课题3[1]血红蛋白的提取和分离 (3).ppt

《课题3[1]血红蛋白的提取和分离 (3).ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《课题3[1]血红蛋白的提取和分离 (3).ppt（55页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、课题课题3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离专题专题5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术思考思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。不同物理或化学性质的生物大分子。思考思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来

2、分离不同蛋白质。和力等等，可以用来分离不同蛋白质。思考思考3 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？的何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构变性、变性、空间结构思考思考4 人们用鸡的红细胞提取人们用鸡的红细胞提取DNA，用人用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便便于进行于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。提取血红蛋白。一

3、、基础知识：一、基础知识：凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）具多孔的凝胶就叫分子筛）2、概念：概念：根据被根据被分离物质的蛋白质相对分离物质的蛋白质相对分子质量的大小分子质量的大小，利用具有网状结构的凝，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。胶的分子筛作用，来进行分离。3、原理：、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（对（）的蛋白质容易进入）的蛋白质容易进入凝

4、胶内部的通道，路程（凝胶内部的通道，路程（），移动速），移动速度（度（），而（），而（）的蛋白）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（）移动，路程（），移动速度（），移动速度（），），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。4、具体过程、具体过程相对分子质量较小相对分子质量较小较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快凝胶色谱法分离蛋白质的原理凝胶色谱法分离蛋白质的原理 1、概念：在一定的范围内，能对抗外、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液

5、来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。缓冲溶液：缓冲溶液：2、作用：、作用：能够抵制（能够抵制（）的对溶液）的对溶液的（的（）的影响，维持）的影响，维持PH基本不变。基本不变。外界的酸或碱外界的酸或碱PH值值 3、缓冲溶液的配制、缓冲溶液的配制 通常由（通常由（）种缓冲剂溶解于水）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（中配制而成。调节缓冲剂的（）就可以制得（就可以制得（）使用的）使用的缓冲液。缓冲液。12使用比例使用比例在不同在不同PH范围内范围内 思考：说出人

6、体血液中缓冲液。思考：说出人体血液中缓冲液。NaH2PO4 /Na2HPO4H2CO3 /NaHCO3电泳：电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。生迁移的过程。在血红蛋白整个实验室中用的缓冲在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是液是磷酸缓冲液磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模，目的是利用缓冲液模拟细胞内的拟细胞内的PHPH环境，保证血红蛋白的正环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）料的科学研究（活性）2、原理：许多重要的生物大分子，如（、原理：许多重要的生物大分子，如（）等都具有）等

7、都具有()在在()下下，这些基团会带上（，这些基团会带上（）。在。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其电场的作用下，这些带电分子会向着与其（）移动。电泳利用了待分离样品中各种分子移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（）以及分子本身（）以及分子本身（）、（）、（）的）的不同使带电分子产生不不同使带电分子产生不同的（同的（），从而实现样品中各），从而实现样品中各种分子的分离。种分子的分离。多肽、核酸多肽、核酸可解离的基团可解离的基团正电或负电正电或负电所带电荷相反的电极所带电荷相反的电极带电性质的差异带电性质的差异大小大小形状形状迁移速度迁移速度一定的一定的PH分类：分类：琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝

8、胶电泳和和聚丙稀酰胺凝胶电泳。聚丙稀酰胺凝胶电泳。测定（测定（）通）通常用十二烷基硫酸钠（常用十二烷基硫酸钠（SDS）聚丙稀聚丙稀酰胺凝胶电泳酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量蛋白质相对分子质量为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入中加入()。由几条肽链组成的蛋白质。由几条肽链组成的蛋白质复合体在复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，的作用下会解聚成单条肽链，因因此测定的结果只是此测定的结果只是()。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，复合物，SDS所所带带负电荷负电荷的量大大超过了蛋白质分子原的量大大超过了蛋白质分子原

9、有电荷量。有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于荷差别，使电泳迁移率完全取决于()。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。SDS单条肽链的分子量单条肽链的分子量分子的大小分子的大小电泳检测结果电泳检测结果琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳（四）血红蛋白（四）血红蛋白n在红细胞的组成中，在红细胞的组成中，约约90%是血红蛋白。是血红蛋白。它由它由四个肽链四个肽链组成，组成，包括两个包括两个肽链肽链和和两个两个肽链肽链。每条。每条

10、肽链环绕肽链环绕一个一个亚铁血血红素素基基团，可携，可携带一一分子氧或一分子二氧分子氧或一分子二氧化碳化碳。血。血红蛋白因含蛋白因含血血红素而呈素而呈现红色。色。二、实验操作二、实验操作n蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：n（1）样品处理：包括红细胞的洗涤；血红）样品处理：包括红细胞的洗涤；血红蛋白释放；分离血红蛋白溶液等操作收集蛋白释放；分离血红蛋白溶液等操作收集到的血红蛋白溶液。到的血红蛋白溶液。n（2）粗分离）粗分离(透析透析)：透析除去分子较小的：透析除去分子较小的杂质。杂质。n（3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质

11、蛋白质除去。的杂质蛋白质除去。n（4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。鉴定。二二 实验操作实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：蛋白质的提取和分离一般分为四步：1.样品处理样品处理血血液液血浆血浆水分水分固体物质固体物质血浆蛋白血浆蛋白无机盐无机盐磷脂磷脂葡萄糖等葡萄糖等血细胞血细胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多）（最多）血红血红蛋白蛋白（）两个两个a a肽链肽链两个两个一肽链肽链样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定共四条肽链共四条肽链90（一）样品处理（一）样品处理n1、红细胞的洗涤：、红细胞的洗涤：n目的是去除杂蛋白。要

12、加入柠檬酸钠防止血液凝目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。用生理盐水洗涤。n2、血红蛋白的释放：、血红蛋白的释放：n在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放n3、分离血红蛋白溶液：、分离血红蛋白溶液：n离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。斗分出红色透明液体。n4、透析：、透析：n装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为为7.0）透）透析。析。1.洗洗 涤涤 红红

13、 细细 胞胞阅读思考：洗涤的目的是什么？阅读思考：洗涤的目的是什么？（去除杂蛋白）（去除杂蛋白）洗涤过程洗涤过程：血液血液100mL3g柠檬酸钠柠檬酸钠低速离心低速离心2 min红细胞红细胞血血 浆浆吸出血浆吸出血浆红细胞红细胞5倍体积生理盐水倍体积生理盐水缓慢搅拌缓慢搅拌10min重复洗涤重复洗涤3次，直至上清液没有黄色次，直至上清液没有黄色红细胞的洗涤红细胞的洗涤2.释放血红蛋白释放血红蛋白阅读思考：阅读思考：1.释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质？哪些物质？2.为了加速释放过程，采取了什么措施？为了加速释放过程，采取了什么措施？目

14、的分析：目的分析：1.蒸馏水的作用是蒸馏水的作用是_。2.加入甲苯的作用是加入甲苯的作用是_。3.充分搅拌的目的是充分搅拌的目的是_。使使红细胞大量吸水胀裂红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的细胞膜溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂加速红细胞的破裂3.分离血红蛋白分离血红蛋白分离过程分离过程红细胞红细胞混合液混合液高速离心高速离心10min 离心管离心管滤纸滤纸过滤过滤脂类脂类物质物质烧杯烧杯红色透明液体红色透明液体分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液有机溶剂有机溶剂 无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层脂类物质脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液血红蛋白溶液 红色透明液体红色透明

15、液体红细胞破碎物沉淀红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物暗红色沉淀物二、粗分离二、粗分离透析血红蛋白透析血红蛋白20mmol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液1mL1mL利用透析袋透析(三三)纯化凝胶色谱操作纯化凝胶色谱操作1.凝胶色谱柱的制作：凝胶色谱柱的制作：2.凝胶色谱柱的装填：凝胶色谱柱的装填：3.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱3.样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱2.2.凝胶色谱制作凝胶色谱制作1 1）凝胶色谱柱的制作）凝胶色谱柱的制作取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。管，两端需用砂纸磨平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔 挖出凹穴挖出凹穴 安

16、装移液管安装移液管头部头部 覆盖尼龙网覆盖尼龙网，再用，再用100100目尼龙纱包目尼龙纱包好。好。2 2）凝胶色谱柱填料的处理）凝胶色谱柱填料的处理（1 1）凝胶的选择：）凝胶的选择：（）（）（G-75G-75）“G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度表示凝胶的交联程度，膨胀程度 及分离范围。及分离范围。7575表示凝胶的得水值，即每克凝胶表示凝胶的得水值，即每克凝胶 膨胀时吸水膨胀时吸水7.57.5克。克。（2 2）方法：）方法：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于（的凝胶浸泡于（）中充分溶胀后，）中充分溶胀后，配成（配成（）。）。蒸馏水蒸馏水凝胶悬浮

17、液凝胶悬浮液交联葡聚糖凝胶交联葡聚糖凝胶固定：将色谱柱处置固定在支架上固定：将色谱柱处置固定在支架上装填：将（装填：将（）一次性的一次性的缓慢倒入（缓慢倒入（）内，装填时轻轻敲）内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。动色谱柱，使凝胶填装均匀。（3）凝胶色谱柱的装填方法）凝胶色谱柱的装填方法凝胶悬浮液凝胶悬浮液色谱柱色谱柱洗涤平衡洗涤平衡 装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在()()高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲磷酸缓冲液（液（pHpH为为7.07.0）充分（）充分（）1212小时。小时。洗

18、涤平衡洗涤平衡50cm50cm3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱加样前加样前 打开下端出口，使柱内凝打开下端出口，使柱内凝胶面上的（胶面上的（）缓慢下）缓慢下降到与（降到与（）平齐，）平齐，关闭出口关闭出口缓冲液缓冲液凝胶面凝胶面加加透析透析样样品品注意正确的加样操作：注意正确的加样操作：不要触及破坏凝胶面不要触及破坏凝胶面 贴壁加样贴壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动调整缓冲液面：与凝胶面平齐调整缓冲液面：与凝胶面平齐滴加透析样品：用（滴加透析样品：用（）将）将1ml1ml（）的样品加到色谱柱的（的样品加到色谱柱的（）样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：（）洗脱：打开下

19、端，用磷酸缓冲液洗脱洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱收集：收集：待（待（）接近色谱柱底接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每（端时，用试管收集流出液，每（）收集一试管连续收集收集一试管连续收集吸管吸管透析液透析液顶端顶端样品完全进凝胶层样品完全进凝胶层5ml红色的蛋白质红色的蛋白质开始进行层析收集得到的纯化后的蛋白血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。离过程非常直观，大大简化了实验操作。思考思考

20、血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即（）；然后通过凝胶色谱法）；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品的（的（）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行（行（）。）。思考思考样

21、品的粗分离样品的粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定（四）纯度鉴定：凝胶电泳观察你处理的血液样品离心后是否分层观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），如果分层不明显，），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。蛋白的提取纯度。三三 实验结果分析与评价实验结果分析与评价注意：注意：凝胶装填时尽量紧密，以降

22、低凝胶凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。的洗脱次序，降低分离效果。洗涤平衡洗涤平衡注意液面不要低于凝胶表面，否注意液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。否则重新填装。由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝由于凝胶

23、是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，观察色带移动或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。以消除气泡，消除不了时要重新装柱。如果凝胶色谱柱装填得

24、很成功、分离操作也如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。注意事项注意事项1.红细胞的洗涤：红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。洗涤次数不能过少；低速、短时离心。2.凝胶的预处理：凝胶的预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡3.色谱柱的装填

25、：色谱柱的装填：装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。4.色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。1、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是关于蛋白质的叙述，正确的是A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分

26、子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质D 二者根本无法比较二者根本无法比较教学反馈教学反馈 1 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。A A分子的大小分子的大小 B B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C C带电荷的多少带电荷的多少 D D溶解度溶解度2 2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（）基本不变。）基本不变。A A温度温度 B pH CB pH C渗透压渗透压 D D氧气浓度氧气浓度3 3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷

27、（电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。）的电极移动。A A相同相同 B B相反相反 C C相对相对 D D相向相向4.4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（）与氧气的运）与氧气的运输有关。输有关。A A血红蛋白血红蛋白 B B肌红蛋白肌红蛋白 C C肌动蛋白肌动蛋白 D D肌球蛋白肌球蛋白B BB BB BA A5 5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）的含量最多。的含量最多。A A白细胞白细胞 B B血小板血小板 C C红细胞红细胞 D D淋巴细胞淋巴细胞6 6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝

28、血为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（剂（）。）。A.A.NaClNaCl B.B.甲苯甲苯 C.C.蒸馏水蒸馏水 D.D.柠檬酸钠柠檬酸钠7 7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为明显看到试管中的溶液分为4 4层，层，其中其中第第3 3层是（层是（）A A无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层 B B脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层 C C血红蛋白的水溶液血红蛋白的水溶液 D D其他杂质的暗红色沉淀物其他杂质的暗红色沉淀物C CD DC C8、使用、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A 电荷的多少电荷的多少 B 分子的大小分子的大小C 肽链的多少肽链的多少 D 分子形状的差异分子形状的差异9、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A 调节调节pH B 维持红细胞的能量供应维持红细胞的能量供应C 防止微生物生长防止微生物生长 D 防止血液凝固防止血液凝固10、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序分层顺序自上而下自上而下是：是：有有机溶剂机溶剂-脂脂类物质类物质-血血红蛋白溶液红蛋白溶液-红红细胞破碎物沉淀细胞破碎物沉淀