高中生物选修一实验.pptx

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1、内容无菌操作技术无菌操作技术微生物的分离培养技术微生物的分离培养技术 123微生物培养基及其制备微生物培养基及其制备 第1页/共27页无菌操作技术-概念无菌操作技术在分离、转接及培养微生物时，防止其他微生物污染的技术。包括环境、培养基及仪器设备的灭菌、消毒、接种及培养过程的无菌操作等。第2页/共27页无菌操作技术-灭菌灭菌用物理或化学的方法杀死或除去物品上或环境中所有微生物的过程，包括芽孢和孢子。消毒则是杀死物体上绝大部分的微生物，主要是病原微生物和有害微生物，属于部分灭菌。第3页/共27页无菌操作技术-灭菌方法火焰灭菌和干热灭菌湿热灭菌过滤除菌紫外线杀菌化学药剂消毒杀菌第4页/共27页无菌操

2、作技术-灭菌方法火焰灭菌和干热灭菌1.火焰灭菌接种环、涂布器等，直接在酒精灯火焰上烧至红热试管或三角瓶口等，也可通过火焰灭菌第5页/共27页无菌操作技术-灭菌方法2.干热灭菌用烘箱、干燥箱的干燥空气杀死微生物的方法。玻璃器皿，金属用具等，灭菌后器皿表面干燥，不易染菌。第6页/共27页无菌操作技术-灭菌方法湿热灭菌1.常压蒸汽灭菌采用间歇灭菌或持续灭菌的方法不易用高压蒸煮的物质2.高压蒸汽灭菌穿透力强、效果好，常用于培养基的灭菌灭菌后酸度增高，葡萄糖等营养物质被破坏第7页/共27页无菌操作技术-灭菌方法过滤除菌含菌液体或气体通过细菌滤器，使杂菌留在滤器或滤板上常用于不易湿热灭菌的液体物质第8页/

3、共27页无菌操作技术-灭菌方法紫外线杀菌紫外线易被细胞中的核酸吸收，造成细胞损伤而杀菌；紫外线穿透力弱，用于表面杀菌和空气灭菌第9页/共27页无菌操作技术-无菌操作无菌操作操作前开紫外灯照射15-30min；先点燃酒精灯，再用酒精擦拭双手；操作时，避免双手接触瓶口，手和胳膊尽量不要置于容器的上方。第10页/共27页培养基及其制备-成分氮源 矿质元素培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基培养基能源 碳源生长因子 水 第11页/共27页培养基及其制备-类型按物理状态划分固体培养基、半固体培养基和液体培养基按成分划分天然培养基和合成培养基第12页/共27页培养基及其制备

4、-类型按用途划分选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基尿素选择培养基尿素选择培养基纤维素菌鉴别培养基第13页/共27页培养基制备-基本原则选择针对性强的培养基营养物质浓度及配比合适物理化学条件适宜第14页/共27页培养基制备-基本原则培养基配置流程 衡量溶解调节PH值分装加塞倒皿、摆斜面灭菌第15页/共27页划线分离划线分离 划线分离由接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释涂布涂布平板分离法是样品经过适当稀释后，用无菌玻

5、璃涂棒取稀释液均匀地涂布在培养皿的琼脂平板表面，培养后挑取单菌落。第16页/共27页稀释涂布法稀释涂布法第17页/共27页划线法分离划线法分离连续划线法交叉划线法第18页/共27页微生物分离技术-培养摇床恒温培养箱 第19页/共27页微生物计数技术-介绍微生物计数介绍：测定微生物数量方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和平板计数法。镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计

6、数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。第20页/共27页血球计数板构造图a 平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)b 侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)第21页/共27页微生物的计数-介绍每块计数板由H形凹槽分为2个同样的中央计数室。第22页/共27页微生物的计数-介绍血球计数板计数网的分区和分格16X25规格25X16规格第23页/共27页微生物的计数-计算(1)16格25格的血球计数板计算公式:细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100400104稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80400104稀释倍数第24页/共27页微生物的计数-步骤1、样品稀释，以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜。2、在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。3、加稀释后的酵母菌悬液置于盖玻片的边缘。4、计数，对每个样品计数三次,取其平均值第25页/共27页Thank You!Thank You!第26页/共27页感谢您的观看！第27页/共27页