生化基础知识介绍ppt课件.ppt
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1、认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目生化基础知识介绍认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目主要内容:生化仪发展 分析方法介绍 几个名词 临床意义认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目生化分析仪的发展史:p 1957年Technicon公司(Auto Analyzer),p 单通道连续流动式,模仿手工。p 60年代后随电子计算机技术迅速发展。认识到了贫困户贫
2、困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目生化自动分析在中国的发展分期 分分 期期 年年 代代 主主 要要 特特 征征 认识时期 1972-1980 引进了三台连续流动式生化分析仪,开始研制生化分析仪 从认识到应用自动化的最初阶段 1980-1984 1、引进半自动、全自动生化分析仪约8种型号共几十套。2、第一个中外(美)合作实验室建立,引进一批自动化仪器 和配套Kits,开展了室内质控。3、开始研制KIT。4、开展了室间质量调查EQA。迅速发展时期 1984-1990 1、自动分析仪被广泛认识,自动化程度高,质量好的仪器进 入中国,
3、半自动半自动推广较快,型号达20多种近2000套。2、与自动分析仪配套的KIT商品化被广泛接受,酶法分析有 较大推广。KIT已从研究步入工业生产。3、出现第二个中外(日)合作自动化程度较高的实验室。自动化分析仪质量越来越高,高速度智能化 1990-1996 1、全自动推广。与国际差距缩小。2、Kits国产和中外合作生产的已占有优势,先进的方法学得 到更大普及,13种落后方法被法令淘汰。3、少数大医院开始建立初级的LIS。向可靠而高效的方向发展,TAL在中国开始出现 1996-1、LIS应用增多。2、分析前自动化系统分析前自动化系统引进。3、初级TAL出现。4、IQC,EQA在全国普遍有效开展。
4、远程EQA系统启用。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目分分 期期 年年 代代 主主 要要 特特 征征 全自动生化分析仪全自动生化分析仪临床应用规范化临床应用规范化2001年以来1.与国外同步同步,国产化。2.流水线流水线逐渐推广普及。3.2004年发布自动生化分析仪应用规范。4.准确性溯源和检测系统的概念增强。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目生化仪的分类生化仪的分类 按反应装置结构:连续流动式、离心式和分立式。按反应装置结构:
5、连续流动式、离心式和分立式。按同时检测项目与否:单通道、多通道。按同时检测项目与否:单通道、多通道。按仪器的自动化程度:全自动、半自动。按仪器的自动化程度:全自动、半自动。按仪器复杂程度:小型、中型和大型。按仪器复杂程度:小型、中型和大型。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目(一)连续流动式分析仪(一)连续流动式分析仪 特点特点:同一管道中进行 一个接一个 速度慢认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目(二二)离心式生化分析仪离心式生化
6、分析仪特点:圆盘内,离心力混合,高速旋转中比色。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目(三)、分立式分析仪(三)、分立式分析仪 特点:在不同反应杯中进行,不同的加样器自动加样,依次检测 可有多个加样臂,速度快。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目前分光和后分光方式前分光和后分光方式 光栅分光有前分光和后分光两种方式,光光栅分光有前分光和后分光两种方式,光源首先经过单色器分光,然后透射到比色溶液源首先经过单色器分光,然后透射到比色溶液的
7、方式为的方式为前分光前分光。目前以后分光方式为多见,。目前以后分光方式为多见,其优点是单色器中没有转动部分,双波长在同其优点是单色器中没有转动部分,双波长在同一时刻检测,因而提高了检测的精度和速度。一时刻检测,因而提高了检测的精度和速度。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目 光源先透过比色杯中的反应液再照射到光栅上光源先透过比色杯中的反应液再照射到光栅上,经色散后所有固定单色光同时通过各自的光纤,经色散后所有固定单色光同时通过各自的光纤传输到对应的检测器,微处理器按该分析项目的传输到对应的检测器,微处理器按该分析
8、项目的分析参数,分析参数,后分光方式后分光方式 选择其中一个选择其中一个或两个波长(双或两个波长(双波长方式)的吸波长方式)的吸光度值,用于分光度值,用于分析结果的计算。析结果的计算。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目分析方法分类分析方法分类(一)终点法(一)终点法(end assayend assay)被测物质在反应过程中完全被转变为产物,到达反应终点,根据终被测物质在反应过程中完全被转变为产物,到达反应终点,根据终点吸光度的大小求出被测物浓度,称为终点法点吸光度的大小求出被测物浓度,称为终点法。该法称为平衡
9、法更为恰当。从该法称为平衡法更为恰当。从时间时间-吸光度曲线吸光度曲线来看,到达反应终点来看,到达反应终点或平衡点时,吸光度将不再变化。终点法参数设置简单,反应时间一般或平衡点时,吸光度将不再变化。终点法参数设置简单,反应时间一般较长,精密度较好。较长,精密度较好。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目终点时间的确定终点时间的确定根据时间根据时间-吸光度曲线来确定,吸光度曲线来确定,根据被测物反应终点,结合干扰物的反应情根据被测物反应终点,结合干扰物的反应情况来确定。况来确定。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始
10、对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目一点终点法一点终点法(one point end assayone point end assay)在反应到达终点,即在时间在反应到达终点,即在时间-吸光度曲线上吸光吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值,用于计算度不再改变时选择一个终点吸光度值,用于计算结果。结果。结果计算公式:待测物浓度结果计算公式:待测物浓度C CU U=(待测吸光度待测吸光度A AU U试剂空白吸光度试剂空白吸光度A AB B)KKK K为校准系数为校准系数 认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家
11、对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目一点终点法反应曲线一点终点法反应曲线 A单试剂一点终点法 B双试剂一点终点法认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目两点两点终点法点法(two point end assay)在被测物反应或指示反应尚未开始时,选择第一在被测物反应或指示反应尚未开始时,选择第一个吸光度,在反应到达终点或平衡时选择第二个吸个吸光度,在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度,此两点吸光度之差用于计算结果。光度,此两点吸光度之差用于计算结果。计算公式为:计算公式为:C CU U=(待测吸光度待测吸
12、光度A A2 2待测吸光度待测吸光度A A1 1)KK。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目 两点终点法反应曲线两点终点法反应曲线 A单试剂两点终点法 B双试剂两点终点法 认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目 该法能有效地消除溶该法能有效地消除溶血血(hemolysis)hemolysis)、黄疸黄疸(icterusicterus)和脂浊和脂浊(lipo-turbidlipo-turbid)等样品等样品本身光吸收造成的干扰。本身光吸
13、收造成的干扰。血红蛋白、胆红素和脂浊的血红蛋白、胆红素和脂浊的光吸收曲线光吸收曲线 认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目(二)固定(二)固定时间法法(fixed-time assay)指在时间指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点,此吸光度曲线上选择两个测光点,此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度,这两两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度,这两点的吸光度差值用于结果计算。有时也称此法为点的吸光度差值用于结果计算。有时也称此法为两点法两点法 。计算公式与两点终点法相同,计算公式与两点终点法相同,C CU U=(A=
14、(A2 2-A-A1 1)K)K。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目固定固定时间法反法反应曲曲线 A单试剂固定时间法 B双试剂固定时间法该分析方法有助于解决某些反应的非特异性问题。该分析方法有助于解决某些反应的非特异性问题。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目连续监测法连续监测法(continuous monitoring assaycontinuous monitoring assay)又称又称速率法速率法(rate assay
15、rate assay),),是在测定酶活性或用是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲吸光度曲线中线性期(各两点间吸光度差值相等)的吸光线中线性期(各两点间吸光度差值相等)的吸光度值,并以此线性期的单位吸光度变化值度值,并以此线性期的单位吸光度变化值(A/minA/min)计算结果。计算结果。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目 连续监测法反法反应曲曲线 A单试剂连续监测法 B双试剂连续监测法 认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来
16、国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目酶促反促反应的的线性段性段 1 1及及5 5值偏小,而值偏小,而2 23 34 4,故故A A1 1点至点至A A4 4点属线性段点属线性段 认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目连续监测法的法的优点点 可以确定线性期并计算可以确定线性期并计算A/minA/min,根据此值再根据此值再准确地计算酶活性,因而使自动生化分析仪在酶准确地计算酶活性,因而使自动生化分析仪在酶活性测定方面显著地优于手工法。连续监测法也活性测定方面显著地优于手工法。连续监测法也可用于测定呈线性
17、反应的代谢物浓度,一般是某可用于测定呈线性反应的代谢物浓度,一般是某些基于酶法测定的代谢物。些基于酶法测定的代谢物。酶活性(酶活性(U/LU/L)A/minA/min理论(或校准)理论(或校准)K K值。值。代谢物浓度代谢物浓度C CU U=A/min=A/min校准校准K K值。值。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目理理论K K值 多用于酶活性测定中,因酶活性尚无公认的多用于酶活性测定中,因酶活性尚无公认的校准品可用。根据酶活性的国际单位定义得出酶校准品可用。根据酶活性的国际单位定义得出酶活性的计算公式为:活
18、性的计算公式为:酶活性酶活性(U/L)=A/minU/L)=A/min将此式中将此式中 以以K K来表示,即为来表示,即为理论理论K K值值可作为分析参数输入到分析仪中。可作为分析参数输入到分析仪中。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目采用理采用理论K K值的前提的前提 应当是样品和试剂的加量准确、比色杯光径应当是样品和试剂的加量准确、比色杯光径准确、温度控制精确以及波长准确等。但事实上准确、温度控制精确以及波长准确等。但事实上由于各型分析仪在注射器容积步进电机精度、滤由于各型分析仪在注射器容积步进电机精度、滤光
19、片带宽等方面的差异,可造成样品和试剂加量光片带宽等方面的差异,可造成样品和试剂加量以及吸光度检测的偏差,温度的影响有时也非常以及吸光度检测的偏差,温度的影响有时也非常大。大。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目实际摩尔吸光系数和实际摩尔吸光系数和K K值测定值测定 由于摩尔吸光系数受比色杯光径、波长等的影响,书本上或试剂厂家提供的理论摩尔吸光系数可能与实际所用分析仪所测的不同,因而有必要获得实际的摩尔吸光系数,然后来计算理论K值。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高
20、度重视,已经展开了“精准扶贫”项目NADH(NADPH)摩摩尔吸光系数的吸光系数的测定定 NADH NADH(NADPHNADPH)没有标准纯制品,而且没有标准纯制品,而且配成溶液后稳定性又较差,不能直接用配成溶液后稳定性又较差,不能直接用NADH NADH 或或NADPHNADPH标准液来校正仪器,须通标准液来校正仪器,须通过有过有NADNAD+(NADP(NADP+)参与的反应途径。参与的反应途径。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目用已糖激酶用已糖激酶(HK)HK)或葡萄糖脱氢酶或葡萄糖脱氢酶(GD)GD)
21、方法测定方法测定葡萄糖时,葡萄糖的消耗与葡萄糖时,葡萄糖的消耗与NADHNADH的生成呈等摩的生成呈等摩尔关系。葡萄糖有标准纯制品。尔关系。葡萄糖有标准纯制品。根据公式根据公式A=bCA=bC,已知比色杯光径已知比色杯光径b b和葡萄糖标和葡萄糖标准液浓度,测得葡萄糖标准管的吸光度准液浓度,测得葡萄糖标准管的吸光度A A后便可后便可计算出计算出NADHNADH(NADPHNADPH)的摩尔吸光系数的摩尔吸光系数 为为 A/bCA/bC。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目测定方法测定方法 葡萄糖标准液浓度为葡萄糖
22、标准液浓度为1 1Ommo1/L(0.01mol/L)Ommo1/L(0.01mol/L),标准液加入量标准液加入量为为3.53.5LL,酶试剂加入量为酶试剂加入量为335335LL,比色杯光径为比色杯光径为0.70.7cmcm,在在340340nmnm测得吸光度为测得吸光度为0.4650.465,则实测,则实测NADHNADH摩尔吸光系数摩尔吸光系数 =64246424,即在此台分析仪上,即在此台分析仪上340340nmnm波长处测得波长处测得NADHNADH(NADPHNADPH)的摩尔吸光系数为的摩尔吸光系数为64246424,而理论上而理论上NADHNADH(NADPHNADPH)的的
23、 为为62206220。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目校准校准K K值值 酶活性校准品经校准操作后由分析仪自动计算得酶活性校准品经校准操作后由分析仪自动计算得出。在进行酶学测定时,如果分析条件的变化如温出。在进行酶学测定时,如果分析条件的变化如温度、样品试剂加量和吸光度检测偏差可同等程度地度、样品试剂加量和吸光度检测偏差可同等程度地影响校准物和待测样品,则使用校准品能进行补偿。影响校准物和待测样品,则使用校准品能进行补偿。一般来说以使用一般来说以使用校准校准K K值值为好,但必须有两个先决为好,但必须有两个
24、先决条件:条件:必须使用配套的试剂;必须使用配套的试剂;必须使用配套的必须使用配套的高质量的校准品,该校准品应具有高质量的校准品,该校准品应具有溯源性溯源性。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目(四)透射比浊法(四)透射比浊法 抗原与相应的抗体结合形成的抗原与相应的抗体结合形成的免疫复合物免疫复合物,在,在反应液中具有一定的浊度,可由一般分光光度法进反应液中具有一定的浊度,可由一般分光光度法进行行透射比浊透射比浊(transmission turbidimetrytransmission turbidimetry
25、)测定,可用测定,可用于某些蛋白质和药物浓度等的测定。该法须做于某些蛋白质和药物浓度等的测定。该法须做多点多点校准校准,再经,再经非线性回归非线性回归,求出抗原或抗体的含量。,求出抗原或抗体的含量。认识到了贫困户贫困的根本原因,才能开始对症下药,然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视,已经展开了“精准扶贫”项目常用生化检测项目分析方法举例常用生化检测项目分析方法举例 1 1终点法检测终点法检测 常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)
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