医学专题一三、植物细胞骨架的光学显微镜观察.ppt

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1、 细胞细胞(xbo)生物学实验课件生物学实验课件第一页，共六页。实验三实验三 植物植物(zhw)细胞骨架的光学显微镜观细胞骨架的光学显微镜观察察一一.实验目的实验目的1.掌握考马斯亮蓝掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法。对植物细胞骨架染色的方法。2.通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察(gunch)(gunch)。二二.实验原理实验原理 细胞骨架细胞骨架(cytoskeleton)(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构

2、，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微丝、微管和中等纤维微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂本试验采用去垢剂TritonX-100TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋

3、白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝者用考马斯亮蓝R250R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。第二页，共六页。三三.实验实验(shyn)用品用品 1.1.材料：洋葱材料：洋葱 2.2.器材：器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子显微镜、载玻片、盖玻片、镊子(ni zi)(ni zi)、滴管、擦镜纸、滴管、擦镜纸、50ml50ml烧杯烧杯药药品品：pH6.8pH6.8的磷酸缓冲液的磷酸缓冲液；M-缓冲液缓冲液：50mmolL-1(PH6.7)咪唑咪唑、50mmolL-1KCl、0.5mmolL-1MgC12、1mmolL-1EGTA、0.1mmolL-1E

4、DTA、1mmolL-1巯基乙醇巯基乙醇、4mmolL-1甘油甘油、1mmolL-1HCl调调pH至至7.2；1%Triton-X1001%Triton-X100:用用M-缓冲液缓冲液配配制；制；3%戊二醛戊二醛：用：用pH6.8pH6.8的磷酸缓冲配制；的磷酸缓冲配制；0.2%0.2%考马斯亮蓝考马斯亮蓝 R250 R250染液染液：0.8g0.8g考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250R250、46.5ml46.5ml甲醇、甲醇、7ml7ml冰醋酸冰醋酸、46.5ml 46.5ml蒸馏水。蒸馏水。第三页，共六页。四四.实验方法实验方法(fngf)步骤步骤 1.1.撕取洋葱鳞茎内表皮撕取洋葱鳞茎内表皮

5、1cm2若干片，置于小烧杯中。若干片，置于小烧杯中。2.2.用磷酸缓冲液（用磷酸缓冲液（pH6.8）提前浸泡）提前浸泡2小时小时(xiosh)(xiosh)左右。左右。3.3.吸去磷酸缓冲液，用吸去磷酸缓冲液，用1%TritonX100处理处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。加清晰。4.4.吸去吸去TritonX-100TritonX-100，用，用M-缓冲液洗缓冲液洗2次，每次次，每次5分钟。分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。缓冲液有稳定细胞骨架的作用。5.5.用用3%戊二醛固定戊二醛固定0.51h。6.6.用磷

6、酸缓冲液（用磷酸缓冲液（pH6.8）洗）洗2 2次，每次次，每次5 5分钟。分钟。7.7.考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250染色染色30分钟。分钟。8.8.蒸馏水洗蒸馏水洗2次。次。9.9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。五五.实验报告实验报告 1.1.绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。2.2.说明实验过程中各步骤处理的作用。说明实验过程中各步骤处理的作用。第四页，共六页。细胞骨架细胞骨架第五页，共六页。内容(nirng)总结细胞生物学实验课件。2.通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握(zhngw)植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运。本试验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的。2.用磷酸缓冲液（pH6.8）提前浸泡2小时左右。9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。1.绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。细胞骨架第六页，共六页。