小鼠骨髓细胞染色体制备与观察幻灯片.ppt

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1、小鼠骨髓细胞染色体制小鼠骨髓细胞染色体制备与观察备与观察第1页，共29页，编辑于2022年，星期六实验原理实验原理小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。数量较多。第2页，共29页，编辑于2022年，星期六n n秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集殖状态的细胞停止在中期。注射到动物

2、活体内，可以收集殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。到较多的中期分裂相的骨髓细胞。到较多的中期分裂相的骨髓细胞。到较多的中期分裂相的骨髓细胞。第3页，共29页，编辑于2022年，星期六第4页，共29页，编辑于2022年，星期六n n实验目的与要求：实验目的与要求：1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2.了解小鼠染色体核型。了解小鼠染色体核型。3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。认识秋水仙素对细胞增殖的作用。n n器材与试剂器材与试剂n n内容与方法内容与方法（一）小鼠骨髓细胞染色体制备（一）小鼠骨髓细胞染色体制备预处理预

3、处理预处理预处理取材，收集细胞取材，收集细胞低渗低渗固定、再固定固定、再固定滴片滴片染色染色第5页，共29页，编辑于2022年，星期六v取材前23h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。腹腔内注射秋水仙素腹腔内注射秋水仙素23小时后，颈椎脱臼处小时后，颈椎脱臼处死小鼠死小鼠。第6页，共29页，编辑于2022年，星期六小白鼠骨骼标本小白鼠骨骼标本第7页，共29页，编辑于2022年，星期六第8页，共29页，编辑于2022年，星期六取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否

4、则容易造成骨髓细胞的流失。则容易造成骨髓细胞的流失。第9页，共29页，编辑于2022年，星期六用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净注射器抽取生理盐水冲洗骨髓注射器抽取生理盐水冲洗骨髓第10页，共29页，编辑于2022年，星期六收集细胞：收集细胞：暴露骨髓腔，暴露骨髓腔，反复冲洗骨髓腔获得骨反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，髓细胞，收集到离心管中收集到离心管中,定容至定容至6ml.第11页，共29页，编辑于2022年，星期六滴滴23滴于玻片上，吹气，滴于玻片上，吹气，在酒精灯火焰过火在酒精灯火焰过火8次，次，做记号，凉干，染色做记号，凉干，染色滴片：滴片：滴片后，将片子

5、侵入滴片后，将片子侵入滴片后，将片子侵入滴片后，将片子侵入GiemsaGiemsa染液缸中，染液缸中，染液缸中，染液缸中，10151015分钟，分钟，分钟，分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。弃去染液，水洗，晾干，镜检。弃去染液，水洗，晾干，镜检。弃去染液，水洗，晾干，镜检。第12页，共29页，编辑于2022年，星期六第13页，共29页，编辑于2022年，星期六第14页，共29页，编辑于2022年，星期六作业与思考题作业与思考题n n1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。色体中期分裂相。n n2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各、本实验中秋水

6、仙素、低渗液、固定液各起什么作用？起什么作用？n n3、简述实验中应注意那些关键问题？、简述实验中应注意那些关键问题？第15页，共29页，编辑于2022年，星期六（二）染色体标本片观察（二）染色体标本片观察1.标本片质量评价标本片质量评价（1）细胞密度合适、均匀；）细胞密度合适、均匀；（2）背景干净，细胞核和染色体清晰；）背景干净，细胞核和染色体清晰；（3）有较多的分裂相；）有较多的分裂相；（4）染色体分散较好。）染色体分散较好。第16页，共29页，编辑于2022年，星期六细胞密度细胞密度细胞密度细胞密度第17页，共29页，编辑于2022年，星期六染色体染色体分散度分散度第18页，共29页，编

7、辑于2022年，星期六2.染色体形态特征观察染色体形态特征观察第19页，共29页，编辑于2022年，星期六3.染色体计数染色体计数（1001010010）151699+16+15=401082222+8+10=40第20页，共29页，编辑于2022年，星期六4.细胞增殖指数统计细胞增殖指数统计细胞增殖指数细胞增殖指数=分裂细胞数分裂细胞数分裂细胞数分裂细胞数+间期细胞数间期细胞数100%第21页，共29页，编辑于2022年，星期六实验三实验三 细胞器的观察细胞器的观察一、中心体一、中心体二、高尔基体二、高尔基体第22页，共29页，编辑于2022年，星期六一、中心体（一、中心体（410）n n马蛔虫子宫横切片全貌马蛔虫子宫横切片全貌第23页，共29页，编辑于2022年，星期六中心体（中心体（1010）第24页，共29页，编辑于2022年，星期六中心体（中心体（4010）第25页，共29页，编辑于2022年，星期六二、高尔基体（二、高尔基体（410）n脊神经节切片脊神经节切片第26页，共29页，编辑于2022年，星期六高尔基体（高尔基体（1010）第27页，共29页，编辑于2022年，星期六高尔基体（高尔基体（4010）第28页，共29页，编辑于2022年，星期六高尔基体（高尔基体（4010）第29页，共29页，编辑于2022年，星期六