液相色谱的方法开发梯度方法幻灯片.ppt

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1、液相色谱的方法开发液相色谱的方法开发梯度方法梯度方法第1页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度洗脱的特点梯度洗脱的特点优点.单位时间的分离能力增加.检测灵敏度提高缺点.仪器设备要求高.不适合某些检测方式.柱需再生.定量分析的重复性较低第2页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度的洗脱方式梯度的洗脱方式高压梯度及低压梯度第3页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度洗脱的可变参数梯度洗脱的可变参数A及B液的成分和化学特性梯度的陡度梯度的变化形状第4页，共20页，编辑于2022年，星期日如不用梯度：分离不理想如不用梯度：分离不理想第5页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度条件的优化梯度条

2、件的优化第6页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度曲线的变化梯度曲线的变化 凹线凹线第7页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度曲线的变化梯度曲线的变化 凸线凸线第8页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度平衡时间的影响（一）梯度平衡时间的影响（一）10分钟的梯度，6分钟的平衡时间色谱图不重复第9页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度平衡时间的影响（二）梯度平衡时间的影响（二）平衡时间6分钟平衡时间7分钟平衡时间8分钟平衡时间9分钟 平衡时间从6到7分钟，第一个峰的保留时间有明显的变化，说明6到7分钟的平衡时间不足，而8到9分钟变化不大因而大于这个时间时，平衡充足。第10页，共20

3、页，编辑于2022年，星期日有机污染物的影响（一）有机污染物的影响（一）50ml超纯水的有机物污染状态第11页，共20页，编辑于2022年，星期日有机污染物的影响（二）有机污染物的影响（二）“三蒸水”有大量的有机污染物不适合梯度分析第12页，共20页，编辑于2022年，星期日有机污染物的影响（三）有机污染物的影响（三）典型的“实验室水”有大量的有机污染物不适合高灵敏度梯度分析第13页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第一步第一步 开发一个有9个烷基苯酮化合物的梯度方法，用C18柱，在最初的条件下(0-100%水-乙腈)，分离不理想。整个色谱峰组保留时间太长，

4、分离度也不好。第14页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第二步第二步 为使色谱峰前移，提高起始时乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分离得到改善。但是9个化合物出了10个色谱峰，说明有杂质存在，很可能是流动相水中的。第15页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第三步第三步 从空白梯度图显示，在同样的色谱条件，同样的检测灵敏度下，共有两个杂质峰。说明流动相水中的杂质在此条件下可能会对检测有影响。第16页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第四步第四步 空白梯度图同样品的色谱图进行对照后，我

5、们看到杂质（共两个峰）中的第一个小峰对第8个色谱峰有干扰，会使其定量分析结果不准确。第17页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第五步第五步 根据“梯度曲线下的面积越大，洗脱能力越强”的规律，试用#5曲线使3-9号峰提前(曲线5，50-100%B)，但是小峰仍没有分出来。第18页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第六步第六步 根据“梯度曲线下的面积越大，洗脱能力越强”的规律，试用#5曲线使3-9号峰提前，改用50-95%B见到好的现象。第19页，共20页，编辑于2022年，星期日梯度方法开发实例梯度方法开发实例-第七步第七步 最后用50-90%B，曲线4，得到好的结果。第20页，共20页，编辑于2022年，星期日