阿卡波糖片的含量测定方案.docx

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1、阿卡波糖片的含量测定方案一、设计背景随着我国慢性病的不断增加，糖尿病困扰着很多的人群，而在治疗糖尿病的口服药中阿卡波糖在临床治疗上的效果是非常明显的，随着我国慢性病的不断增加，糖尿病困扰着很多的人群，而在治疗糖尿病的口服药中阿卡波糖、二甲双胍等药物在临床治疗上的效果是非常明显的，在治疗糖尿病的临床医学中，有人们常说的胰岛素注射液，也有口服药，在临床上的应用一般口服药相比胰岛素的注射液药剂量大且效果也是非常明显的，但是其副作业也是很大的，如果用量大或者长期使用，那么会造成肾损伤等疾病，虽然可依靠药物质量糖尿病，但是对于长期患有慢性病的患者还需要加强自身的锻炼，同时配合健康饮食（少油、少盐）等类型

2、的类型的食物。本方案研究利用高效液色谱法检测阿卡波糖的含量，充分利用先进的仪器结合对比分析的方式对阿卡波糖原料以及阿卡波糖对照品进行含量测定，分别记录相关数值，分析阿卡波糖的含量。二、设计依据经查阅“中国知网”相关的期刊文献资料及中国药典（2020年版）中的内容得知，目前，可用于阿卡波糖含量测定方法主要有紫外-可见分光光度法和高效液色谱法等。在研究中发现，紫外-可见分光光度法专属性较差，测量结果不够准确。而高效液相色谱法具有操作简单、分离效果好、检测快速、分析精密度高、结果准确度好等优点，适合测定制剂中的有效成分的含量，资料中有关采用高效液相色谱法测定制剂中主要成分含量的文献较多。以患者安全为

3、基础，对其药品质量进行严格把控，其相关企业对其生产产品场地及生产过程进行严格考察，同时，对其药品进行严格把控。本方案以中国药典（2020版）四部通则检验为依据，结合实际情况，对阿卡波糖片质量检验方案进行设计，其相关设计因素包含：检查、外观性状、含量测定、鉴别等项目因素。三、方案设计（一）仪器与试剂1.仪器（1）Agilent 1260 液相系统:G1311F四元梯度泵，G1329A自动进样器，生产厂家为杭州塞西科技有限公司，产自杭州瑞析科技有限公司G1316B柱温箱，美国G4212B DAD二极管阵列检测器；（2）德国赛多利斯BSA5201电子天平；（3）上海珂淮仪器公司KQ-800KDB型超

4、声仪；（4）上海鳌珍仪器公司DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱；（5）虔钧科技仪器有限公司RGX300EF微电脑人工气候箱；（6）Millipore 超纯水处理系统。2.试剂（1）辛烷磺酸钠、磷酸二氢铵、氢氧化钠为分析纯、盐酸、30% 过氧化氢；（2）磷酸为色谱纯、乙腈; （3）阿卡波糖对照品( 批号 AZW3M-HE，纯度 98. 0% ，东京化成工业株式会社)。（4）阿卡波糖片( 规 格: 含阿卡波糖均为每片 50 mg，批 号: BXG1251，德 国 Bayer HealthCare AG 公 司; 批 号: BXGN242，德国 Bayer Schering Pharma 公司;

5、批号: BXGXG71，德国 Bayer Pharma AG 公司; 批号: BXH- GKU1，Bayer Vital GmbH 公司) 。（二）测定方法1.色谱条件（1）色谱柱: Alltima C18色谱柱( )；（2）流动相:乙腈-10 mmolL 1磷酸二氢铵溶液(含0.04%辛烷磺酸钠，磷酸调至 3.3)(15：85)；（3）流速: ； （4）检测波长:200 nm；（5）柱温:30；（6）进样体积: 。2.对照品溶液制备 将对照品阿卡波糖以精密器具称取约 500 mg，放置在200mL量瓶内，加入适量水，利用超声器具进行溶解，并且以水进行稀释至刻度同时摇匀，完成配置对照品储备液。

6、使量取器具对对照品储备液进行量取，其用水进行稀释，稀释浓度分别约为0.25、0.40、0.50、0.60、0.75 。对照品溶液中间浓度作为工作液，其标准以浓度与对照品比例平衡，结合方法系统适应性研究。以 微孔过滤膜过滤后再将对照品进行进样。3.供试品溶液制备 将阿卡波糖片取20片后，进行精密称重，研磨成细末，再利用相应器具对其药品细末取试验用量，其用量约阿卡波糖50mg，将其放置容量为100 mL量瓶内，加入适量水，振荡1 min，超声(800w，40 kHz)15 min,以水进行稀释至刻度同时摇匀，经 微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。4.阴性溶液制备 根据阿卡波糖片其说明书中显示配

7、方，其药品成分中并不包含阿卡波糖阴性其对照粉末。以相应器具称取适量阴性对照粉末，按照“3”中方法进行操作，并且，制备其阴性溶液。5.方法学考察（1）专属性试验A.基质干扰试验 将混合对照品溶液、阴性溶液及供试品溶液单独进行分析，对其样品中辅料与其他成分进行考察，主要考察目的为是否对其测成分色谱峰具有影响。B.强制降解试验 为确保试验准确度与专属性，试验分别在氧化、加热、光照、碱化与酸化等相关条件下对其试验粉末进行强制降解试验，对其降解产物进行分析，考察其是否具备影响因素。样品制备: 将其阿卡波糖片借助器具进行精密称重，分成5份，每份重量约等于阿卡波糖 50 mg，每份约0.14g，将其放置容量

8、为100 mL量瓶内，加入适量水。热降解产物的考察: 将样品在其 105 烘箱内加热6 h，冷却至常温后，按照“3”项中方法制备其供试品溶液，以备用。光降解产物的考察: 将样品置于微电脑人工气候箱中，10000 lux光照强度下进行照射，其照射时间为6h,照射后，同“3”项中方法对其供试品溶液进行制备，以备用。氧化产物的考察:将2ml过氧化氢溶液分别加入至样品中，其浓度为30%，静置6h后，同“3”项中方法进行操作，制备其供试品溶液，以备用。酸降解产物的考察:将2mL盐酸溶液放入 样品中，静置6h后，以 氢氧化钠溶液中和成中性，同“3”项中方法进行操作，制备其供试品溶液。 碱降解产物的考察:

9、将2ml氢氧化钠溶液放入 样品中，静置6h后，以 盐酸溶液中和成中性，同“3”项中方法进行操作，制备其供试品溶液。将各条件降解供试品按“1”项中色谱条件进行操作，均应符合规定。 （2）系统适应性试验、线性关系考察、检测限及定量限 取标准工作液连续进样6次，对其阿卡波糖色谱峰其对称因子与平均理论塔板数进行考察。将“2”项中各浓度对照品溶液10 L 分别注入液相色谱仪，按“1”项中色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标作标准曲线，得到回归方程要求r不低于0.999。将对照品溶液逐级稀释后，进样测定；以信噪比( S /N)约为3.0 时其浓度为检测限，S /N 约为10.0时其浓度为定

10、量限，均应符合规定。 （3）精密度试验 将供试品溶液连续进样，进样次数为6次，计算得到阿卡波糖色谱峰峰面积，其RSD不高于2.0%，表明仪器其精密度良好。（4）重复性试验将同一批样品进行精密称取，份数为6份，按“3”项中方法对其供试品溶液进行配置后，分别进样测定，RSD不超过2.0%，表明方法其重复性良好。（5）回收率试验 取空白基质约0.14g，精密称定，再分别精密加入“2”项中对照品储备液16、20、24 mL，按“3”项中方法进行操作，并制备其各回收率溶液，进行进样测定。其每个浓度制备为3份，共计9份样品。以实际测得量和理论加入量比值作为回收率，计算回收率，其RSD不超过2.0%，表明方

11、法回收率良好。（6）稳定性试验 供试品溶液分别于配制后的 0，2，4，8，12，24 h进行进样分析，计算得出24 h 内阿卡波糖色谱峰峰面积，其RSD值不高于1.5%，表明供试品溶液在 24h内稳定性良好。6.样品测定 对批号BXHGKU1，BXG1251，BXGXG71与BXGN242及阿卡波糖片利用建立方法将其含量测定，测定样品份数为2份，获取其平均值。四、设计检测波长选择、试剂属性、提取溶剂辅助液及方法学验证为本方案中重要因素。因检测波长直接影响其试验流动相要求，所以，在检测波长选择中将200nm作为检测波长，其主要目的是为保障阿卡波糖得出最大响应值，并且降低干扰。在测定其吸光度中，主

12、要以流动相置1cm石英吸收至池中，并在空白路中不放置任何物质情况下进行测定。结合流动相范围200-400nm波长内扫描，并在200nm范围内测定其吸光度，结果得出，其流动相吸光度为0.1486，范围在220-240nm时，其吸光度小于0.080，范围在241-250nm时，其吸光度小于0.054，范围为251-300nm时，其吸光度小于0.049，范围为300-400nm时，其吸光度小于0.041，其要求均符合其HPLC检测中紫外检测器对流动相标准；为保障其测定结果准确性及专属性，对其试剂不同不同色谱柱进行分别检验，主要目的是为了对比其不同试剂中理论塔板数与阿卡波糖色谱峰对称性中因素，评比其试

13、验中最佳试剂；对其提取液进行选择，因水其自身特质，可保证色谱峰峰型良好的基础上，提取较为完全，并且其操作简便，最终以水为提取液；本方案主要参照较为有名的国际同行ICH方法学进行验证，对其强制降解试验给予系统化研究。在其强制降解试验中表明，其酸化、碱化、加热情况下未见明显色谱峰，仅在其氧化条件下发生其明显色谱峰，但对其阿卡波糖不具备干扰条件。本方案在原有测定方法基础上进行改进，其建立分析方法具有简便、快速、专属性强、准确等优势。结合方法学考察，其精密度稳定性、重复性及回收率均呈良好状态。综上所述，本测定方法可用于阿卡波糖片中质量监控及阿卡波糖准确评定具有一定参考意义，并值得推广。五、附件材料高效

14、液相色谱仪电子分析天平六、参考文献1兰浩,李文斌,陈勤.阿卡波糖片联合甘精胰岛素治疗糖尿病患者的临床效果分析J.当代医学,2019,25(14):31-34.2戴文鑫,梁健成.摆药机药盒中阿卡波糖的稳定性分析J.中国药物经济学,2019,14(05):63-67.3王俊慧.甘精胰岛素注射液联合阿卡波糖片治疗老年2型糖尿病的效果J.中国当代医药,2019,26(23):31-33.4黄明,张全英,徐凤华,王蒙,周文佳.以药效学参数为终点指标评价中国人群阿卡波糖片人体生物等效性J.中国药学杂志,2019,54(16):1323-1327.5林巧.甘精胰岛素与阿卡波糖片联合治疗糖尿病的临床效果分析J.世界最新医学信息文摘,2019,19(81):1-2.6谢辉.观察甘精胰岛素注射液联合阿卡波糖片治疗磺脲类继发性失效的2型糖尿病患者的临床疗效J.当代医学,2019,25(34):146-148.