FOLIN酚试剂法测定蛋白质含量LOWRY基本法.pptx

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1、二 实验原理Folin-酚试剂（Folin-phenol reagent）的显色原理主要是：试剂中的磷钼酸-磷钨酸混合物被蛋白质还原，形成多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。包括两步反应。试剂甲使蛋白质发生烯醇化反应，在碱性条件下，形成蛋白质-铜络合物，从而使电子转移到混合酸中，大大地增强了酚试剂对蛋白质的敏感性。第1页/共12页 试剂乙（磷钼酸-磷钨酸混合液）受蛋白质中半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸等作用，使钨酸、钼酸两者同时失去1个、2个或3个氧原子，还原成含有多种还原型的混合酸，并且有特殊的蓝色。第2页/共12页第3页/共12页利用蓝色深浅与蛋白质浓度的关系，可制备标准曲线，测定样品

2、中蛋白质含量。本法可测定的蛋白质含量为15-280g/mL。第4页/共12页三 操作步骤 标准曲线制作 取试管6支，编号。按表7-2操作，加入牛血清白蛋白标准溶液（200g/mL），补足蒸馏水，使各管容量达1mL。算出各管中实际蛋白质含量，然后按顺序加入定量试剂甲、乙（各管加入乙试剂必须快速，并立即摇匀！），在分光光度计以上波长500nm比色，读取光密度。第5页/共12页表7-2 Folin-酚试剂法标准曲线制作步骤管号牛血清蛋白标准溶液/mL蒸馏水/mL各管加试剂甲2.5mL，混匀放置10min后，加入试剂乙0.25mL，立即混匀，放置30min OD50010.20.820.40.630.

3、60.440.80.251.00601.0第6页/共12页2.以各标准溶液浓度为横坐标，各管的光密度为纵坐标作图，得标准曲线。标准曲线必须从零点开始出发，最好能成一直线。画好后，注明所用仪器的型号及编号、所用波长及测定方法、名称及制作日期。第7页/共12页 样品测定取试管3支，分为测定管和空白管和标准管。测定管内加入1mL待测样品溶液（适当稀释至25-280g/mL蛋白质）。操作步骤与制作标准曲线相同，见表7-3。第8页/共12页待测液mL蒸馏水mL各管加试剂甲2.5mL，混匀放置10min后，加入试剂乙0.25mL，立即混匀，放置10min后比色。OD500 空白管01.0测定管1.00标准管1.0（标准液）0第9页/共12页四 结果与计算根据光密度读数查得标准曲线，计算检测液内的蛋白质含量。进一步可根据检测溶液的稀释倍数及实际所要求的蛋白质浓度换算。本实验要求蛋白质含量浓度以g/L为单位，也可以与测定管同样操作的标准管按下式计算蛋白质含量。第10页/共12页测定管蛋白含量=标准管蛋白质含量测定管光密度标准管光密度第11页/共12页感谢您的观看！第12页/共12页