药研究中的应用蛋白质工程在新药研究中的应用1 1、提高药效活性、提高药效活性2 2、提高靶向性、提高靶向性3 3、提高稳定性、改善药代动力学特性、提高稳定性、改善药代动力学特性4 4、提高工业生产效率、提高工业生产效率5 5、降低蛋白药物引起的免疫反应、降低蛋白药物引起的免疫反应6 6、获得具有新功能的蛋白分子、获得具有新功能的蛋白分子7 7、获得特定蛋白的拮抗物或类似物、获得特定蛋白的拮抗物或类似物8 8、模拟原型蛋白分子结构开发小分子模拟肽类、模拟原型蛋白分子结构开发小分子模拟肽类药物药物第34

25、页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药1 1、糖尿病、糖尿病I I型糖尿病：型糖尿病：IIII型糖尿病：型糖尿病：胰岛素抵抗（胰岛素抵抗（IRIR）为主，伴胰岛素相对缺乏；）为主，伴胰岛素相对缺乏；以及胰岛素分泌缺陷，伴以及胰岛素分泌缺陷，伴IRIR 由于细胞介导的胰岛由于细胞介导的胰岛B B细胞自身免疫性破坏，细胞自身免疫性破坏，导致胰岛素绝对缺乏导致胰岛素绝对缺乏第35页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究闭环系统：自调控闭环系统：自调控竞争解吸附作用竞争解吸附作用第36页/共54页胰岛素的蛋白质工程研

26、究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药1 1、糖尿病、糖尿病中国中国40004000万，全球万，全球1.51.5亿患者亿患者急性并发症：急性并发症：酮症酸中毒（酮症酸中毒（I I，昏迷、死亡），昏迷、死亡）非酮症高渗性昏迷（非酮症高渗性昏迷（IIII）低血糖反应（心慌、手抖、饥饿、出冷汗）低血糖反应（心慌、手抖、饥饿、出冷汗）第37页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药1 1、糖尿病、糖尿病中国中国40004000万，全球万，全球1.51.5亿患者亿患者慢性并发症慢性并发症（可遍及全身各

27、重要器官）：（可遍及全身各重要器官）：心血管疾病、慢性肾病心血管疾病、慢性肾病视网膜病变、神经病变视网膜病变、神经病变第38页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药2 2、胰岛素、胰岛素第39页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药2 2、胰岛素、胰岛素胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg100Kg胰腺只能提取胰腺只能提取4-5g4-5g的胰岛素，其产量之低和的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。价格之高可想而知。第

28、40页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药2 2、胰岛素、胰岛素19821982年，重组人胰岛素上市年，重组人胰岛素上市第一个基因工程药物！第一个基因工程药物！第一个完成序列测定的蛋白质（第一个完成序列测定的蛋白质（1958年）第一个人工合成的蛋白质（第一个人工合成的蛋白质（1965年）Sanger 第41页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素是治疗糖尿病的特效药胰岛素是治疗糖尿病的特效药2 2、胰岛素、胰岛素每每100L100L发酵液就能产发酵液就能产生生5g5g胰岛素，使其价胰岛素，使其价格降低了

29、格降低了30%-50%30%-50%!提取提取4-5g4-5g胰岛素需要胰岛素需要100Kg100Kg胰腺胰腺第42页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素在临床应用时存在的问题胰岛素在临床应用时存在的问题1 1、在正常生理情况下胰岛素在体内是不断地分泌的，但不能连续不断地注射胰、在正常生理情况下胰岛素在体内是不断地分泌的，但不能连续不断地注射胰岛素岛素2 2、皮下注射胰岛素时，吸收得也很慢，、皮下注射胰岛素时，吸收得也很慢，注注射后射后1.5-21.5-2小时，体内胰岛素水平还未能达小时，体内胰岛素水平还未能达到高峰，这就会导致高血糖；到高峰，这就会导致高血糖；3-53

30、-5小时之后小时之后胰岛素水平仍在继续上升，这又会导致低胰岛素水平仍在继续上升，这又会导致低血糖血糖第43页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素在临床应用时存在的问题胰岛素在临床应用时存在的问题3 3、糖尿病病人一般需要每日四次注射给药、糖尿病病人一般需要每日四次注射给药 第44页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究蛋白质工程技术对胰岛素的改造蛋白质工程技术对胰岛素的改造1970S1970S初，英国的初，英国的HodgkinHodgkin等、我国的梁栋材等，分别用等、我国的梁栋材等，分别用X-X-射线晶体衍射法进射线晶体衍射法进行了高分辨率的三维结构分

31、析，胰岛素的蛋白质工程研究奠定了基础行了高分辨率的三维结构分析，胰岛素的蛋白质工程研究奠定了基础第45页/共54页胰岛素的蛋白质工程研究胰岛素的蛋白质工程研究蛋白质工程技术对胰岛素的改造蛋白质工程技术对胰岛素的改造1 1、速效胰岛素、速效胰岛素（可快速吸收的单体胰岛素）（可快速吸收的单体胰岛素）2 2、长效胰岛素、长效胰岛素3 3、高效胰岛素、高效胰岛素（与受体亲和力增加的胰岛素突变体）（与受体亲和力增加的胰岛素突变体）第46页/共54页速效胰岛素速效胰岛素胰岛素吸收慢的原因：胰岛素吸收慢的原因：二聚体、六聚体二聚体、六聚体第47页/共54页速效胰岛素速效胰岛素3D3D分析发现：多聚体的形成与

32、分析发现：多聚体的形成与B8B8、B9B9、B12B12、B13B13、B16B16、B23-B28B23-B28的氨基酸残基的氨基酸残基有关有关n 用蛋白质工程方法在多聚体接触面上某些用蛋白质工程方法在多聚体接触面上某些氨基酸残基换上带负电的氨基酸残基氨基酸残基换上带负电的氨基酸残基 B B链链SerSer9 9 AspAsp（-），），ThrThr2727 GluGlu（-）由于相同电荷互斥，减少多聚体形成，吸收速由于相同电荷互斥，减少多聚体形成，吸收速度比野生型胰岛素要快许多度比野生型胰岛素要快许多“速效胰岛素速效胰岛素”第48页/共54页速效胰岛素速效胰岛素19961996年，第一个速

33、效胰岛素年，第一个速效胰岛素LisproLispro在欧美批准上市在欧美批准上市 B B链链 ProPro2828 LysLys2929（）（）A A、自身聚集的倾向大大降低，静脉注射、自身聚集的倾向大大降低，静脉注射15min15min起效，起效，1h1h达到顶峰达到顶峰45min45min；B B、血浆清除迅速（、血浆清除迅速（2-4h2-4h），减少了引起低），减少了引起低血糖的危险。血糖的危险。第49页/共54页速效胰岛素速效胰岛素另一个产品：另一个产品：AspertAspert胰岛素胰岛素 B B链链 ProPro2828 Asp Asp（）（）A A、减少了自身聚集，吸收时间、有效

34、、减少了自身聚集，吸收时间、有效活性都是天然胰岛素的活性都是天然胰岛素的2 2倍；倍；B B、缩短了血浆清除时间，使低血糖的、缩短了血浆清除时间，使低血糖的危险降低了危险降低了50%50%。第50页/共54页长效胰岛素长效胰岛素pI5.4 pI5.4 6.86.8，在生理，在生理pHpH下形成结晶，沉淀在注射部位，可缓慢释放出来，下形成结晶，沉淀在注射部位，可缓慢释放出来，这就可以延长体内半衰期这就可以延长体内半衰期第51页/共54页长效胰岛素长效胰岛素实际的研究发现：实际的研究发现：B B链链ThrThr2727 Arg Arg，B B链链C C端氨基化，端氨基化，A A链链AsnAsn2l

35、 2l Gly Gly，血浆，血浆半衰期可延长至半衰期可延长至35.3h35.3h长效胰岛素具有较好的临床效果，每天注射一次，可与天然胰岛素分泌水平相长效胰岛素具有较好的临床效果，每天注射一次，可与天然胰岛素分泌水平相近近第52页/共54页高效胰岛素高效胰岛素根据已获得的胰岛素分子结构模型和生化工作，人们设计了可以加强胰岛素与受体亲根据已获得的胰岛素分子结构模型和生化工作，人们设计了可以加强胰岛素与受体亲和性的胰岛素突变体，以提高胰岛素的生理活性和性的胰岛素突变体，以提高胰岛素的生理活性 B B链链HisHis1010AspAsp：体外活性比野生型提高了体外活性比野生型提高了5 5倍倍第53页/共54页感谢您的观看！第54页/共54页