高中生物选修一微生物的培养与应用.pptx

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1、一、微生物（一）特点（一）特点（二）类型（二）类型种类多；分布广；易培养；个体微小；结构简单；繁殖快；代谢强；易变异。微生物原核:真核非细胞类：细菌、放线菌、支原体、蓝藻等酵母菌、霉菌等真菌：原生生物病毒、类病毒、朊病毒等显微藻类：衣藻、小球藻等原生动物：草履虫、变形虫等第1页/共26页1.1.球菌球菌2.2.杆菌杆菌3.3.螺旋菌螺旋菌肺炎双球菌金黄色葡萄球菌乳酸链球菌大肠杆菌苏云金芽孢杆菌枯草芽孢杆菌霍乱弧菌幽门螺旋菌齿垢密螺旋体（三）细菌的形态（三）细菌的形态第2页/共26页细菌芽孢的结构模式图 环境适宜时，芽孢可以萌发，形成一个细菌。（四）细菌的芽孢和孢子（四）细菌的芽孢和孢子芽孢：有

2、些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体（不是生殖细胞）。孢子：细菌的生殖细胞芽孢的壁很厚，含水量极低，抗逆性极强（对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力）。第3页/共26页 菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征。菌落是鉴定菌种的重要依据。（五）菌落（五）菌落菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或少数同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群体。第4页/共26页吸附吸附注入注入合成合成释放释放组装组装 噬菌斑即噬菌体侵染细菌细胞，导致寄主细胞溶解死亡，因而在琼脂培养基表面形成的肉眼可见的透明小圆斑（“负菌落”）。在适当条件下，一

3、个噬菌体形成一个噬菌斑。（六六）病毒的繁殖）病毒的繁殖第5页/共26页二、无菌技术（一）定义（一）定义在培养微生物的操作中，所有在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染防止杂菌污染的方法。的方法。（二）措施（二）措施1.对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。2.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。3.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。4.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。空气中有大量的微生物，而酒精灯的火焰旁能形成一个无菌区域。第6页/共26页二、无菌技术（三）消毒（三）消毒1.1.定义定义指使指使用较为温和的物理

4、或化学方法用较为温和的物理或化学方法仅杀死仅杀死物体表面或内部物体表面或内部一部一部分分对人体有害的微生物对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）不包括芽孢和孢子）2 2.方法方法1 1）煮沸）煮沸消毒法消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2）巴氏消毒法）巴氏消毒法：70-7570-75下煮下煮30min 30min 或或 8080下下煮煮15min15min3 3）化学）化学药剂消毒法药剂消毒法:用酒精用酒精进行皮肤消毒进行皮肤消毒;氯气氯气消毒水源消毒水源4 4）紫外线消毒）紫外线消毒：只适用于表面灭菌和空气：只适用于表面灭菌和空气灭菌灭菌5 5）化学药物消毒）化学药

5、物消毒:照射前喷洒式碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，以增强消毒效果照射前喷洒式碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，以增强消毒效果第7页/共26页二、无菌技术（四）灭菌（四）灭菌1.1.定义定义使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2 2.方法方法在酒精灯火焰上灼烧。适用于接种环、接种针、接种钩等金属用具以及试管口、三角瓶口灭菌1)灼烧灭菌接种针、钩、环第8页/共26页二、无菌技术2)干热灭菌干热灭菌箱内160170 12小时，适用于耐高温、需保持干燥的物品（吸管、培养皿）和金属用具等。3)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌锅内100KPa、121、1530min；适用于培养基、水的灭菌。高压蒸汽灭

6、菌前，为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽？利于温度升高。若冷空气未排尽，当压力升到100kpa时，锅内温度不会上升到应有高度，导致灭菌不彻底灭菌完毕后，若压力未降到零就打开气阀，会出现什么现象？为什么？灭菌容器内的液体冲出容器。因为灭菌锅内外压力不平衡的缘故利用干热灭菌箱和高压蒸汽灭菌锅灭菌时，物品不能摆的太挤，为什么？以免妨碍热空气或蒸汽的流通超净工作台第9页/共26页三、培养基（一）（一）定义定义 人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基营养物质生长繁殖种类是否含凝固剂用途固体培养基1.5%-2.5%分离、计数、鉴定半固体培养基0.2%-0.7%观察运动、鉴定菌种液体培养基

7、否工业生产（二）类型（二）类型（按物理性质划分）固体培养基：菌落固体斜面培养基固体平板培养基琼脂液体培养基第10页/共26页三、培养基（三）基本成分（三）基本成分成分成分举例举例作用或特点作用或特点碳源无机物有机物氮源无机物有机物无机盐水COCO2 2、HCOHCO3 3-等适于自养生物，不提供能量葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等适于异养生物，可提供能量N2、NH4、NH3、NO3-等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等KHKH2 2POPO4 4、K K2 2HPOHPO4 4、（NHNH4 4）2 2SOSO4 4、MgSOMgSO4 4、CaClCaCl2 2、Ca(NOCa(NO3 3)2 2、Na

8、ClNaCl、FeSOFeSO4 4等。参与酶的组成；调节并维持细胞的渗透压；调节PHPH的平衡。良好溶剂，参与物质运输；参与细胞内一系列化学反应；酶催化的介质生长因子微生物生长所必需的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物。包括维生素、某些氨基酸、碱基三类物质第11页/共26页 牛肉膏、称量纸 、少量水加入烧杯加热溶解取纸蛋白胨、NaClNaCl搅拌溶解冷却调pHpH琼脂 搅拌熔化补水至100mL100mL（四）制备（四）制备（牛肉膏蛋白胨固体培养基）（牛肉膏蛋白胨固体培养基）1.1.计算：依配方计算100mL100mL培养基所需各成分的用量。2.2.称量：玻璃棒挑取牛肉膏于称量纸上称取。

9、牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速。3.3.溶化：牛肉膏黏稠，保证粘附在称量纸上的牛肉膏也溶于水中，减少误差作为凝固剂防止琼脂糊底而导致烧杯破裂4 4.灭菌：培养基装入锥形瓶，加棉塞，包牛皮纸扎紧，高压蒸汽灭菌；培养皿5 58 8套作一包，放于干热灭菌箱内灭菌。三、培养基防止污染和挥发灭菌时避免水蒸气浸湿棉塞，取出培养基时，也起到隔绝空气中杂菌的作用第12页/共26页三、培养基5.5.倒平板 培养基冷却至约5050左右时灼烧灭菌左手拔出棉塞通过缝隙倒入培养基，盖盖冷却倒置第13页/共26页答：用手触摸锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：灼烧灭菌，防止瓶口

10、的微生物污染培养基。问题讨论1.1.培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，影响微生物生长。4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：最好不要用。因为空气中的微生物可能在此滋生。第14页/共26页三、培养基5.5.倒平板 培养基冷却至约5050左右时灼烧灭菌左手拔出棉塞通过缝隙倒入培养基，盖盖冷却倒置6.6.无菌检查：3737倒置培养242448h48h，观察是

11、否有微生物生长。第15页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（一）平板划线法（一）平板划线法接种环灼烧灭菌冷却接种环，打开菌种的棉塞试管口灭菌沾取菌种试管口灭菌，塞棉塞通过缝隙，划3-53-5平行线，盖盖，不要划破培养基12345灼烧接种环，冷却后，从1 1区末端往2 2区划线，重复操作倒置培养1 1.操作：操作：第16页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（一）平板划线法（一）平板划线法0 02.2.培养培养方法方法：3.3.其他划线方法：其他划线方法：3 3.培养结果：培养结果：1 12 23 3划线组：分离到由一个细胞繁殖而来的菌落对照组：无微生物生长三个重复平板1 1 倒置

12、培养倒置培养2 2 倒置培养倒置培养3 3 倒置培养倒置培养空白对照0 0 倒置培养倒置培养第17页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（一）平板划线法（一）平板划线法问题讨论1.1.为什么为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？防止污染：防止污染：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上 可能存在的微生物污染培养物；划线结束时灼烧接种环，及时杀死接种环上残留 的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。纯化微生物：纯化微生物：每次划线前的灼

13、烧，为杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划 线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次 划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。第18页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（一）平板划线法（一）平板划线法问题讨论2.2.在在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3 3.在在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使

14、细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第19页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（二二）稀释涂布平板法）稀释涂布平板法第20页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（二二）稀释涂布平板法）稀释涂布平板法1 1.操作操作将菌液进行一系列的梯度稀释移液管、试管及水等要灭菌；菌液与水要混匀；移液管、试管口要离火焰12cm处。涂布平板（接种）第21页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）（二二）稀释涂布平板法）稀释涂布平板法2.2.培养培养方法方法：3 3.培养结果：培养结果：各梯度分别涂布3 3个平板，1 1个不涂布作空白对照。稀释度足够的菌液在

15、培养基表面形成单个菌落第22页/共26页四、纯化大肠杆菌（微生物的接种）问题讨论涂布平板的所有操作都应在涂布平板的所有操作都应在火焰附近火焰附近进行。结合平板划线与系进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。管要在酒精灯火焰周围等等。（二二）稀释涂布平板法）稀释涂布平板法第23页/共26页五

16、、结果分析与评价 1.培养未接种培养基的作用是什么？若有菌落形成，说明什么？对照；培养基灭菌不彻底。2.在培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3.培养12h和24h后的菌落大小？菌落分布位置？原因？大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。4.在某培养基上出现了不同形态的菌落，是什么原因？培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。第24页/共26页六、菌种保藏（一）临时保藏（一）临时保藏接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。扩大接种面积（二）长期保藏（二）长期保藏甘油甘油冷冻管藏冷冻管藏法：法：甘油甘油灭菌后与菌液混匀，灭菌后与菌液混匀，-20-20冰箱保存。冰箱保存。固体斜面培养基第25页/共26页感谢您的观看！第26页/共26页