保健食品功效成分-杨大进(共81张PPT).pptx
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1、保健食品功效成分保健食品功效成分检测技术进展检测技术进展l l中国疾病预防控制中心营养与食中国疾病预防控制中心营养与食品安全所品安全所培训专用常见保健食品功效成分分类常见保健食品功效成分分类v氨基酸氨基酸v低聚糖和多糖低聚糖和多糖v维生素、矿物质维生素、矿物质v植物提取物植物提取物v动物性提取物动物性提取物v发酵产物类发酵产物类培训专用氨基酸类保健食品功效成分氨基酸类保健食品功效成分v必需氨基酸必需氨基酸v牛磺酸牛磺酸培训专用低聚糖类保健食品功效成分低聚糖类保健食品功效成分v多数可以通过液相色谱进行检测;多数可以通过液相色谱进行检测;v低聚果糖检测上还有一定的问题;低聚果糖检测上还有一定的问题
2、;v低聚半乳糖的检测比较复杂,需要通过酶低聚半乳糖的检测比较复杂,需要通过酶解等手段,通过在总半乳糖中减去游离和解等手段,通过在总半乳糖中减去游离和由乳糖生成的半乳糖,通过折算得到低聚由乳糖生成的半乳糖,通过折算得到低聚半乳糖含量。半乳糖含量。培训专用多糖类保健食品功效成分多糖类保健食品功效成分v定义明确定义明确v但实际操作难以实现,检测结果但实际操作难以实现,检测结果缺乏说服力。缺乏说服力。培训专用维生素、矿物质类保健食品维生素、矿物质类保健食品功效成分功效成分v脂溶性维生素脂溶性维生素v水溶性维生素水溶性维生素v类维生素类维生素v矿物质矿物质培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素Av
3、可采用相对简单的方法。可采用相对简单的方法。v相对简单的片剂和胶囊试样可不采用国家相对简单的片剂和胶囊试样可不采用国家标准直接采用异丙醇、己烷等溶剂提取;标准直接采用异丙醇、己烷等溶剂提取;婴儿配方奶粉等产品可使用胰酶和胃蛋白婴儿配方奶粉等产品可使用胰酶和胃蛋白酶处理,己烷等溶剂提取后测定视黄醇醋酶处理,己烷等溶剂提取后测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。酸酯或视黄醇棕榈酸酯。v视黄醇不稳定,但视黄醇醋酸酯和视黄醇视黄醇不稳定,但视黄醇醋酸酯和视黄醇棕榈酸酯相对稳定,采用外标法就能够保棕榈酸酯相对稳定,采用外标法就能够保证分析结果。证分析结果。培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素Ev维生
4、素维生素E的前处理方法与维生素的前处理方法与维生素A相似。相似。v目前对于维生素目前对于维生素E使用反相色谱法实现使用反相色谱法实现-、-、-、-4种结构全部分离比较困难。种结构全部分离比较困难。v通过正相柱进行上述通过正相柱进行上述4种结构分离相对容易。种结构分离相对容易。v通常保健食品中添加的基本为通常保健食品中添加的基本为-。培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素Dv现有国标只有使用现有国标只有使用GB/T 5413进行婴幼儿进行婴幼儿配方奶粉检测的方法。配方奶粉检测的方法。v该方法实际需要色谱分析该方法实际需要色谱分析2次,不能满足日次,不能满足日常实际检测。常实际检测。培训专用
5、脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素Dv钙钙+维生素维生素D等基质相对简单的保健食品检等基质相对简单的保健食品检测维生素测维生素D采用乙醇直接超声提取的方式采用乙醇直接超声提取的方式提取,无需净化,如维生素提取,无需净化,如维生素D含量偏低可含量偏低可使用氮吹仪浓缩。使用氮吹仪浓缩。培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素Dv对于含量低、蛋白和淀粉含量高采用大取对于含量低、蛋白和淀粉含量高采用大取样量,高碱度,辅以酶解的方式进行皂化。样量,高碱度,辅以酶解的方式进行皂化。v对于基质相对复杂的保健食品采用与维生对于基质相对复杂的保健食品采用与维生素素A、E类似的前处理方法,但皂化温度为类似的
6、前处理方法,但皂化温度为72。v流动相仍采用甲醇:水流动相仍采用甲醇:水=98:2,目前市售,目前市售95%的样品均可以得到较好的分离分析。的样品均可以得到较好的分离分析。培训专用AU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.00?2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.002.2472.6693.1313.4243.6394.2004.7645.3146.2977.1328.0748.1848.5048.98310.23510.86711.79512.37713.
7、66515.55016.99218.68319.96323.40725.13326.728维生素D培训专用维生素维生素D分析前处理注意事项分析前处理注意事项v由于用碱量大,应注意不时摇动。由于用碱量大,应注意不时摇动。v皂化温度不要超过皂化温度不要超过72,以防结构变化。,以防结构变化。v当色谱图出现不光滑、对称性差的现象时当色谱图出现不光滑、对称性差的现象时说明碱度不够,有干扰。说明碱度不够,有干扰。v含淀粉较多的产品应利用生物酶尽可能多含淀粉较多的产品应利用生物酶尽可能多地去除淀粉等。地去除淀粉等。培训专用培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素K2v需要检测维生素需要检测维生素K2的
8、保健食品较少。的保健食品较少。v采取用流动相提取的方式。采取用流动相提取的方式。v色谱柱:色谱柱:-Bondapak C18柱柱v流动相:乙醇:乙醚流动相:乙醇:乙醚=95:5v波长:波长:254nm培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素维生素维生素K1vGB/T 5009.158 2003在检测植物性食品在检测植物性食品中维生素中维生素K1时使用层析柱净化法,分析效时使用层析柱净化法,分析效果较好。果较好。vGB/T 5413在检测婴幼儿配方食品中维生在检测婴幼儿配方食品中维生素素K1时使用液液萃取法净化。时使用液液萃取法净化。v对于低含量样品的检测可使用锌柱柱后还对于低含量样品的检测可使用锌柱柱
9、后还原法使维生素原法使维生素K1产生强荧光,从而提高分产生强荧光,从而提高分析效果。析效果。培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素胡萝卜素胡萝卜素vGB/T 5009.832003有检测胡萝卜素的方有检测胡萝卜素的方法。法。v该方法中使用该方法中使用C18柱分离,但很多结构类柱分离,但很多结构类似的物质如似的物质如-,-胡胡萝萝卜素卜素难以分离。难以分离。培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素胡萝卜素胡萝卜素v现在使用专用的胡萝卜素色谱柱现在使用专用的胡萝卜素色谱柱:YMCTM Carotenoid S-5柱,柱,1504.6 mm,5m可以实现可以实现-胡胡萝萝卜素、卜素、-胡胡萝萝卜素、玉米黄卜素、玉
10、米黄质质、叶黄素等分析。、叶黄素等分析。C30 固定相固定相是是1994 年左右研发成功的一种反相吸附固定相。其反年左右研发成功的一种反相吸附固定相。其反相性增强,这种固定相在类胡萝卜素的相性增强,这种固定相在类胡萝卜素的HPLC分析中得分析中得到应用。由于到应用。由于C30 烷基的链长大致与胡萝卜素分子的烷基的链长大致与胡萝卜素分子的长度相当,因而增强了二者的相互作用。更长的烷基长度相当,因而增强了二者的相互作用。更长的烷基链增加了固定相的疏水性,极性与非极性类胡萝卜素链增加了固定相的疏水性,极性与非极性类胡萝卜素的保留时间增加,从而提高了柱效。的保留时间增加,从而提高了柱效。v流流动相相选
11、用:用:甲醇甲醇+甲基叔丁基醚甲基叔丁基醚+水水77519035 培训专用叶黄素叶黄素AU0.0000.0100.0200.0300.0400.0500.060?0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.005.477AU0.0000.0010.0020.0030.0040.0050.006?1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.006.509玉米黄质玉米黄质培训专用胡胡萝萝卜素卜素
12、胡胡萝萝卜素卜素AU0.0000.0010.0020.0030.004?0.00 2.004.00 6.008.00 10.00 12.0014.00 16.0018.00 20.0022.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00 40.0025.141AU0.0000.0020.0040.0060.0080.010?0.002.004.006.008.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 36.00 38.00
13、 40.0033.136培训专用胡萝卜素前处理方法的比较胡萝卜素前处理方法的比较v对于添加的胡萝卜素,直接提取法如提取对于添加的胡萝卜素,直接提取法如提取完全与皂化法没有差别。对于食品中天然完全与皂化法没有差别。对于食品中天然的胡萝卜素,皂化法可能处理得更完全。的胡萝卜素,皂化法可能处理得更完全。培训专用胡萝卜素分析中的注意事项胡萝卜素分析中的注意事项l在直接提取法中剧烈振摇和多次提取直至在直接提取法中剧烈振摇和多次提取直至提取液无色非常必要。提取液无色非常必要。l在直接提取法中使用离心可实现快速分层在直接提取法中使用离心可实现快速分层清晰,以缩短分析时间。清晰,以缩短分析时间。l在提取溶剂中
14、如果加入少量抗氧化剂可以在提取溶剂中如果加入少量抗氧化剂可以有效地保证结果的一致性。有效地保证结果的一致性。培训专用脂溶性维生素脂溶性维生素番茄红素(胡萝卜素)番茄红素(胡萝卜素)v作为胡萝卜素的一种既可以采用上述胡萝作为胡萝卜素的一种既可以采用上述胡萝卜素的方法一同分析也可以单独分析。卜素的方法一同分析也可以单独分析。v检测条件:检测条件:v紫外检测器:检测波长紫外检测器:检测波长472nmv色谱柱:色谱柱:supelcosil LC-18 v流动相流动相:甲醇:乙腈甲醇:乙腈=50:50v流速流速:1.0mL/min v30培训专用 番茄番茄红红素素标标准色准色谱图谱图 番茄番茄红红素素样
15、样品色品色谱图谱图培训专用番茄红素分析注意事项番茄红素分析注意事项v提取时应注意要加入少量抗氧化剂以保护提取时应注意要加入少量抗氧化剂以保护番茄红素,否则降解很快。番茄红素,否则降解很快。v由于番茄红素不稳定,通常会将其微囊化,由于番茄红素不稳定,通常会将其微囊化,故应选择其破囊试剂,如故应选择其破囊试剂,如N,N二甲基甲二甲基甲酰胺等,以及较长时间的超声提取。酰胺等,以及较长时间的超声提取。培训专用水溶性维生素水溶性维生素v由于天然保健食品中水溶性维生素含量由于天然保健食品中水溶性维生素含量相对较低,且有些维生素以多种形式存相对较低,且有些维生素以多种形式存在,因此不宜使用液相色谱法。目前国
16、在,因此不宜使用液相色谱法。目前国家标准分析方法较多地采用微生物法和家标准分析方法较多地采用微生物法和比色法、荧光法。比色法、荧光法。v对于添加的维生素,结构形式符合要求对于添加的维生素,结构形式符合要求且添加量较高,为直接使用液相色谱法且添加量较高,为直接使用液相色谱法提供了必要的条件。提供了必要的条件。培训专用水溶性维生素水溶性维生素维生素维生素B1、B6、烟、烟酸、烟酰胺酸、烟酰胺v目前在保健食品中基本采用目前在保健食品中基本采用GB 5009.1972003检测维生素检测维生素B1、B6(吡(吡哆醇)、烟酸和烟酰胺。哆醇)、烟酸和烟酰胺。v如果要检测维生素如果要检测维生素B6(吡哆醇)
17、、吡哆胺、(吡哆醇)、吡哆胺、吡哆醛全部三种形式,可使用稀酸作为提吡哆醛全部三种形式,可使用稀酸作为提取溶剂,稀酸作为流动相的液相色谱分析取溶剂,稀酸作为流动相的液相色谱分析方法。方法。培训专用水溶性维生素水溶性维生素维生素维生素B2v参照参照GB5009.1972003分析维生素分析维生素B2保保留时间比较短,且使用紫外检测器灵敏度留时间比较短,且使用紫外检测器灵敏度不高。不高。v对于维生素对于维生素B2仍采用将核黄素转化成光黄仍采用将核黄素转化成光黄素后再进行荧光分光光度检测的方法。该素后再进行荧光分光光度检测的方法。该方法在各类食品中均有采用,成熟但分析方法在各类食品中均有采用,成熟但分
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