《专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数》课件(共46张PPT)资料.ppt

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1、专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件(共46张PPT)资料课题课题2 22 2、选择培养基、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做长的培养基，称做选择培养基。选择培养基。（一）筛选菌株（一）筛选菌株一、研究思路一、研究思路加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基 细菌不生长，细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长酵母菌、霉菌等真菌能生长不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基 分离分离自养型微生物自养型微生物 1.在培养基的配方中，为微生物的生

2、长提供碳源和在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素碳源是葡萄糖，氮源是尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。阅读阅读22页本课题使用的培养基配方页本课题使用的培养基配方二、统计菌落数目二、统计菌落数目显微镜直接计数法显微镜直接计数法稀释涂

3、布平板法（活菌计数法）稀释涂布平板法（活菌计数法）（二）微生物计数（二）微生物计数1 1、显微镜直接计数法、显微镜直接计数法1mm一、研究思路一、研究思路每一个大方格边长为每一个大方格边长为 1mm，则每一大方格的面积为，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所，所以计数室的容积为以计数室的容积为0.1mm3。1mm下面以一个大方格有下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为，菌液稀释倍数为B，那么，一个，那么

4、，一个大方格中的总菌数是多少大方格中的总菌数是多少?1ml菌液中的总菌数菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3）5AB1045A缺点：缺点：不能区分死菌与活菌不能区分死菌与活菌2、统计菌落数目统计菌落数目稀释涂布平板法稀释涂布平板法（二）微生物计数（二）微生物计数平板菌落数统计注意事项1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个；2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；3、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。、菌落数目过多时，可以合理采用样方法。某班级菌落数统计表格某班级菌落数统计表格

5、平板平板组别组别恰当的稀释度、正确的涂布操作恰当的稀释度、正确的涂布操作是是成功地统计菌落数目的关键。成功地统计菌落数目的关键。（取样（取样0.1mL,稀释倍数稀释倍数106）【例例1 1】某同学在稀释倍数为某同学在稀释倍数为10106 6的培养基上的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为测得平板上的菌落数的平均值为234234，那么每，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为液的体积为0.1 mL0.1 mL）A.2.3410A.2.34108 8B.2.3410B.2.34109 9C.234C.234D.23.4D.23.4思考思考1 1

6、：如何根据平板上的菌落数推测：如何根据平板上的菌落数推测出每出每mLmL样品中的菌株数？样品中的菌株数？14【解析解析】选选B B。稀释倍数为。稀释倍数为10106 6，0.1 mL0.1 mL稀稀释液的菌落数的平均值为释液的菌落数的平均值为234234，则每毫升样，则每毫升样品中菌落数就为品中菌落数就为234/0.110234/0.1106 6=2.34102.34109 9。每每mL样品中的菌株数样品中的菌株数=（CV）MC C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V V：涂布平板时所用的稀释液的体积：涂布平板时所用的稀释液的体积M M：稀释倍数：稀释倍数

7、思考思考2 2：为什么测平板上的菌落数可以：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？推测样品中的活菌的数目？当当样品的稀释度足够高样品的稀释度足够高时，培养基表面生时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落为了保证结果准确，一般选用菌落数在数在30300的平板进行计数。的平板进行计数。思考思考3 3：统计的菌落数往往比活菌的：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？实际数目

8、高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示果一般用菌落数而不是活菌数来表示。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。实例分析实例分析1启 示在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，

9、一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。实例分析实例分析2 2想一想：想一想：A同学和其他同学所得实验结果差异同学和其他同学所得实验结果差异 如此之大，请分析原因可能有哪些？如此之大，请分析原因可能有哪些？实例分析实例分析2 2想一想：你能通过设置对照，帮助想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？上述两个可能影响实验结果的因素吗？一种方案：一种方案：可以由其他同学用与可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。同学一样的土样进行实验。如果结果与如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无误；无误；如果结果

10、不同，则证明如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基同学存在操作失误或培养基的配制有问题。的配制有问题。实例分析实例分析想一想：你能通过设置对照，帮助想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除同学排除 上述两个可能影响实验结果的因素吗？上述两个可能影响实验结果的因素吗？另一种方案：另一种方案：将将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。实验结果要有说服力，对照的设置实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的！是必不可少的！实例启示实例启示设置对照实验的目的是什么

11、？排除实验操作、培养条件等无关变量对实验排除实验操作、培养条件等无关变量对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。结果的影响，提高实验结果的可信度。（三）实验基本原则（三）实验基本原则1、平行重复原则、平行重复原则2、对照原则、对照原则3、单一变量原则、单一变量原则一、研究思路一、研究思路实验名称：实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验原理：实验原理：实验目的：实验目的：材料用具：材料用具：方法步骤：方法步骤：1、分组编号、分组编号 2、处理（遵循实验设计的基本原则）、处理（遵循实验设计的基本原则）对照原则、单一变量原则（等量原则）对照原则、单一变量原则（

12、等量原则）科学性原则、平行重复原则科学性原则、平行重复原则 可行性原则可行性原则 3、观察记录（设计观察记录表）、观察记录（设计观察记录表）实验预期：实验预期：实验结果的分析与评价：实验结果的分析与评价：实验结论：实验结论：设计时请利用设计时请利用P23-P24的三个资料的三个资料二、实验设计二、实验设计实验名称：实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验原理：实验原理：实验目的：实验目的：材料用具：材料用具：方法步骤：方法步骤：1、分组编号、分组编号 2、处理（遵循实验设计的基本原则）、处理（遵循实验设计的基本原则）对照原则、单一变量原则（等量原则）对照原

13、则、单一变量原则（等量原则）科学性原则、平行重复原则科学性原则、平行重复原则 可行性原则可行性原则 3、观察记录（设计观察记录表）、观察记录（设计观察记录表）实验预期：实验预期：实验结果的分析与评价：实验结果的分析与评价：实验结论：实验结论：设计时请利用设计时请利用P23-P24的三个资料的三个资料二、实验设计二、实验设计实验设计实验设计实验名称：实验名称：实验目的：实验目的：实验原理：实验原理：实验用具：实验用具：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数将土壤中能够分解尿素的细菌筛选出来，将土壤中能够分解尿素的细菌筛选出来，并进行统计分析。并进行统计分析。1.提供以尿

14、素作为唯一氮源的培养基，原则上提供以尿素作为唯一氮源的培养基，原则上只有能分解尿素的培养基才能生长。只有能分解尿素的培养基才能生长。小铁铲、信封、酒精灯、培养皿、试管、试管架、小铁铲、信封、酒精灯、培养皿、试管、试管架、移液管、胶头滴管、蒸馏水、选择培养基、牛肉移液管、胶头滴管、蒸馏水、选择培养基、牛肉膏蛋白胨培养基等。膏蛋白胨培养基等。2.当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。实验设计实验设计土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数1.土壤取样土壤

15、取样2.制备培养基制备培养基3.样品稀释、取样涂布样品稀释、取样涂布4.微生物的培养、观察并记录结果微生物的培养、观察并记录结果5.细菌的计数细菌的计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 从肥沃、湿润的土壤中取样。先从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土铲去表层土3cm左右，再取样，将样左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。品装入事先准备好的信封中。实验步骤实验步骤1土壤取样土壤取样 制备制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基，准备好个选择培养基，准备好无菌试管和无菌试管和移液管移液管。实验步骤实验步骤2.制备培养基制备培养基 制

16、备制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和个牛肉膏蛋白胨培养基和15个个选择培养基，准备好选择培养基，准备好无菌试管和移液管无菌试管和移液管。注：每个稀释度下需要注：每个稀释度下需要3个选择培养基个选择培养基（平行重复原则），（平行重复原则），1个牛肉膏蛋白胨培养个牛肉膏蛋白胨培养基。选用稀释倍数为基。选用稀释倍数为103107的稀释液。的稀释液。实验步骤实验步骤2.制备培养基制备培养基为什么分离不同的微生物为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？用

17、的稀释范围相同吗？因为因为土壤中各类微生物的数量土壤中各类微生物的数量(单单位：株位：株/kg)是不同的是不同的，例如在干旱土壤，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为数约为2 185万，放线菌数约为万，放线菌数约为477万，万，霉菌数约为霉菌数约为23.1万。因此，万。因此，为获得不同为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离进行分离，同时还应当有针对性地提供，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。选择培养的条件。测定土壤中细菌的数量，一般选测定土壤中细菌的数量，一般选用用104、105和和106

18、倍的稀释液进行平板倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和和105倍稀释液；测定真菌的倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用数量，一般选用102、103和和104倍稀释倍稀释液液。注：注：样品的稀释样品的稀释 将将10g土样加入盛有土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥无菌生理盐水的锥形瓶中形瓶中,充分摇匀，吸取上清液充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至水的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释稀释度，并按照由度，并按照由107至至103稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板

19、涂布操作。按照浓度从低到高的进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。顺序涂布平板，不必更换移液管。实验步骤实验步骤3.样品稀释、取样涂布样品稀释、取样涂布注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。将涂布好的培养皿放在将涂布好的培养皿放在30下下培养。比较牛肉膏培养基和选择培培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。好记录。4.微生物的培养、观察并记录结果微生物

20、的培养、观察并记录结果不同种类的微生物，往往需要不不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。同的培养温度和培养时间。细菌细菌一般一般在在3037的温度下培养的温度下培养12d；放线放线菌菌一般在一般在2528的温度下培养的温度下培养57d；而；而霉菌霉菌一般在一般在2528的温度下培的温度下培养养34d。注：注：一般来说，在一定的培养条件下一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养相同的培养基、温度及培养时间基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的，同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落特征。当菌落数目稳定时，选取菌落数当菌落数目稳定时，选取菌落数在在30300的平板进行计数。在同一

21、稀的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对释度下，至少对3个平板进行重复计数，个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。稀释度计算出样品中细菌的数目。实验步骤实验步骤5.细菌的计数细菌的计数操作提示操作提示 一一 无菌操作无菌操作1 1、取取土土用用的的小小铁铁铲铲的的盛盛土土样样的的信信封封在在使使用用前前都都需要灭菌。需要灭菌。2 2、应应在在火火焰焰旁旁称称取取土土壤壤。在在火火焰焰附附近近将将称称好好的的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3 3、在在稀稀释释土土壤壤溶溶液液的的过过程程中中，

22、每每一一步步都都要要在在火火焰旁操作。焰旁操作。二二 做好标记做好标记注注明明培培养养基基种种类类、培培养养日日期期、平平板板培培养养样样品品的的稀释度等。稀释度等。三三 规划时间规划时间课题延伸课题延伸CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3脲酶pH升高升高指示剂（酚红）将变红指示剂（酚红）将变红挑选选择培养基中不同形态的菌落挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基接入含酚红培养基的斜面中的斜面中，观察能否变红。，观察能否变红。1 1、结结合合对对照照，分分析析培培养养物物中中是是否否有有杂杂菌菌污污染染以以及选择培养基是否筛选出一些菌落。及选择培养基是否筛选出一些菌落。2 2、是是否

23、否获获得得了了某某一一稀稀释释度度下下，菌菌落落数数目目在在3030300300的的平平板板。在在这这稀稀释释度度下下，是是否否至至少少有有两两个个平板的菌落数相近？平板的菌落数相近？3 3、你你统统计计的的每每克克土土壤壤中中含含有有能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的菌菌落落数数是是多多少少？与与其其他他同同学学的的结结果果接接近近吗吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？如果差异很大，可能是什么原因引起的？结果分析结果分析与评价与评价滤膜法滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上体积的水过滤后，将

24、滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。微生物计数微生物计数（一）空气中微生物总数的检测（一）空气中微生物总数的检测（二）水中细菌总数的检测（二）水中细菌总数的检测（三）牛奶中细菌的分离与计数（三）牛奶中细菌的分离与计数（四）土壤中真菌（或放线菌）的分（四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数离与计数六、相关链接六、相关链接此此课件下件下载可自行可自行编辑修改，修改，仅供参考！供参考！感感谢您的支持，我您的支持，我们努力做得更好！努力做得更好！谢谢!