糖原的显示反应幻灯片.ppt

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1、糖原的显示反应第1页，共11页，编辑于2022年，星期一v 实验目的v 实验原理v 实验用品v 实验方法与步骤v 实验结果v 实验报告第2页，共11页，编辑于2022年，星期一目的要求通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。第3页，共11页，编辑于2022年，星期一基本原理糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（CHO），游离醛基与Schiff s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能

2、显示的糖类主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖。第4页，共11页，编辑于2022年，星期一第5页，共11页，编辑于2022年，星期一实验用品1器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等2试剂 0.5%过碘酸溶液；Schiffs试剂3材料：小鼠肝脏石蜡切片 第6页，共11页，编辑于2022年，星期一切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。注意注意：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，

3、过碘酸的作用时间与反应环境：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长。第7页，共11页，编辑于2022年，星期一切片充分洗净后入Schiffs试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。第8页，共11页，编辑于2022年，星期一对照片的设置为了确保实验结果的可信性，在实验中需设置阴性对照片。对照片在复水后，用唾液淀粉酶37水解3060分钟，取出后水洗，再入过碘酸处理。第9页，共11页，编辑于2022年，星期一实验结果第10页，共11页，编辑于2022年，星期一实验报告绘图表示糖元在细胞中的分布情况；在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作用，它和Feulgen反应中HCl的作用有何异同？第11页，共11页，编辑于2022年，星期一